(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211314543.1 (22)申请日 2022.10.26 (83)生物保 藏信息 CGMCC No. 25206 2022.06.29 (71)申请人 中粮营养健康研究院有限公司 地址 102209 北京市昌平区北七家镇未来 科技城南区四路 申请人 酒鬼酒股份有限公司 (72)发明人 丁子元　杨鑫　靳喜庆　邹斐　 余冰　孙浩轩　孙玉婷　何伟　 郑晓卫　黄祖双　冯亮　 (74)专利代理 机构 北京润平知识产权代理有限 公司 11283 专利代理师 刘伊南(51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12P 17/12(2006.01) C12G 3/02(2019.01) C12J 1/04(2006.01) A23L 27/50(2016.01) C12R 1/125(2006.01) (54)发明名称 枯草芽孢杆菌、 菌剂、 应用及制备四甲基吡 嗪的方法 (57)摘要 本发明涉及发酵工程领域， 公开了一株枯草 芽孢杆菌、 菌剂、 应用及制备四甲基吡嗪的方法。 本发明的枯草芽孢杆菌 （ Bacillus  subtilis） 的 保藏号为CGMCC  No.25206。 该枯草芽孢杆菌的乙 偶姻产量高、 四甲基吡嗪产量高， 用于制备发酵 用物料或发酵食品时能够在显著提高其中四甲 基吡嗪等有益健康的风味物质的含量的同时还 能够降低生产成本， 用于生产四甲基吡嗪时能够 降低生产成本并且四甲基吡嗪产量高。 权利要求书1页 说明书11页 附图2页 CN 115386525 A 2022.11.25 CN 115386525 A 1.一株枯草芽孢杆菌 （ Bacillus  subtilis ） ， 其特征在于， 该枯草芽孢杆菌的保藏号为 CGMCC No. 25206。 2.一种菌剂， 其特 征在于， 所述菌剂含有权利要求1所述的枯 草芽孢杆菌 。 3.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌或权利要求2所述的菌剂在制备四甲基吡嗪中的应 用。 4.一种制备四甲基吡嗪的方法， 其特征在于， 所述方法包括： 将权利要求1所述的枯草 芽孢杆菌或权利要求2所述的菌剂接种至发酵培 养基中进行发酵。 5.根据权利要求4所述的方法， 其中， 所述发酵包括： 先进行第一阶段发酵得到第一发 酵液， 再对第一发酵 液进行第二阶段发酵 得到第二发酵 液。 6.根据权利要求5所述的方法， 其中， 所述第一阶段发酵的条件为： 30 ‑37℃， pH值为5 ‑ 7.5， 时间为15 ‑72 h； 和/或， 所述第二阶段发酵的条件为： 5 0‑90℃， pH值 为5‑8， 时间为24 ‑72 h。 7.根据权利要求5或6所述的方法， 其中， 所述第 二阶段发酵还包括： 在第 二发酵开始时 向第一发酵 液中加入铵盐。 8.根据权利要求6所述的方法， 其中， 第一阶段发酵的pH值 为5‑7， 时间为15 ‑48 h； 和/或， 所述第二阶段发酵的pH值 为6‑7.5。 9.权利要求1所述的枯草芽孢杆菌或权利要求2所述的菌剂在制备发酵食品或发酵用 物料中的应用。 10.根据权利要求9所述的应用， 其中， 所述发酵食品为 白酒、 黄酒、 酱油和食醋中的至 少一种； 和/或， 所述发酵用物料为麸曲和/或大曲。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115386525 A 2枯草芽孢杆菌、 菌剂、 应用及制备四甲 基吡嗪的方法 技术领域 [0001]本发明涉及发酵工程领域， 具体涉及一株枯草芽孢杆菌、 菌剂、 应用及制备四甲基 吡嗪的方法。 背景技术 [0002]四甲基吡嗪 （TTMP） 是一类含氮的杂环化合物， 具有烘烤和 坚果的特殊香气， 其香 味阈值极低， 被广泛应用于食品添加剂； 在医学上， 作为活性生物碱成分， 具有扩张血管、 控 制血小板粘附聚集和血栓形成等良好的药理作用。 生产TTMP的方法主要有植物提取、 化学 合成、 生物合成3种。 其中微生物发酵法是消费者更倾向的天然TTMP合成方法， 其中乙偶姻 是合成TTMP的重要前体物质。 [0003]现有技术中公开了使用地衣芽孢杆菌、 枯草芽孢杆菌、 贝莱斯芽孢杆菌、 解淀粉芽 孢杆菌、 高温放线菌、 甲基营养型芽孢杆菌、 短小芽孢杆菌等菌株利用液态发酵、 固态发酵、 混合蒸馏等方式提升白酒、 麸曲、 大曲中四甲基吡嗪的含量。 例如， CN101445786A公开了一 株高产四甲基 吡嗪的枯草芽孢杆菌， 保藏编号为CCTCC  No. M 208157， 该枯草芽孢杆菌以 蔗糖豆饼粉为底物时， 37  ℃条件下摇瓶培养120  h可获得4.08  g/L的四甲基吡嗪。 但是， 现 有技术公开的菌株的四甲基吡嗪产量均不高， 摇瓶液态发酵产量不超 过5.16 g/L。 此外， 现 有技术公开的菌株的丁二醇等副产物的产量较高 （约1 ‑20 g/L） ， 不利于乙偶姻的积累。 此 外， 目前通过菌株发酵进 行四甲基吡嗪的制备工艺通常为在发酵后再将发酵液采用降温结 晶、 过滤洗涤方式分离得到四甲基吡嗪， 但是降温结 晶并过滤后的滤出液中仍有较多的四 甲基吡嗪， 使得四甲基吡嗪的收率较低， 并且这种方法的步骤较多， 使 得制备四甲基吡嗪的 周期较长 。 [0004]筛选高产乙偶姻的菌株， 将有效提高四甲基吡嗪的产量， 降低生产成本， 提高麸 曲、 大曲、 白酒、 醋等 发酵食品及物料中的风味物质。 因此， 亟需开 发一种具有高产四甲基吡 嗪的微生物菌株。 发明内容 [0005]本发明的目的是为了克服现有技术存在的问题， 提供一株枯草芽孢杆菌、 菌剂、 制 备四甲基吡嗪的方法及其应用。 该枯草芽孢杆菌的乙偶姻产量高、 四甲基吡嗪产量高， 能够 在较短的发酵时间内得到高产量且纯度高的四甲基吡嗪， 用于制备发酵用物料或发酵食品 时能够在显著提高其中四甲基吡嗪等有益健康的风味物质的含量的同时还能够降低生产 成本， 用于生产四甲基吡嗪时能够降低生产成本并且四甲基吡嗪产量高。 [0006]为了实现上述目的， 本发明一方面提供一种枯草芽孢杆菌， 该枯草芽孢杆菌 的保 藏号为CGMCC No. 25206。 [0007]本发明第二方面 提供一种菌剂， 所述菌剂含有如前 所述的枯 草芽孢杆菌 。 [0008]本发明第三方面提供如前所述的枯草芽孢杆菌或如前所述的菌剂在制备四甲基 吡嗪中的应用。说　明　书 1/11 页 3 CN 115386525 A 3