(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211313284.0 (22)申请日 2022.10.25 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO:M 202 21140 2022.07.21 (71)申请人 湖南省农业环境 生态研究所 地址 410125 湖南省长 沙市芙蓉区马坡岭 远大二路5 60号大院内 (72)发明人 鲁耀雄　高鹏　谢进　崔新卫　 谢坤英　 (74)专利代理 机构 深圳峰诚志合知识产权代理 有限公司 4 4525 专利代理师 张腾 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12R 1/07(2006.01) (54)发明名称 一种用于培养贝莱斯芽孢杆菌YFB3-1的液 体发酵培 养基及方法 (57)摘要 本发明属于微生物 技术领域， 具体涉及一种 用于培养贝莱斯芽孢杆菌YFB3 ‑1的液体发酵培 养基及方法。 所述液体发酵培养基包括以下物 质： 复合氨基酸7.5 ‑15g/L， 酵母粉6 ‑12g/L， NaCl   0.75‑1.5g/L， MgSO4·7H2O 0.75‑1.5g/L， 去离 子水1L。 本发明液体发酵培养基使用复合氨基酸 作为氮源， 复合氨基酸可诱导芽孢杆菌对西瓜根 系的趋化和定殖， 有利于芽孢杆菌的生长和繁 殖； 并且本发 明将可水溶性且溶剂 颜色淡的酵母 粉作为碳源来增加光通透性， 从而增加实际菌液 的浓度； 在本发明培养基和培养方法下， 能够生 产出具有高菌体浓度的Y FB3‑1生防菌菌剂， 菌体 浓度大为提高。 在施用相同用量的条件下可以有 效减少生防菌剂的用量， 节约成本 。 权利要求书1页 说明书6页 附图2页 CN 115478037 A 2022.12.16 CN 115478037 A 1.一种用于培养贝莱斯芽孢杆菌YFB3 ‑1的液体发酵培养基， 其特征在于， 所述液体发 酵培养基包括以下物质： 复合氨基酸7.5 ‑15g/L 酵母粉6‑12g/L NaCl 0.75‑1.5g/L MgSO4·7H2O 0.75‑1.5g/L 去离子水1L。 2.根据权利要求1所述的一种用于培养贝莱斯芽孢杆菌YFB3 ‑1的液体发酵培养基， 其 特征在于， 所述贝莱斯芽孢杆菌YFB3 ‑1在中国典型培养物保藏中心的保藏编号为CCTCC  M  20221140， 保藏机构地址： 湖北省武汉市武昌区八一路2 99号。 3.根据权利要求1所述的一种用于培养贝莱斯芽孢杆菌YFB3 ‑1的液体发酵培养基， 其 特征在于， 所述复合氨基酸以重量份数计， 由以下成分组成： 甘氨 酸5‑25份、 亮氨 酸5‑25份、 胱氨酸5‑25份、 色氨酸5 ‑25份、 甲硫氨酸1 ‑20份、 丝氨酸1 ‑20份、 酪氨酸1 ‑20份、 脯氨酸0 ‑20 份、 谷氨酸0 ‑20份、 天门冬氨酸0 ‑20份。 4.根据权利要求3所述的一种用于培养贝莱斯芽孢杆菌YFB3 ‑1的液体发酵培养基， 其 特征在于， 所述复合氨基酸以重量份数计， 由以下成分组成： 甘氨 酸15份、 亮氨 酸15份、 胱氨 酸15份、 色氨酸15份、 甲硫氨酸10份、 丝氨酸10份、 酪氨酸5份、 脯氨酸5份、 谷氨酸5份、 天门 冬氨酸5份。 5.一种利用权利要求1所述液体发酵培养基培养贝莱斯芽孢杆菌YFB3 ‑1的方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)菌种的活化： 将贝莱斯芽孢杆菌YFB3 ‑1进行解冻， 接着用接种 环挑取后划线在NA固 体培养基平皿上进行培养， 培养后挑选生长旺盛的单菌落连续划线2～3次， 活化好贝莱斯 芽孢杆菌 YFB3‑1。 (2)种子发酵液的制 备： 用接种铲取步骤(1)中所得活化好的贝莱斯芽孢杆菌YFB3 ‑1， 转接到装有灭菌冷却好的NB液体培养基三角瓶中， 置于恒温振荡培养箱培养， 制成种子发 酵液。 (3)液体发酵培养： 取步骤(2)中所得种子发酵液转接到装有灭菌冷却好的所述液体发 酵培养基三角瓶中， 置于恒温振荡培养箱中进行发酵培养， 得到高浓度贝莱斯芽孢杆菌 YFB3‑1。 6.根据权利 要求5所述的方法， 其特征在于， 步骤(1)中所述NA固体培养基的成分为： 蛋 白胨7.5‑15g， 牛肉膏2 ‑5g， NaCl 3‑6g， 琼脂18 ‑22g， 去离子 水1000mL； 所述NA固体培养基培 养温度为25 ‑45℃， 培养时间为3 6‑72h。 7.根据权利 要求5所述的方法， 其特征在于， 步骤(2)中所述NB 液体培养基的成分为： 蛋 白胨7.5‑15g， 牛肉膏2 ‑5g， NaCl 3‑6g， 去离子 水1000mL； 步骤(2)中所述恒温振荡培养箱培 养温度为25 ‑45℃， 培养时间为3 6‑72h， 转速为15 0‑210r/min。 8.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 步骤(3)中所述种子发酵液接种量为 2.5％‑2.8％， 所述液体发酵培养基初始pH为5.0 ‑9.0， 所述恒温振荡培养箱培养温度为25 ‑ 45℃， 培养时间为3 6‑72h， 转速为15 0‑210r/min。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115478037 A 2一种用于培养贝莱斯芽孢杆菌YF B3‑1的液体发酵培养基 及 方法 技术领域 [0001]本发明属于微生物技术领域， 具体涉及一种用于培养贝莱斯芽孢杆菌YFB3 ‑1的液 体发酵培 养基及方法。 背景技术 [0002]贝莱斯芽孢杆菌是近年被发现的一种新型生防芽孢杆菌， 对多种作物的病原真菌 以及部分细菌都具有较好的抑菌作用， 是大量研究人员开始关注的热点之一。 贝莱斯芽孢 杆菌能够有效抑制梨灰霉菌和 青霉病菌、 致病性尖孢镰刀菌、 大丽轮枝菌、 玉米大斑病菌、 辣椒疫霉病菌、 烟草赤星病菌和西 瓜炭疽病菌等病原真菌的生长， 还对柑橘溃疡病菌、 魔芋 软腐病菌等细菌性具有抗菌活性。 在水稻稻瘟病和叶温病、 番茄枯萎病、 白菜黑斑病等真菌 病害具有良好的田间防控效果。 贝莱斯芽孢 杆菌产生的抑菌次级代谢物会导致病原菌的菌 丝发生畸形， 原 生质凝聚， 从而引起菌丝的细菌破裂， 主要包括脂肽抗生素、 抗菌蛋白、 多肽 类、 聚酮类化合物 等抗菌活性物质。 贝莱斯芽孢杆菌还具有诱导抗性， 能够分泌促进植物 生 长的IAA。 [0003]近年来， 贝莱斯芽孢杆菌 的研究主要集中筛选鉴定和抗病特性等方面， 而有关其 发酵罐培养、 工业化生产和商业 化应用等方面处于初始阶段。 [0004]因此， 贝莱斯芽孢杆菌作为一种新型生防细菌具有非常广阔的潜在优势， 研究其 液体发酵培养基和培养方法， 从而能够提高贝莱斯芽孢杆菌的菌体浓度， 达到高效培养的 目的， 对生防菌剂的生产和应用都具有重要的现实意 义。 发明内容 [0005]针对上述缺点， 本发明提供了一种用于培养贝莱斯芽孢杆菌  YFB3‑1的液体发酵 培养基及方法。 本发明发酵培养基使用复合氨基酸作为氮源， 复合氨基酸可诱导芽孢杆菌 对西瓜根系的趋化和定殖， 有利于芽孢杆菌的生长和繁殖； 并且本发明将可水溶性且溶剂 颜色淡的酵母粉作为碳源来增加 光通透性， 从而增加实际菌液的浓度； 在本发明培养基和 培养条件 下， 生产出具有高菌体浓度的YFB3 ‑1生防菌菌剂， 菌体浓度大为提高。 在施用相同 用量的条件下 可以有效减少生防菌剂的用量， 节约成本 。 [0006]为了实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0007]一种用于培养贝莱斯芽孢杆菌YFB3 ‑1的液体发酵培养基， 所述液体发酵培养基包 括以下物质： [0008]复合氨基酸7.5 ‑15g/L [0009]酵母粉6‑12g/L [0010]NaCl 0.75‑1.5g/L [0011]MgSO4·7H2O 0.75‑1.5g/L [0012]去离子水1L。说　明　书 1/6 页 3 CN 115478037 A 3