(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211403010.0 (22)申请日 2022.11.09 (71)申请人 广东中微环保生物科技有限公司 地址 523000 广东省东莞 市松山湖高新 技 术产业开发区台湾高科技园桃园路1 号莞台生物技术合作育成中心4栋五 楼 (72)发明人 杨秋婵　张保安　陈欢　 (74)专利代理 机构 广州三环 专利商标代理有限 公司 44202 专利代理师 邹敏敏 (51)Int.Cl. C12P 1/04(2006.01) C12N 1/38(2006.01) C12N 1/20(2006.01)A01N 63/28(2020.01) A01P 13/00(2006.01) C02F 3/34(2006.01) C12R 1/465(2006.01) (54)发明名称 溶藻放线菌活性物质的制备方法及应用 (57)摘要 本发明涉及富营养化水体治理技术领域， 公 开了溶藻放线菌活性物质的制备方法及应用， 制 备方法包括： (1)将放线菌接种至含有培养基的 摇瓶中， 培养基包括碳水化合物、 盐、 谷氨 酸和蓝 藻， 再置于培养箱中振荡培养得一级种子液； (2) 将一级种子液按照体积分数为10～20％的接种 量接种到一级种子罐中培养得二级种子液； (3) 将二级种子液按照体积分数为10～20％的接种 量接种到发酵罐中培养得放线菌发酵液； (4)将 放线菌发酵液离心后得上清液并加入稳定剂进 行混合。 谷氨 酸可促使放线菌在发酵过程中分泌 更多的活性物质， 蓝藻可使放线菌在发酵过程中 一直保持对藻的去除能力， 以分泌相应的活性物 质。 稳定剂可抑制杂菌生长， 以保持除藻稳定性。 权利要求书1页 说明书7页 CN 115537429 A 2022.12.30 CN 115537429 A 1.溶藻放线菌活性物质的制备 方法， 其特 征在于， 包括 步骤： (1)将放线菌接种至含有培养基的摇瓶中， 所述培养基包括碳水化合物、 盐、 谷氨酸和 蓝藻， 再置 于培养箱中振荡培 养得一级种子液； (2)将所述一级种子液按照 体积分数为10～20％的接种量接种到一级种子罐中进行培 养得二级种子液； (3)将所述二级种子液按照 体积分数为10～20％的接种量接种到发酵罐中培养得放线 菌发酵液； (4)将所述 放线菌发酵 液离心后得 上清液并加入稳定剂进行混合。 2.根据权利要求1所述的溶藻放线菌活性物质的制备方法， 其特征在于， 所述培养基包 括可溶性淀粉10～35g/L、 乙酸钠5～10g/L、 硝酸钠0.5～2.0g/L、 硝酸钾0.2～1.5g/L、 K2HPO4 0.1～1g/L、 NaH2PO4 0.1～1g/L、 MgSO4·7H2O 0.2～0.8g/L、 NaCl  0.2～0.8g/L、 FeSO4·7H2O 0.005～0.05g/L、 谷氨酸0.2 ～2g/L和蓝藻5～10g/L。 3.根据权利要求1或2所述的溶藻放线菌活性物质的制备方法， 其特征在于， 所述蓝藻 包括铜绿微囊藻、 颤藻和念珠藻中的至少一种。 4.根据权利要求1所述的溶藻放线菌活性物质的制备方法， 其特征在于， 所述放线菌为 细黄链霉菌 。 5.根据权利要求1所述的溶藻放线菌活性物质的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中所 述培养的条件 包括在25～3 5℃的培养箱中震荡培 养48～96h， 且震荡转速为10 0～200rpm。 6.根据权利要求1所述的溶藻放线菌活性物质的制备方法， 其特征在于， 步骤(2)中所 述培养的条件包括温度2 5～35℃、 转速100～2 00rpm、 罐压0.05～0.1MPa、 溶解氧20～ 60％、 pH 6.5～8.5、 培 养时间48～ 96h。 