(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211415339.9 (22)申请日 2022.11.11 (71)申请人 江苏省沿海开发投资有限公司 地址 210000 江苏省南京市奥体大街68号 新城科技园国际研发总部园4B栋 申请人 河海大学 (72)发明人 马广源　张爱华　黄建科　冯波　 姚婷　钱津　 (74)专利代理 机构 南京新众合专利代理事务所 (普通合伙) 32534 专利代理师 王子瑜 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12N 1/38(2006.01) C12P 21/02(2006.01)C07K 14/795(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 添加外源物质促进螺旋藻产藻蓝蛋白的方 法 (57)摘要 本发明公开了一种添加外源物质 促进螺旋 藻产藻蓝蛋白的方法， 包括以下步骤： (1)采用兼 养培养模式， 在培养基中培养螺旋藻； (2)将两种 外源物质加入步骤(1)的培养基中进行微 藻光自 养培养； (3)待步骤(2)培养结束后， 采收获得螺 旋藻； (4)通过分离提取方法获得步骤(3)得到的 螺旋藻的细胞中的藻蓝蛋白。 本发 明通过添加外 源物质促进螺旋藻产生高附加值微藻生物质— 藻蓝蛋白， 螺旋藻藻蓝蛋白具有许多显著的功 效， 如抗氧化作用、 抗癌作用和作为天然色素等， 故螺旋藻藻蓝蛋白的应用相当广泛， 具有较高的 应用价值。 通过外源物质的添加促进螺旋藻产蓝 蛋白的方法具有高效性。 权利要求书1页 说明书3页 附图2页 CN 115521890 A 2022.12.27 CN 115521890 A 1.一种添加外源物质促进螺 旋藻产藻蓝蛋白的方法， 其特 征在于： 包括以下步骤： (1)采用兼养 培养模式， 在培 养基中培 养螺旋藻； (2)将外源物质加入步骤(1)的培 养基中， 进行微藻光自养 培养； (3)待步骤(2)培 养结束后， 采收获得螺 旋藻； (4)通过分离提取 方法获得步骤(3)得到的螺 旋藻的细胞中的藻蓝蛋白。 2.根据权利要求1所述的添加外源物质促进螺旋藻产藻蓝 蛋白的方法， 其特征在于： 所 述步骤(1)中， 兼养培养模式为自养培养， 采用Zarr ouk培养基， 将其中的氯化钠浓度调整为 185mM。 3.根据权利要求1所述的添加外源物质促进螺旋藻产藻蓝 蛋白的方法， 其特征在于： 所 述步骤(1)中， 螺 旋藻培养液pH调节至9.1 ‑9.5。 4.根据权利要求1所述的添加外源物质促进螺旋藻产藻蓝 蛋白的方法， 其特征在于： 所 述步骤(1)中， 螺 旋藻藻种液的接入量 为Zarrouk培养基体积的10％。 5.根据权利要求1所述的添加外源物质促进螺旋藻产藻蓝 蛋白的方法， 其特征在于： 所 述步骤(2)中， 外源物质为百能饲和百能太的一种或两种混合， 外源物质通过移液管加至 Zarrouk培养基中培 养螺旋藻。 6.根据权利要求5所述的添加外源物质促进螺旋藻产藻蓝 蛋白的方法， 其特征在于： 所 述步骤(2)中， 将外源物质进行单独灭菌后再加入至Zarrouk培养基， 杀菌消毒通过次氯酸 钠法、 紫外消毒法、 高压灭菌任意 一种或两种以上 结合的方式。 7.根据权利要求1所述的添加外源物质促进螺旋藻产藻蓝 蛋白的方法， 其特征在于： 所 述步骤(2)中， 微藻光自养 培养的温度为31℃， 培 养周期12 ‑16天。 8.根据权利要求1所述的添加外源物质促进螺旋藻产藻蓝 蛋白的方法， 其特征在于： 所 述步骤(2)中， 螺旋藻在光照条件 下培养时， 光照强度为8000 ‑10000lux； 培养采用的装置包 括摇瓶、 发酵罐或可灭菌光生物反应器， 当培养装置为摇瓶时， 摇床转速控制在100 ‑ 150rpm； 当培养装置为发酵罐或可灭菌光生物反应器时， 开启搅拌和通气， 控制溶解氧不低 于10％。 