(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211364995.0 (22)申请日 2022.11.03 (83)生物保 藏信息 CGMCC No.16844 2018.1 1.30 CGMCC No.20988 2020.1 1.02 (71)申请人 山东省科学院生态研究所 （山 东省 科学院中日友好 生物技术研究中 心） 地址 250100 山东省济南市历城区彩石镇 经十东路28789号 (72)发明人 赵晓燕　周方园　吴晓青　范素素　 张广志　谢雪迎　张新建　 (74)专利代理 机构 济南舜源专利事务所有限公 司 37205 专利代理师 尹俪娟(51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) B09C 1/10(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种戴尔福特菌D39和俊片菌M1031的土壤 修复复合菌剂及制备方法 (57)摘要 本发明涉及土壤修复菌剂的技术领域， 具体 涉及一种戴尔福特菌D39和俊片菌M1031的土壤 修复复合菌剂及制备方法， 原料包括20~30重量 份的戴尔福特菌 （ Delftia sp.） D39发酵液、 5~10 重量份的俊片菌 （ Lampropedia  sp.） M1031发酵 液、 8~10重量份的润湿剂、 60~70重量份的分散剂 和1~5重量份的紫外保护剂。 该土壤修复复合菌 剂对土壤中的辛硫磷降解率可达98%以上， 且活 性期长、 适用范围更广， 对修复辛硫磷农残污染 的土壤具有重要意 义。 权利要求书1页 说明书7页 附图2页 CN 115404191 A 2022.11.29 CN 115404191 A 1.一种戴尔福特菌D39和俊片菌M1031的土壤修复复合菌剂， 其特征在于， 原料包括20~ 30重量份的戴尔福特菌 （ Delftia sp.） D39发酵液、 5~10重量份的俊片菌 （ Lampropedia   sp.） M1031发酵液、 8~10重量份的润湿剂、 60~70重量份的分散剂和 1~5重量份的紫外保护 剂； 所述戴尔福特菌D39 由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏， 保藏地 址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号， 保藏编号为CGMCC  No.16844， 保藏 日期为2018年11 月30日； 所述俊片菌M1031由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏， 保藏地址 为北京市朝阳区北辰西路1号院3号， 保藏编号为CGMCC  No.20988， 保藏日期为2020年11月2 日。 2.如权利要求1所述的土壤修复复合菌剂， 其特征在于， 所述润湿剂包括木质磺酸钙和 萘磺酸盐缩聚物。 3.如权利要求2所述的土壤修复复合菌剂， 其特征在于， 所述木质磺酸钙与萘磺酸盐缩 聚物的质量比为3:2。 4.如权利要求1所述的土壤修复复合菌剂， 其特征在于， 所述分散剂为硅藻土， 所述紫 外保护剂为 羧甲基纤维素。 5.如权利要求1所述的土壤修复复合菌剂， 其特征在于， 所述土壤修复复合菌剂在土壤 中的接种量 为2~10g∙kg‑1。 6.一种如权利要求1所述土壤修复 复合菌剂的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： （1） 将戴尔福特菌D39发酵液、 俊片菌M1031发酵液、 润湿剂、 分散剂、 紫外保护剂混合， 搅拌均匀； （2） 将混合后的原料放入气流粉碎机粉碎， 粉碎后过筛， 制得土壤修复 复合菌剂。 7.