(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211313307.8 (22)申请日 2022.10.25 (71)申请人 孙毓 地址 276500 山东省日照市莒 县城阳镇 南 关二街294号 (72)发明人 孙毓　 (74)专利代理 机构 山东竹森智壤知识产权代理 有限公司 37382 专利代理师 刘文容 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) B01D 53/84(2006.01) B01D 53/52(2006.01) B01D 53/58(2006.01) C12R 1/07(2006.01)C12R 1/11(2006.01) C12R 1/10(2006.01) C12R 1/085(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种复合菌剂及其制备方法和空间应用 (57)摘要 本发明涉及一种复合菌剂及其制备方法和 空间应用， 属于微生物技术领域， 本发明提供的 复合菌剂， 包括克劳氏芽孢杆菌、 土壤芽孢杆菌、 坚强芽孢杆菌、 堀越芽孢杆菌、 巨大芽孢杆菌、 地 衣芽孢杆菌、 蜡样芽孢杆菌和球形芽孢杆菌， 本 发明制备的复合菌剂无需额外增加辅料及其处 理工艺和生产线， 生产工艺和设备更加简化； 可 置于自动一体化喷洒设备中， 实现定时、 定量自 动喷洒； 在大规模应用于畜禽养殖空间时， 能够 达到直接、 高效、 快速除异味目的， 实现 空气的快 速净化。 权利要求书2页 说明书7页 CN 115505548 A 2022.12.23 CN 115505548 A 1.一种复合菌剂， 其特征在于， 包括克劳氏芽孢杆菌(Bacillus  clausii)、 土壤芽孢杆 菌(Solibacillus  silvestris)、 坚强芽孢杆菌(Bacillus  firmus)、 堀越芽孢杆菌 (Sutcliffiella  horikoshii)、 巨大芽孢杆菌(Bacillus  megaterium)、 地衣芽孢杆菌 (Bacillus  licheniformi s)、 蜡样芽孢杆菌(Bacillus  cereus)和球形芽孢杆菌(Bacillus   sphaerieus)。 2.如权利要求1所述复合菌剂， 其特征在于， 克劳氏芽孢杆菌(Bacillus  clausii)菌种 编号： BORW O‑1， 保藏编号No.2 02191、 土壤芽孢杆菌(Solibacillus  silvestri s)菌种编号： BORWO‑2， 保藏编号No.202192、 坚强芽孢杆菌(Bacillus  firmus)菌种编号： BORWO ‑3， 保藏 编号No.2 02193、 堀越芽孢杆菌(S utcliffiella  horikoshii)菌种编号： BORW O‑4， 保藏编号 No.202194、 巨大芽孢杆菌(Bacillus  megaterium)菌种编号： BORWO ‑5， 保藏编号 No.202195、 地衣芽孢杆菌(Bacillus  licheniformis)菌种编号： BORWO ‑6， 保藏编号 No.202196、 蜡样芽孢杆菌(Bacillus  cereus)菌种编号： BORWO ‑7， 保藏编号No.202 197， 球 形芽孢杆菌(Bacillus  sphaerieus)菌种编号： BORWO ‑8， 保藏编号No.202198； 均保藏于山 东省科学院生态研究所微 生物菌种保藏库。 3.如权利 要求1所述复合菌剂， 其特征在于， 所述复合菌剂中总活菌数为107～1010CFU/ mL。 4.权利要求1 ‑3任一项所述复合菌剂的制备 方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)菌种活化： 将上述8种菌株分别各自接种至无菌液体培 养基培养活化， 制得菌液； (2)将步骤(1)制得的菌液， 分别按照体积分数0.1％～10％的接种量， 各自接种至液体 培养基， 培养制得种子液； (3)菌液培养： 将步骤(2)制备的8种菌株的种子液， 按照质量比， 其中， 克劳氏芽孢杆 菌、 土壤芽孢杆菌、 坚强芽孢杆菌、 堀越芽孢杆菌、 巨大芽孢杆菌、 地衣芽孢杆菌、 蜡样芽孢 杆菌和球形芽孢杆菌的质量比为(0.5～3.5)： (0.5～3.5)： (0.5～1.5)： (0.5～1.5)： (0.5 ～1.5)： (0.5～1.5)： (0.5～1.5)： (0.5～1.5)组成种子液， 按照体积分数1.0 ‑10％的接种 量， 接种至无菌发酵培养基， 在28 ‑37℃、 100 ‑200rpm条件下培养12～72h， 制备获得复合菌 液； (4)步骤(3)制备的复合菌液直接作为复合菌剂； 或者， 将步骤(3)制备的复合菌液 经常温或低温干燥制成可湿性粉剂， 获得复合菌剂。 5.如权利 要求4所述复合菌剂的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 液体培养基为LB培 养基； 优选的， 步骤(1)中， 培 养条件为28 ‑37℃， 100‑200rmp， 培养时间12 ‑48h。 6.如权利 要求4所述复合菌剂的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 液体培养基为LB培 养基； 优选的， 步骤(2)中， 培 养条件为28 ‑37℃， 100‑200rmp， 培养时间12 ‑48h； 优选的， 步骤(2)中， 种子液的活菌浓度分别为克劳氏芽孢杆菌的活菌浓度为109～ 1010/mL； 土壤芽孢杆菌的活菌浓度为109～1010/mL； 坚强芽孢杆菌的活菌浓度为107～109/ mL； 堀越芽孢杆菌的活菌浓度为107～109/mL； 巨大芽孢杆菌的活菌浓度为107～109/mL； 地 衣芽孢杆菌的活菌浓度为107～109/mL； 蜡样芽孢杆菌的活菌浓度为107～109/mL； 球形芽孢 杆菌的活菌浓度为107～109/mL。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115505548 A 27.如权利要求4所述复合菌剂的制备方法， 其特征在于， 步骤(3)中， 发酵培养基的每升 组分如下： 酵母粉3.5～15g/L， 蛋白胨7.0～15g/L， 氯化钠3.5～10g/L， 磷酸氢二钾0.5～1.5g/L， 磷酸二氢钾0.5～1.5g/L， 硫酸镁0.1～ 0.5g/L， 硫酸铵0.5～1.0g/L， 氯化钙0.002～ 0.05g/ L， 余量水。 8.权利要求1 ‑3任一项所述复合菌剂在消除异味中的应用。 9.如权利要求8所述应用， 其特 征在于， 所述复合菌剂在空间领域消除异味中的应用； 优选的， 所述应用的方法为： 将上述复合菌剂用水稀释， 按照体积比稀释10～1000倍， 置于喷洒设备， 喷洒时间1～30分钟， 喷洒量为(0.5～1.5)L/min/m3， 在异味污染空间内喷 洒去除异味。 10.如权利要求9所述应用， 其特 征在于， 所述异味污染空间为养殖产业异味污染空间； 优选的， 所述养殖产业异味污染空间包括养殖棚舍、 规模养殖场、 养殖污水存放区。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115505548 A 3