7.根据权利要求1所述的溶藻放线菌活性物质的制备方法， 其特征在于， 步骤(3)中所 述培养的条件包括温度2 5～35℃、 转速100～2 00rpm、 罐压0.05～0.1MPa、 溶解氧20～ 60％、 pH 6.5～8.5、 培 养48～96h。 8.根据权利要求1所述的溶藻放线菌活性物质的制备方法， 其特征在于， 所述离心的转 速为2000～6000rpm。 9.根据权利要求1所述的溶藻放线菌活性物质的制备方法， 其特征在于， 所述稳定剂包 括对羟基苯甲酸乙酯钠0.5～ 2.5g/L、 乙酸钠10～5 0g/L和酸， 且所述 酸调节pH为5.0～6.5 。 10.根据权利要求1～9任意一项所述的溶藻放线菌活性物质的制备方法所制备的溶藻 放线菌活性物质于水体中藻类去除的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115537429 A 2溶藻放线菌活性物质的制备方 法及应用 技术领域 [0001]本发明涉及环保技术领域， 尤其涉及富营养化水体治理技术领域， 更加涉及溶藻 放线菌活性物质的制备 方法及应用。 背景技术 [0002]水华(Algal  Blooms)指淡水水体中藻类大量繁殖的一种自然生态现象， 是水体富 营养化的一种特征。 主要由于生活及工农业生产中含有 大量氮、 磷的废污水进入 水体后， 蓝 藻(又叫蓝细菌， 包括微囊藻、 鱼腥藻、 颤藻、 念珠藻、 蓝球藻、 发菜等)、 绿藻、 硅藻等大量繁 殖后使水体呈现蓝色或绿色的一种现象。 [0003]目前国内外采用的除藻方法包括物理方法、 化学方法和生物方法。 物理方法主要 有机械清淤、 过滤除藻、 黏土除藻和气浮除藻等， 费用大、 成本高， 且难以应用较大面积的蓝 藻防治， 在实际应用中受到限制。 化学方法主要是采用化学药剂如硫酸铜、 过氧化氢、 表面 活性剂、 次氯酸钠等， 化学方法容易产生二次污染， 对水体生物产生潜在危害。 生物法是利 用藻类的天敌如细菌、 病毒、 捕食藻体的浮游动物、 水生植物、 大型藻类等， 或其所产生的某 些抑制藻类生长的物质来控制藻类数目的增加， 从而达到抑制的目的。 生物法具有操作简 单， 成本低， 无二次污染等优点， 成为目前国内外的研究热点。 因此， 寻找一种高效的生物除 藻剂具有非常重要的意 义。 [0004]生物法中利用溶藻细菌在去除水体中有害藻类是目前研究比较多的方向， 研究发 现较多的溶藻细菌是通过分泌胞外活性物质来进 行溶藻的， 目前对溶藻细菌的研究更多的 是在实验室阶段， 在生产培 养方面相对较少。 发明内容 [0005]基于上述问题， 本发明的目的在于提供一种溶藻放线菌 活性物质的制备方法及应 用， 此制备方法简单， 且能有效的促进分泌 溶藻放线菌活性物质， 所制得的溶藻放线菌活性 物质除藻效果明显且稳定性高。 [0006]为实现上述目的， 本发明一方面提供了溶藻放线菌活性物质的制 备方法， 包括步 骤： [0007](1)将放线菌接种至含有培养基的摇瓶中， 所述培养基包括碳水化合物、 盐、 谷氨 酸和蓝藻， 再置 于培养箱中振荡培 养得一级种子液； [0008](2)将所述一级种子液按照体积分数为10～20％的接种量接种到一级种子罐中进 行培养得二级种子液； [0009](3)将所述二级种子液按照体积分数为10～20％的接种量接种到 发酵罐中培养得 放线菌发酵 液； [0010](4)将所述 放线菌发酵 液离心后得 上清液并加入稳定剂进行混合。 [0011]与现有技术相比， 本发明采用放线菌进行接种培养， 放线菌可产生较多的生物活 性物质， 具有明显的抑藻效果。 培养基中添加谷氨酸和蓝 藻， 由于放线菌产生的部 分生物活说　明　书 1/7 页 3 CN 115537429 A 3