9.根据权利要求1所述的添加外源物质促进螺旋藻产藻蓝 蛋白的方法， 其特征在于： 所 述步骤(3)中， 通过 过滤网过滤法回收获得微藻。 10.根据权利要求1所述的添加外源物质促进螺旋藻产藻蓝蛋白的方法， 其特征在于： 所述步骤(4)中， 通过冻融提取法提取螺 旋藻中的藻蓝蛋白。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115521890 A 2添加外源物质促进螺 旋藻产藻蓝蛋白的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及 微藻活性物质提取和藻类培养领域， 具体涉及一种海洋微藻培养与通 过外源物质促进微藻产藻蓝蛋白的方法。 背景技术 [0002]添加外源物质是促进生物量和藻蓝蛋白积累的有效途径。 在培养基中补充矿物元 素、 有机酸和维生素可提高生物量和藻蓝蛋白产量。 在螺旋藻的指数生长阶段， 逐步添加硒 (Se)， 可以提升 藻蓝蛋白的方法。 通过添加谷氨酸钠和琥珀酸， 营养富集诱导的代谢胁迫条 件可以显著提高螺旋藻的生物量产量和藻蓝蛋白含量。 因此， 在培养基内添加外源物质对 高效生产藻蓝蛋白至关重要。 [0003]微藻具有光能利用效率高、 繁殖速度快、 环境适应性强、 生长周期短等特点， 且富 含蛋白质、 不饱和脂肪酸和维生素等多种营养成分。 同时， 微藻可以快速利用利用外源物质 产生活性产物。 基于外源物质的添加利用微藻产活性产物技术是当前国内外研究的热点， 该技术不仅可以获得 的高产量的微藻生物质——可以直接作为饲料、 饵料及肥料； 也可以 分离提取微藻中的天然活性物质， 如藻蓝蛋白、 不饱和脂肪酸 等制备成高附加值产品。 [0004]藻胆蛋白有四种类型， 即藻红蛋白、 藻蓝蛋白、 藻红蓝蛋白和异藻蓝蛋白。 藻蓝蛋 白具有良好的抗氧化剂和自由基清除活性.此外， 藻蓝蛋白还具有其他种生物活性， 如抗 炎、 抗癌、 抗糖尿病、 神经保护和保护肝作用。 因此， 藻蓝蛋白目前被广泛应用于食品、 营养 品、 化妆品和制药等行业。 [0005]据此， 针对微藻提取藻蓝蛋白效率低等问题， 将基于添加外源物质促进微藻活性 物质的产量应用到螺旋藻的培养产藻蓝蛋白的方法， 促进螺旋藻产藻蓝蛋白。 本发明用于 海洋微藻的培养， 通过外源物质的添加， 获得高附加值的天然活性物质——藻蓝蛋白。 并对 现有微藻提取藻蓝蛋白的方法进行改进， 利用螺 旋藻生产藻蓝蛋白的方法或技 术。 发明内容 [0006]本发明的目的是提供一种添加外源物质促进螺旋藻产藻蓝蛋白的方法， 以解决现 有技术中存在的微藻产藻蓝蛋白的成本高以及附加产值低的技 术问题。 [0007]为实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0008]一种添加外源物质促进螺 旋藻产藻蓝蛋白的方法， 包括以下步骤： [0009](1)采用兼养 培养模式， 在培 养基中培 养螺旋藻； [0010](2)将外源物质加入步骤(1)的培 养基中， 进行微藻光自养 培养； [0011](3)待步骤(2)培 养结束后， 采收获得螺 旋藻； [0012](4)通过分离提取 方法获得步骤(3)得到的螺 旋藻的细胞中的藻蓝蛋白。 [0013]所述步骤(1)中， 兼养培养模式为自养培养， 采用Zarrouk培养基， 将 其中的氯化钠 浓度调整为185mM 。 [0014]所述步骤(1)中， 螺 旋藻培养液pH调节至9.1 ‑9.5。说　明　书 1/3 页 3 CN 115521890 A 3