(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211412911.6 (22)申请日 2022.11.11 (71)申请人 河北亚尔农业科技股份有限公司 地址 061000 河北省沧州市南皮县冯家口 镇李皇亲村村东 (72)发明人 刘英　昝风桐　于晓东　刘钧鹏　 张雯迪　张梦琦　 (74)专利代理 机构 北京科亿知识产权代理事务 所(普通合伙) 11350 专利代理师 陈亮 (51)Int.Cl. C12N 1/04(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12N 1/16(2006.01) C12R 1/25(2006.01)C12R 1/225(2006.01) C12R 1/23(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 一种复合 微生物发酵剂的保藏方法 (57)摘要 本发明提供了一种复合微生物发酵剂的保 藏方法， 属于微生物发酵剂技术领域。 本发明具 体步骤为： S1、 将植物乳杆菌、 副干酪乳杆菌、 嗜 酸乳杆菌和异常汉逊酵母菌种进行连续活化； S2、 对菌体的扩大培养与浓缩； S3、 添加保护剂和 填充剂； S4、 采用双螺杆挤出机挤压造粒成型； S5、 微波干燥和旋转闪蒸干燥； S6、 背封式包装保 藏。 本发明提供的复合微生物发酵剂的保藏方法 具有保持微生物的活性， 提高发酵剂质量， 延长 发酵剂的贮存时间， 对设备和贮藏条件要求较低 的优点。 权利要求书1页 说明书4页 CN 115537338 A 2022.12.30 CN 115537338 A 1.一种复合 微生物发酵剂的保藏方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1、 菌种的活化： 将植物乳杆菌、 副干酪乳杆菌、 嗜酸乳杆菌和异常汉逊酵母的菌种接 种至液体培 养基中， 并在37℃条件下 连续活化3代， 得到活化菌种； S2、 菌体的扩大培养与浓缩： 将步骤S1所述的活化菌种接种至液体培养基中， 得到扩大 培养菌液， 然后将所述扩大培养菌液依次进行离心浓缩， 过滤， 用PBS缓冲液冲洗2 ‑3次， 收 集菌泥； S3、 添加配料： 在步骤S2所述的菌泥中添加保护剂和填充剂， 得到含菌混合物； S4、 挤压成型： 在步骤S3所述的含菌混合物中加入抗热保护剂， 然后 置于双螺杆挤出机 中挤出造粒， 双螺杆挤出机的入口温度控制在 120‑150℃， 进料速度为20 ‑50r/min， 螺杆速 度为10‑50r/min， 出口温度为5 0‑60℃， 得到粒状含菌物质； S5、 干燥处理： 将步骤S4所述的粒状含菌物质进行微波干燥， 得到中间产物； 然后将中 间产物送入旋转闪蒸干燥机中进行旋转闪蒸干燥， 得到复合 微生物发酵剂； S6、 保存： 将步骤S5所述的复合 微生物发酵剂采用背封式包 装， 常温储藏即可。 2.根据权利要求1所述的复合微生物发酵剂的保藏方法， 其特征在于， 步骤S1和步骤S2 中所述液体培 养基为MRS液体培 养基。 3.根据权利要求1所述的复合微生物发酵剂的保藏方法， 其特征在于， 步骤S2中所述离 心的转速为 4000r/min‑6000r/min， 离心时间20 ‑30min。 4.根据权利要求1所述的复合微生物发酵剂的保藏方法， 其特征在于， 步骤S3 中所述保 护剂为麦 芽糊精和海藻糖。 5.根据权利要求1所述的复合微生物发酵剂的保藏方法， 其特征在于， 步骤S3 中所述填 充剂为淀粉。 6.