(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211285397.4 (22)申请日 2022.10.20 (83)生物保 藏信息 CGMCC No. 24132 2021.12.20 CGMCC No. 24133 2021.12.20 (71)申请人 福建中烟工业有限责任公司 地址 361012 福建省厦门市思明区莲 岳路 118号中烟工业大厦 (72)发明人 何伟　李易非　范坚强　包可翔　 林志平　陈义强　李菁菁　陈善义　 李跃锋　颜奕华　林俭　 (74)专利代理 机构 中国贸促会专利商标事务所 有限公司 1 1038 专利代理师 赵剑峰　刘海罗(51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 9/26(2006.01) A24B 3/14(2006.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 枯草芽孢杆菌、 酶制剂、 再造烟叶基片及再 造烟叶 (57)摘要 本发明涉及一种枯草芽孢杆菌、 酶制剂、 再 造烟叶基片及再造烟叶。 其中， 再造烟叶基片或 再造烟叶的制备方法， 包括： (1)提供原料烟草浆 料； (2)向原料烟草浆料中添加枯草芽孢杆菌的 酶制剂， 进行反应， 获得酶处理浆料； (3)将酶处 理浆料加工为再造烟叶基片或再造烟叶。 权利要求书2页 说明书7页 附图2页 CN 115491332 A 2022.12.20 CN 115491332 A 1.一株枯草芽孢杆菌YLG ‑2， 其于2021年12月20日保存于中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中心(CGM CC)， 保藏号CGMCC No.24133。 2.一种枯草芽孢杆菌的酶制剂， 所述枯草芽孢杆菌的酶制剂来自权利要求1所述的枯 草芽孢杆菌 。 3.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌的酶制剂， 所述枯草芽孢杆菌的酶制剂的淀粉 酶活力为6 000～10000U/mL。 4.一种枯 草芽孢杆菌的酶制剂的制备 方法， 包括： a1)取权利要求1所述的枯 草芽孢杆菌 接种于LB培 养基， 进行培 养； a2)将上一 步产物接种于牛肉膏培 养基， 进行培 养； a3)对上一 步产物进行离心处 理， 去除菌体， 收集上清液； a4)对上清液进行超滤浓 缩， 收集浓 缩产物作为酶制剂。 5.根据权利要求 4所述的方法， 其具有以下一项或多 项特征： 步骤a1)中， 每5 0‑150mL的LB培 养基接种一个枯 草芽孢杆菌单菌落； 步骤a1)中， 所述培 养是指在28～37℃下培 养6～12h； 步骤a1)中， LB培养基的成分为： 胰蛋白胨8 ‑12g/L； 酵母提取物4 ‑6g/L； 氯化钠4 ‑6g/L， pH 7‑8。 6.根据权利要求 4所述的方法， 其具有以下一项或多 项特征： 步骤a2)中， 将上一 步产物按1 ‑5wt％的比例接种于牛肉膏培 养基； 步骤a2)中， 所述培 养是指在28～37℃下培 养12～24h。 在一些实施方案中， 步骤a2)中， 牛肉膏培养基的成分为： 2 ‑4g/L牛肉膏， 8 ‑12g/L蛋白 胨， 4‑6g/L氯化钠， pH＝7.0 ‑7.5。 7.根据权利要求 4所述的方法， 其具有以下一项或多 项特征： 步骤a4)中， 超滤浓缩是先使用100 ‑200KD的超滤膜洗脱大分子， 获得第一产物， 再将第 一产物使用20 ‑40KD的超滤膜浓 缩， 获得第二产物； 步骤a4)中， 经超滤浓 缩后， 最终浓 缩后的体积为浓 缩前体积的5～10％。 8.一种再造烟叶基片或再造烟叶的制备 方法， 包括： (1)提供原料烟草 浆料； (2)向原料烟草浆料中添加权利要求2所述的枯草芽孢杆菌的酶制剂， 进行反应， 获得 酶处理浆料； (3)将酶处 理浆料加工为再造烟叶基片或再造烟叶。 9.根据权利要求8所述的方法， 步骤(1)中， 原料烟草浆料的固形物含量为1.0～ 5.0wt％。 10.根据权利要求8所述的方法， 步骤(2)中， 枯草芽孢杆菌的酶制 剂的添加量为原料烟 草浆料的1～5wt％。 11.根据权利要求2所述的方法， 其具有以下一项或多 项特征： 步骤(2)中， 所述反应的温度为3 5‑50℃； 步骤(2)中， 所述反应的时间为12 ～24h。 12.一种再造烟叶基片或再造烟叶， 由权利要求8～1 1任一项所述的方法制备获得。 13.根据权利要求12所述的再造烟叶基片或再造烟叶， 其中含有异戊酸。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115491332 A 214.一种烟草制品， 含有权利要求12 ‑13任一项所述的再造烟叶基片或再造烟叶。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115491332 A 3