(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211340962.2 (22)申请日 2022.10.30 (83)生物保 藏信息 CGMCC NO.2420 0 2021.12.27 (71)申请人 江南大学 地址 214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大 道1800号 (72)发明人 王莉　张小凤　林淑敏　 (74)专利代理 机构 哈尔滨市阳光惠远知识产权 代理有限公司 2321 1 专利代理师 林娟 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12P 13/00(2006.01) A23L 2/38(2021.01)A23L 33/135(2016.01) C12R 1/25(2006.01) (54)发明名称 一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌WL02及其 用途 (57)摘要 本发明公开了一株高产γ ‑氨基丁酸的植物 乳杆菌WL02及其用途， 属于生物技术领域。 所述 菌株为植物乳杆菌Lactobacillus  plantarum   WL02， 该菌株于2 021年12月27日保藏于中国微生 物菌种保藏中心， 保藏编号为： CGMCC  NO:24200。 通过优化培养基与发酵条件， 经高效液相色谱法 测定发酵液中γ ‑氨基丁酸的含量， 筛选出具有 高产γ‑氨基丁酸能力和较高产酸能力及活力的 乳酸菌； 经 16rDNA测序分析将筛选 出的菌株WL02 鉴定为植物乳杆菌。 本发明的菌株的耐酸耐胆 盐 能力较强， 可用于制作富含γ ‑氨基丁酸的功能 食品。 权利要求书1页 说明书7页 附图2页 CN 115521889 A 2022.12.27 CN 115521889 A 1.高产γ ‑氨基丁酸的植物乳杆菌(Lactobacillus  plantarum)WL02， 于2021年12月27 日保藏于中国微生物菌种保藏中心， 保藏编号为： C GMCC NO:24200， 保藏地址为北京市朝阳 区北辰西路1号院3号。 2.权利要求1所述植物乳杆菌(Lactobacillus  plantarum)WL02在制备谷物饮料中的 应用。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特 征在于， 所述谷物是藜麦 。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)菌株活化： 将植物乳杆菌W L02涂布于平板 培养基上进行活化培 养， (2)扩大培养： 从平板培养基 上挑取菌株置于 添加了5％的谷氨酸钠及0.2％的维生素B6 的MRS液体培 养基中， 于 37℃培养12‑24h； (3)制备藜麦 培养基 将藜麦原料， 按照料水比为1:1.5， 配置成40 ％的藜麦培养基， 再进行冷冲击前处理， 所 述冷冲击前处理的条件为： 于30℃用水浸泡12h， 于 ‑20℃冷冻24h， 然后于30℃冻融24h； 用 于接种培养； (4)发酵藜麦 向藜麦培养基中按3％～4％比例接种植物乳杆菌W L02， 并于 37℃， 发酵48 ‑60h。 5.利用权利 要求1所述植物乳杆菌WL02制备GABA的方法， 其特征在于， 主要包括以下步 骤： (1)菌株活化： 将植物乳杆菌W L02涂布于平板 培养基上进行活化培 养， (2)发酵产GABA： 将活化后的植物乳杆菌W L02转接到发酵培 养基中培 养， 所述发酵培养基配方为： 蛋白胨10.0g， 三水醋酸钠3.0g， 牛肉膏8.0g， 柠檬酸三铵 2.0g， 酵母浸膏4.0g， 七水硫酸镁0.2g， 葡萄糖10.0g， 一水硫 酸锰0.04g， 吐温 ‑80 1.0mL， 磷 酸氢二钾2.0g， L ‑谷氨酸钠5 0g， 维生素B6 2g， 蒸馏水10 00mL， 发酵培养温度为37℃， 培 养时间为 48‑60h。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 所述平板培养基配方为： 蛋白胨10.0g， 三 水醋酸钠3.0g， 牛肉膏8.0g， 柠檬酸三铵2.0g， 酵母浸膏4.0g， 七水硫酸镁0.2g， 葡萄糖 10.0g， 一水硫酸锰0.04g， 吐温 ‑80 1.0mL， 磷酸氢二钾2.0g， 琼脂15g， 蒸馏水1000mL， 调pH 至6.4， 活化培养温度为37℃， 培 养时间为24～48h 。 