根据权利要求1所述的复合微生物发酵剂的保藏方法， 其特征在于， 步骤S5 中所述微 波剂量为0.1～1k W/kg， 微波时间为1 ‑10min， 微波结束后中间产物的水分含低于10％。 7.根据权利要求1所述的复合微生物发酵剂的保藏方法， 其特征在于， 步骤S5 中所述抗 热保护剂为甘油和脱脂奶粉。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115537338 A 2一种复合微生物发酵剂的保 藏方法 技术领域 [0001]本发明涉及微生物发酵剂技术领域， 具体涉及一种复合微生物发酵剂的保藏方 法。 背景技术 [0002]目前， 复合微生物发酵剂的制备大多采用纯培养方法， 将各个菌体先纯培养， 再将 培养得到的菌体按照确定的菌种比例复配在一起得到复合菌剂产品， 这种方法制得的复合 菌剂的缺点是原料、 设备和能源的利用率不高， 浪费人力， 极大的增加了生产成本， 造成资 源浪费， 是一种急待改进的复合菌剂的制作方法。 微生物混合培养又叫混菌培养， 是指对两 种或多种微生物混在一起进行 的培养方式， 混合培养利用不同菌株之间的协同作用， 提高 产率， 如传统发酵的食品、 调味品的生产过程大多 是多种微生物协同作用的结果， 能够获得 纯培养所无法获得的产物。 [0003]目前复合微生物发酵剂的保藏技术较多， 但是现有保藏方法均存在不同程度的缺 陷。 比如沙土 保藏法虽然 可用于保藏菌种， 但是其存在保藏效果不佳的缺陷； 冷冻干燥保藏 法对一般生活力强的微生物及其孢子以及无芽胞菌都适用， 但其操作复杂， 且对设备 的要 求高； 液体石蜡保藏法制作简单， 不需特殊设备， 但是其保存菌种时必须直立放置， 所占位 置较大， 同时也 不便携带。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本发明提供了一种复合 微生物发酵剂的保藏方法， 包括以下步骤： [0005]S1、 菌种的活化： 将植物乳杆菌、 副干酪乳杆菌、 嗜酸乳杆菌和异常汉逊酵母的菌 种接种至液体培 养基中， 并在37℃条件下 连续活化3代， 得到活化菌种； [0006]S2、 菌体的扩大培养与浓缩： 将 步骤S1所述的活化菌种接种至液体培养基中， 得到 扩大培养菌液， 然后 将所述扩 大培养菌液依次进行离心浓缩， 过滤， 用PBS缓冲液(磷酸缓冲 盐溶液)冲洗2 ‑3次， 收集菌泥； [0007]S3、 添加配料： 在步骤S2所述的菌泥中添加保护剂和填充剂， 得到含菌混合物； [0008]S4、 挤压成型： 在步骤S3所述的含菌混合物中加入抗热保护剂， 然后置于双螺杆挤 出机中挤出造粒， 双螺杆挤出机的入口温度控制在120 ‑150℃， 进料速度为20 ‑50r/min， 螺 杆速度为10 ‑50r/min， 出口温度为5 0‑60℃， 得到粒状含菌物质； [0009]S5、 干燥处理： 将步骤S4所述 的粒状含菌物质进行微波干燥， 得到中间产物； 然后 将中间产物 送入旋转闪蒸干燥机中进行旋转闪蒸干燥， 得到复合 微生物发酵剂； [0010]S6、 保藏： 将步骤S5所述的复合 微生物发酵剂采用背封式包 装， 常温储藏即可。 [0011]优选的， 步骤S1和步骤S2中所述液体培养基为MRS液体培养基， 所述MRS液体培养 基包括但不限于以下成分： 牛肉膏1％， 蛋白胨1％， 酵母膏0.5％， 磷酸氢二钾0.2％， 柠檬酸 氢二铵0.2％， 乙酸钠0.5％， 葡萄糖2％， 硫酸镁0.058％， 硫酸锰0.019％， 吐温80  0.1％， pH6.0～8.0， 121℃灭菌20mi n。说　明　书 1/4 页 3 CN 115537338 A 3