(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211322070.X (22)申请日 2022.10.27 (83)生物保 藏信息 CGMCC NO.25637 2022.09.02 (71)申请人 山东合成远景生物科技有限公司 地址 262500 山东省潍坊市青州市经济开 发区王母宫街79 9号 (72)发明人 宗剑飞　肖卫华　张小凤　刘峰　 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 15/01(2006.01) C12N 13/00(2006.01) C12P 19/26(2006.01) C12R 1/19(2006.01) (54)发明名称 一种产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株 HCYJ-03及应用 (57)摘要 本发明涉及微生物发酵技术领域， 具体涉及 一种产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ ‑ 03及应用。 该大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ ‑03的 分类学命名为大肠埃希氏菌（ Escherichia   coli） ， 保藏编号为： CGMCC  NO.25637； 保藏日期 为2022年09月02日； 保藏单位为： 中国微生物菌 种保藏管理委员会普通微生物中心； 保藏地址 为： 北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 该大肠埃 希氏 菌诱变菌株HCYJ ‑03以保藏编号为 ATCC130277的大肠埃希氏菌K235为原始菌株诱 变而得。 该大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ ‑03产聚 唾液酸或唾液酸的产量相对于原始菌株提高约 44.19%， 适于大工业 生产。 权利要求书1页 说明书7页 附图2页 CN 115386526 A 2022.11.25 CN 115386526 A 1.一种产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ ‑03， 其特征在于， 所述大肠埃希氏菌 诱变菌株HCYJ ‑03的保藏编 号为： CGMCC  NO.25637； 保藏日期为2022年09月02日； 保藏单位 为： 中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心； 保藏地址为： 北京市朝阳区北辰西路 1号院3号； 所述大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ ‑03的分类学命名为大肠埃希氏菌 （Escherichia coli） 。 2.权利要求1所述大肠埃希氏菌诱变菌株HCYJ ‑03在发酵制备聚唾液酸或唾液酸中的 应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115386526 A 2一种产聚唾 液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株HCY J‑03及应用 技术领域 [0001]本发明属于微生物技术领域， 具体涉及一种产聚唾液酸的大肠埃希氏菌诱变菌株 HCYJ‑03及应用。 背景技术 [0002]聚唾液酸 （Polysialic  acid） 是唾液酸 （Sialic  acid， CAS  No.:131‑48‑6） 单体的 线性聚合物， 属于天然存在的荚膜多糖。 聚唾液酸经酸水解可进一步制备唾液酸。 研究显 示， 聚唾液酸对神经发育和重塑有促进作用 （吴剑荣,  詹晓北, 郑志永,等.  聚唾液酸与唾 液酸的研究进展[J].  生物加工过程,  2007, 5(1):7. ） ； 而唾液酸不仅与神经发育相关， 也 被认为具有抗病毒、 抗肿瘤等功效 （李翔宇,  徐柳柳, 舒敏,等.  固体饮料中唾液酸含量的 检测方法[J].  食品工业.  2022,43(7) :291. ） 。 [0003]大肠埃希氏菌可以葡萄糖、 山梨醇、 果糖等作为碳源， 通过聚唾液酸生物合成、 转 运相关酶来完成聚唾液酸的体内合 成， 且适于工业化生产。 因此， 目前大肠埃希氏菌是工业 企业发酵制备聚唾液酸的常用菌种。 发酵制备的聚唾液酸可通过酸水解等方法进一步制备 唾液酸。 目前报道的发酵法生产聚唾液酸的安全菌株主要是大肠埃希氏菌K235 （郑志永,   詹晓北, 朱德强,等.  聚唾液酸和唾液酸寡糖的生物合成及其在营养食品中的应用前景 [J]. 食品科学, 2013, 34(15):8. ） 。 [0004]发酵生产用菌种的改良和选择手段包括： 自然选育、 诱变选育、 杂交选育、 基因工 程改造四种 方法。 其中诱变选育是采用物理诱变、 化学诱变或离子注入等手段促使菌株短 时间内产生大量、 非定向突变， 然后进 行选择 （何国庆,贾英民,丁立孝.  食品微生物学  第4 版(M).北京:中国农业大学出版社,  2021年. ） 。 其中紫外诱变手段操作简单、 经济实惠， 可 在260nm波长附近促使DNA分子形成嘧啶二聚体； 电离辐射可利用高能量射线破坏DNA分子， 但操作要求高， 危险性高、 需要特殊昂贵设备； 离子注入时可利用产生的自由基变化损伤 DNA， 是极有潜力的诱变选育的方法， 但需要特定离子注入设备产生高能粒子束， 通常实验 室条件难以满足， 应用较少。 烷化剂 （亚硝基胍、 甲基磺酸乙酯等） 、 碱基类似物、 无机化合物 （氯化锂、 亚硝酸等） 也常用于菌种的化学诱变， 操作简单易行。 此外， 微波、 激光、 空间诱变 （航天育种） 也可用于 菌种改良选 育。 [0005]为提高大肠埃希氏菌发酵制备聚唾液酸或唾液酸的产量， 本领域的主要研究方向 包括： 对发酵培养条件的优化、 对发酵产 物中聚唾液酸或唾液酸分离纯化方法的优化、 对菌 株的改造和优化。 其中大部 分研究侧重于发酵培养条件的优化以及 对发酵液中聚唾液酸或 唾液酸分离纯化方法的优化。 在菌株改造方面， 已有部分单位取得了较好的成果， 例如： 专 利文献CN112175893A、 CN102649965A报道的技术， 是通过基因编辑技术改造大肠埃希氏菌、 枯草芽孢杆菌、 酿酒酵母等， 构建了基因工程菌株， 提高了唾液酸的产量。 此类技术是针对 微生物体内与聚唾液酸或唾液酸合成相关的基因进行针对性的敲除或过表达， 其改造对象 和目的是明确的。 再例如， 也有研究者采用低能氮离子束注入对大肠埃希氏菌进行诱变以 提高聚唾液酸产量 （吴金勇,  陈祥松, 余超,等.  大肠杆菌离子束诱变结合呼吸商在线实说　明　书 1/7 页 3 CN 115386526 A 3