(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211313228.7 (22)申请日 2022.10.25 (66)本国优先权数据 202210226353.8 2022.03.09 CN (83)生物保 藏信息 CCTCC NO:M 2021 1654 2021.12.21 (71)申请人 华中科技大 学 地址 430074 湖北省武汉市洪山区珞喻路 1037号 (72)发明人 胡智泉　程龙　李炳堂　宋青青　 刘冬啟　肖波　 (74)专利代理 机构 深圳峰诚志合知识产权代理 有限公司 4 4525 专利代理师 张腾(51)Int.Cl. C12N 1/12(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12N 1/36(2006.01) C12N 11/02(2006.01) C12N 11/084(2020.01) C12N 11/096(2020.01) C02F 3/34(2006.01) C12R 1/01(2006.01) C12R 1/89(2006.01) (54)发明名称 一种好氧反硝化菌-小球 藻菌藻生物膜的制 备方法及应用 (57)摘要 本发明公开了一种好氧反硝化菌 ‑小球藻菌 藻生物膜的制备方法及应用， 包括生物膜载体的 制备以及生物膜的制备2个步骤， 本发明通过好 氧反硝化菌和小球 藻耦合成藻菌共生体系， 综合 利用好氧反硝化菌和小球藻间的协同关系， 进而 实现污水中氮和抗生素的高效去除， 在含抗生素 的高氮源污染废水， 如养殖废水、 含有制药废水 或医院废水的市政生活污水和工业废水的处理 等污水处理领域具有很好的开拓和应用前景， 本 发明中的藻菌生物膜构建方法简单、 污染物去除 效率高， 对总氮和四环素类抗生素的去除率可达 94.75％和97.83％。 权利要求书2页 说明书8页 CN 115491312 A 2022.12.20 CN 115491312 A 1.一种好氧反硝化菌 ‑小球藻菌藻生物膜的制备方法， 其特征在于， 所述制备方法包括 如下步骤： (1)生物膜载体的制备： 将多孔谷壳、 聚乳酸和卵磷脂混合均匀后干燥制粒， 然后将颗 粒浸入到聚乙烯醇溶液与好氧反硝化菌菌液的混合液中， 搅拌均匀 后， 取出晾干， 即得到生 物膜载体； (2)好氧反硝化菌 ‑小球藻菌藻生物膜的制备： 将步骤(1)所得到的生物膜载体固定在 污水反应器中， 加入小球藻藻液， 进行生物膜培养， 待生物膜载体表面布满菌藻， 即得到生 物膜。 2.根据权利要求1所述的好氧反硝化菌 ‑小球藻菌藻生物膜的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述好氧反硝化菌为不动杆菌(A cinetobacter  sp.)AD‑5， 其保藏编号为CCTCC   M 20211654。 3.根据权利要求1所述的好氧反硝化菌 ‑小球藻菌藻生物膜的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述多孔谷壳的制备 方法包括如下步骤： (a1)谷壳的预处理： 将谷壳进行干燥、 粉碎过筛后加入到1 ‑2mol/L的碱溶液中， 在30 ‑ 60℃下超声处 理30‑60min， 待超声处 理完毕后， 洗涤， 烘干， 即得到 谷壳纤维； (a2)多孔谷壳的制备： 将谷壳纤维加入到质量浓度为25 ‑35％的酸溶液中， 在40 ‑70℃ 下进行超声处 理40‑80min， 待超声处 理完毕后， 经离心、 洗涤、 冷冻干燥， 即得到多孔谷壳。 4.根据权利要求1所述的好氧反硝化菌 ‑小球藻菌藻生物膜的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述 好氧反硝化菌 菌液的制备 方法如下： (b1)好氧反硝化菌的筛选驯化： 从湖泊或污水厂采集污泥样本， 于含有好氧反硝化细 菌富集培养基的无菌锥形瓶中在30℃、 100 ‑200r/min的条件下培养3 ‑5天， 取少量菌液于新 鲜驯化培养基中继续培养， 重复3 ‑5次， 挑选脱氮效果好的菌液于驯化培养基上划线培养， 反复多次挑选出适合的单菌 即为好氧反硝化菌， 将所得的好氧反硝化细菌接种到LB培养基 中， 在30℃、 100‑200r/min的条件下培 养3‑5天， 最终得到特定纯种的好氧反硝化菌； (b2)好氧反硝化菌的扩大培养： 将好氧反硝化菌以占培养液体积比5％ ‑10％接种到灭 菌后的同步硝化反硝化培养基中， 在30℃、 100 ‑200r/min的条件下培养3 ‑5天， 得到好氧反 硝化菌菌液。 5.根据权利要求1所述的好氧反硝化菌 ‑小球藻菌藻生物膜的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 多孔谷壳、 聚乳酸和卵磷脂的质量比为80 ‑120:5‑10:2‑6。 6.根据权利要求1所述的好氧反硝化菌 ‑小球藻菌藻生物膜的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 好氧反硝化菌 菌液浓度为1 ×107‑1×109cfu/mL。 7.根据权利要求1所述的好氧反硝化菌 ‑小球藻菌藻生物膜的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 污 水反应器中污水水质指标为： pH为7.0 ‑9.0， COD为100 ‑300mg/L， T N为5‑40mg/ L， TP为1‑5mg/L， 抗生素为0.1 ‑5mg/L， 其中所述抗生素为四环素、 氧四环素、 氧氟沙星、 环丙 沙星中的一种或多种， 小球藻的接种密度为1 ×105‑1×107cells/mL。 8.根据权利要求1所述的好氧反硝化菌 ‑小球藻菌藻生物膜的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 生物膜培养条件为： 光照强度为2 500‑3000Lux， 光暗比为12h： 12h， 温度为2 3‑27 ℃， 溶氧量为3‑5mg/L， 污水日更新 率为20％， 培 养时间为6 ‑8天。 9.一种根据权利要求1 ‑8任一项所述制备方法得到的好氧反硝化菌 ‑小球藻菌藻生物权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115491312 A 2膜。 10.如权利要求9所述的好氧反硝化菌 ‑小球藻菌藻生物 膜在污水处 理中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115491312 A 3