(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211430200.1 (22)申请日 2022.11.16 (71)申请人 南京北极光质检技 术服务有限公司 地址 210000 江苏省南京市栖霞区仙林街 道纬地路9号江苏生命科技园D7-10层 (72)发明人 张敏　张小凤　司淑芬　李靖　 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12Q 1/14(2006.01) C12Q 1/10(2006.01) H01F 1/42(2006.01) C12R 1/445(2006.01) C12R 1/42(2006.01) (54)发明名称 聚多巴胺四氧化三铁磁珠捕获致病菌的方 法及其在快检的应用 (57)摘要 本发明公开了一种聚多巴胺四氧化三铁磁 珠捕获致病菌的方法及其在快检的应用， 包括： 聚多巴胺四氧化三铁磁珠制备； 菌液与磁珠的混 合； 磁珠与菌 液上清液分离； 磁珠复溶。 能够特异 性的捕获金黄色葡萄球菌、 沙门氏菌， 几乎不捕 获李斯特菌 。 权利要求书1页 说明书6页 CN 115491337 A 2022.12.20 CN 115491337 A 1.一种聚多巴胺四氧化 三铁磁珠捕获致病菌的方法， 其特 征在于， 包括： 磁珠制备； 菌液与磁珠的混合； 磁珠与菌液 上清液分离； 磁珠复溶； 所述磁珠为聚多巴胺四氧化 三铁磁珠； 磁珠制备包括： （1） 将Fe3O4‑COOH 磁珠利用MEST溶液洗涤， 加入ED C溶液和NHSS溶液， 混 匀， 然后洗涤弃掉上清； （2） 盐酸多巴胺制备多巴胺溶液； （3） 将多巴胺溶液加入活化好的 Fe3O4‑COOH NPs中， 混匀， 将得到的P DA‑  Fe3O4NPs进行洗涤； 聚多巴胺四氧化三铁磁珠针对金黄色葡萄球菌捕获率大于50%； 针对沙门氏菌的捕获 率大于50%； 针对李斯特菌的 的捕获率小于 50%。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， Fe3O4‑COOH 磁珠与EDC溶液的体积比为1： 1‑1： 5； 和/或， F e3O4‑COOH 磁珠与NHS S溶液的体积比为1： 1 ‑1： 5。 3.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 加入EDC溶液和NHSS溶液后的室温垂直混 匀5min‑10h。 4.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 将多巴胺溶液加入活化好的Fe3O4‑COOH  NPs中， 混匀采用室温避光垂直混匀20mi n‑10h。 5.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 菌液与磁珠的混合包括： 将菌液与磁珠的 混合后混匀5mi n‑10h。 6.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 磁珠复溶包括： 将磁珠用PBS复溶。 7.一种聚多巴胺四氧化三铁磁珠捕获致病菌的方法在快检的应用， 其特征在于， 采用 权利要求 1‑6之一的方法进 行捕获致病菌， 然后 将复溶后的磁珠进 行致病菌快速检测； 针对 金黄色葡萄球菌捕获率大于50%； 针对沙门氏菌的捕获率大于50%； 针对李斯特菌的的捕获 率小于50%。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115491337 A 2聚多巴胺四氧化三铁磁珠捕获 致病菌的方 法及其在快检的 应用 技术领域 [0001]本发明涉及 一种致病菌捕获的方法， 尤其是涉及聚多巴胺四氧化三铁磁珠捕获致 病菌的方法及 在快检的应用。 背景技术 [0002]致病菌在我们的日常生活和自然环境中广泛传播， 对食品安全和公共卫生构成了 巨大的威胁。 因此， 迫切需要开 发快速可靠的病原体检测和鉴定方法， 以提高对公共卫生的 保护水平， 确保消费者的安全。 [0003]冷库中致病菌污染问题也给消费者带来健康隐患和冷库运营方保存带来较大的 损失， 经常使用的冷库 库房， 溶液潜伏不同种类的致病菌 。 [0004]李斯特菌， 又名单核球增多性李斯特菌、 李氏菌， 是一种兼性厌氧细菌， 为李斯特 菌病的病原体。 它 广泛存在于自然界中， 食品中存在的单增李氏菌对 人类的安全 具有危险， 该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖， 是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一。 金黄 色葡 萄球菌 （Staphylococcus  aureus， S.  aureus） 也称 “金葡菌”， 隶属于葡萄球菌属， 是革兰氏 阳性菌代表， 为一种常见的食源性致病微生物。 该菌最适宜生长温度为37℃。 沙门氏菌是一 种常见的食源性致病菌。 据 统计在世界各国的种类细菌性食物中毒中， 沙门氏菌引起的食 物中毒常列榜首。 [0005]在可能潜伏致病菌的冷库进行致病菌快速检测时， 李斯特菌能够在较低温度的环 境中仍可生长繁殖， 因此， 相对于其他致病菌， 例如金黄 色葡萄球菌、 沙门氏菌， 李 斯特菌是 其他致病菌的优势菌， 快速检测时常检测出李斯特菌， 而未检测金黄色葡萄球菌、 沙门氏 菌， 造成安全隐患。 [0006]因此， 建立一种特异性的、 不捕获李斯特菌或几乎不捕获李斯特菌， 而能捕获其他 其他致病菌， 例如金黄色葡萄球菌、 沙门氏菌的方法， 是十分必要的。 发明内容 [0007]本发明的目的在于针对现有技术的不足之处， 提供一种多巴胺四氧化三铁磁珠捕 获致病菌的方法及 在快检的应用。 [0008]一种聚多巴胺四氧化 三铁磁珠捕获致病菌的方法， 包括： 磁珠制备； 菌液与磁珠的混合； 磁珠与菌液 上清液分离； 磁珠复溶。 [0009]所述磁珠为聚多巴胺四氧化 三铁磁珠。 [0010]进一步的， 菌液是采样的液体； 或采样后稀释的液体； 或采样后进行培养得到的液 体。 在具体采样时， 采样的液体， 例如， 冷库中材料 （肉） 解冻后渗出的液体， 冷库冰渣等融化说　明　书 1/6 页 3 CN 115491337 A 3