7.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 将发酵培养基替换为脱脂牛乳基质培养 基， 脱脂牛乳基质培 养基配方为脱脂 乳粉120g、 蒸馏水10 00mL。 8.权利要求1所述 植物乳杆菌W L02在制备微 生物制剂中的应用。 9.使用权利要求1所述植物乳杆菌WL02制备的功能补充剂的方法， 其特征在于， 是将植 物乳杆菌WL02于 ‑40℃～‑60℃冷冻， 经干燥至含水量为3％～5％， 再压碎成粉末 状， 可向粉 末状植物乳杆菌WL02中加入奶粉、 低聚糖、 麦芽糊精或风味剂等制成粉末 状或片状产品， 用 于日常食用。 10.含有权利要求1所述 植物乳杆菌W L02的微生物制剂或功能补充剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115521889 A 2一株产γ‑氨基丁酸的植物乳杆菌WL02及其用途 技术领域 [0001]本发明属于生物技术领域， 特别涉及一株产γ ‑氨基丁酸的植物乳杆菌WL02及其 用途。 背景技术 [0002]γ‑氨基丁酸， 是一种广泛分布于自然界的非蛋白质氨基酸。 GABA具有抗疲劳、 降 血压、 改善睡眠以及提高人体记忆力等生理功能， 是一种兼具药理作用和保健功能的新型 功能因子， 现已被 国家卫生部批准为 “新资源食品 ”， 可用于乳制品、 饮料和焙烤等食品中， 在食品领域具有良好的应用前 景。 [0003]乳酸菌作为公认的安全微生物， 具有合成γ ‑氨基丁酸的能力。 生物合成的γ ‑氨 基丁酸具有安全性、 经济性等优点， 因此， 使乳酸菌发酵食品成为人们日常γ ‑氨基丁酸营 养强化的补充剂可进一 步为人类健康事业添砖加瓦。 发明内容 [0004]本发明要解决的技术问题是克服现有乳酸菌发酵获得γ ‑氨基丁酸含量较低的不 足和缺陷， 提供一种高产γ ‑氨基丁酸的植物乳杆菌(Lactobacillus  plantarum)WL02并用 于制备富含γ ‑氨基丁酸的谷物饮料。 [0005]所述高产γ ‑氨基丁酸的植物乳杆菌(Lact obacillus  plantarum)WL02， 于2021年 12月27日保藏于中国微 生物菌种保藏中心， 保藏编号 为： CGMCC NO:24200。 [0006]所述植物乳杆菌WL02是从广西长寿村人群肠道中分离所得， 可利用常见的用于培 养乳酸菌的培 养基培养， 例如MRS培 养基。 [0007]所述植物乳杆菌WL02在 MRS培养基或脱脂牛乳基质培养基中37℃发酵24h后， 发酵 液的pH值分别为3.70和3.83， 活菌数大于109CFU/mL， 可见植物乳杆菌WL02有较高的产酸能 力及活力。 在pH为3.0的人工胃液中存活率大于65.5％， 在胆盐浓度为0.10％、 0.30％、 0.50％的MRS培 养基中培 养3h存活率分别大于73.3％、 41.5％及10.6％。 [0008]所述植物乳杆菌WL02在MRS培养基中37℃发酵24h， 发酵液中γ ‑氨基丁酸含量超 过18mg/100mL； 在脱脂牛乳基质培养基中37℃发酵24h后， 发酵液中γ ‑氨基丁酸含量超过 12mg/100mL； 在优化后的MRS培养基中37℃发酵24h后， 发酵液中γ ‑氨基丁酸含量大于 190mg/100mL； 在藜麦基质培养基中37℃发酵24h后， 发酵液中γ ‑氨基丁酸含量大于350mg/ 100mL。 [0009]所述植物乳杆菌WL02在添加了5％的谷氨酸钠及0.2％的维生素B6的MRS培养基 中， 于37℃进行培养48 ‑60h， 再按照5％的接菌量接入藜麦培养基， 于37℃进行培养48 ‑60h， 发酵液中γ‑氨基丁酸含量501.86mg/10 0mL。 [0010]本发明提供了利用所述 植物乳杆菌W L02制备GABA的方法， 主 要包括以下步骤： [0011](1)菌株活化： 将植物乳杆菌W L02涂布于平板 培养基上进行活化培 养， [0012]平板培养基配方为： 蛋白胨10.0g， 三水醋酸钠3.0g， 牛肉膏8.0g， 柠檬酸三铵说　明　书 1/7 页 3 CN 115521889 A 3