如权利要求6所述的制备方法， 其特征在于， 所述戴尔福特菌D39发酵液采用以下方 法制成： S1、 取保藏的戴尔福特菌D39菌株划线于LB固体培养基上， 25~30℃倒置活化培养1~2d， 制得活化后的菌株； S2、 向500mL三角瓶中装入100~150mL的LB液体培养基， LB液体培养基pH为7.0~7.5， 取 活化后的菌株接种于LB液体培养基中， 接种量为4%~8%， 于30~32℃摇床振 荡培养2~3d， 制得 菌液； S3、 向盛有发酵培养基A的500L发酵罐中， 接种菌液， 初始接种量4%， 转速350r ∙min‑1， 溶 氧5mmol∙L‑1， 流加氨水控制pH =7.0， 温度32℃， 发酵40~52h， 制得戴尔福特菌D39发酵 液。 8.如权利要求7所述的制备方法， 其特征在于， 所述发酵培养基A以质量份数计， 包括玉 米粉2份， 豆粉2份， 葡萄糖1份， 硫酸铵0.1份， 磷酸氢二钾0.2份， 磷酸二氢钾0.2份， 七水硫 酸镁0.03份， 去离 子水补足至10 0份。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115404191 A 2一种戴尔福特菌D39和俊片菌M1031的土壤 修复复合菌剂及制 备方法 技术领域 [0001]本发明涉及土壤修复菌剂的技术领域， 具体涉及一种戴尔福特菌D39和俊片菌 M1031的土壤修复 复合菌剂及制备 方法。 背景技术 [0002]辛硫磷是我国使用范围最广的有机磷杀虫剂之一， 20 15年在多种主要农作物中用 药量排名第一。 在喷洒过程中， 只有少部分 的农药发挥作用， 50%~60%的辛硫磷会残 留于土 壤中。 辛硫 磷在无阳光直射的土内， 降解缓慢， 属于难消解农药。 [0003]迄今为止， 从戴尔福特菌属中已分离到两种具有降解辛硫磷功能的菌株。 2007年 沈雨佳等报道了一株以辛硫磷为唯一碳源的戴尔福特菌XSP ‑1， 可在7h内完全降解100mg/L 的辛硫磷， 同时该菌株对对甲基对硫磷、 毒 死蜱、 杀螟硫磷也有较好的降解能力。 2020年， 发 明人也分离到一株戴尔福特菌D39， 专利CN109679875A中公开了利用戴尔福特菌D39制备一 种降解辛硫磷的酶制剂， 该酶制剂对粮仓的储粮及农产品加工的副产品中的辛硫磷残留能 降解90%～99%以上。 上述酶制剂通过超声破碎戴尔福 特菌D39菌体制得， 结合后续实验， 验 证了主要是D39胞内酶发挥降解辛硫磷的作用， D39胞外酶无降解辛硫磷的作用。 而将酶制 剂直接应用在土壤中， 胞内酶容易失活， 需要使用活菌菌剂修复土壤。 而试验发现， 当土壤 中辛硫磷浓度大于150mg •kg‑1时， D39土壤 修复菌剂48  h对辛硫磷的降解率仅为81%左右， 修 复高污染土壤的能力较差 。 发明内容 [0004]为了提高戴尔福特菌D39菌剂对土壤中辛硫磷的降解效果， 本发明提供一种戴尔 福特菌D39和俊片菌M1031的土壤修复复合菌剂及制备方法， 实现高效修复辛硫磷污染的土 壤。 [0005]第一方面， 本申请提供一种戴尔福特菌D39和俊片菌M1031的土壤修复复合菌剂， 原料包括20~30重量份的戴尔福特菌 （Delftia  sp.） D39发酵液、 5~10重量份的俊片菌 （Lamprope dia sp. ） M1031发酵液、 8~10重量份的润湿剂、 60~70重量份的分散剂和1~5重量 份的紫外保护剂； 所述戴尔福特菌D39由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏， 保 藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号， 保藏编号为CGMCC  No.16844， 保藏 日期为2018 年11月30日， 已公开于中国发明专利CN109679875A中。 [0006]所述俊片菌M1031由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏， 保藏 地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号， 保藏编号为CGMCC  No.20988， 保藏 日期为2020年 11月2日， 已公开于中国发明专利CN1 13249274A中。 [0007]进一步的， 所述润湿剂包括木质磺酸钙和萘磺酸盐缩聚物。 [0008]进一步的， 所述木质磺酸钙与萘磺酸盐缩聚物的质量比为3:2。说　明　书 1/7 页 3 CN 115404191 A 3