(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211438262.7 (22)申请日 2022.11.17 (71)申请人 山东格研生物技 术有限公司 地址 261500 山东省潍坊市高密市高新 一 路158号 (72)发明人 薛晓飞　林云浩　张翼飞　 (51)Int.Cl. C12Q 1/06(2006.01) C12N 1/20(2006.01) C12N 1/02(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种洋葱伯克霍尔德氏菌显色培养基及其 应用 (57)摘要 本发明涉及一种洋葱伯克霍尔德氏菌显色 培养基及其应用， 属于微生物领域， 所述培养基 的组分包括蛋白胨、 葡萄糖、 氯化钠、 琼脂、 硫酸 庆大霉素、 显色剂、 助溶剂、 去离子水， pH值为 7.2‑7.4， 应用于洋葱伯克霍尔德氏菌的显色与 分离， 本发明培养基组方简单、 制备操作方便， 成 本低， 菌生长快、 便 于观察计数， 利于 推广。 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 CN 115491407 A 2022.12.20 CN 115491407 A 1.一种洋葱伯克霍尔德氏菌显色培养基， 其特征在于： 所述的洋葱伯克霍尔德氏菌显 色培养基每升含有15 ‑25g蛋白胨、 3 ‑10g葡萄糖、 5 ‑10g氯化钠、 10 ‑15g琼脂、 0.01 ‑0.1g硫酸 庆大霉素、 0.1 ‑0.5g显色剂， 2 ‑4ml助溶剂， 其 余为去离子水， pH值 为7.2‑7.4。 2.一种如权利要求1所述的洋葱伯克霍尔德氏菌 显色培养基的制备 方法， 其特 征在于： (1) 称取15‑25g所述蛋白胨、 3 ‑10g所述葡萄糖、 5 ‑10g所述氯化钠、 10 ‑15g所述琼脂、 0.1‑0.5g所述显色剂; (2) 将步骤 （1） 各组分加入一个干净的锥形瓶， 加入10 00mL去离子水， 搅拌溶解; (3) 用氢氧化钠调节pH 至7.2‑7.4; (4) 将锥形瓶中的混合液加热搅拌， 煮沸灭菌1 ‑5分钟; (5) 待 （4） 冷却至40 ‑60℃时， 加入0.01 ‑0.1g所述硫酸庆大霉素， 混匀后将培养基无菌 灌装入一次性无菌平皿， 制得 所述洋葱伯克霍尔德氏菌 显色培养基。 3.根据权利要求1所述的洋葱伯克霍尔德氏菌显色培养基， 其特征在于， 所述显色剂为 乙基咔唑。 4.根据权利要求1所述的洋葱伯克霍尔德氏菌显色培养基， 其特征在于： 所述助 溶剂为 N,N‑二甲基甲酰胺 （DMF） 或二甲亚砜。 5.根据权利要求1所述的洋葱伯克霍尔德氏菌显色培养基的应用， 其特征在于： 应用于 洋葱伯克霍尔德氏菌的显色与分离 。 6.一种应用如权利要求1所述的洋葱伯克霍尔德氏菌显色培养基的使用方法， 其特征 在于： 将临床采集的样本经过溶解稀释后， 用无菌涂布棒涂布于所述的洋葱伯克霍尔德氏 菌显色培养基上， 放入3 0‑35℃培养箱， 需氧培 养18‑24小时后观察结果。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115491407 A 2一种洋葱伯克霍尔德氏菌显色培养基 及其应用 技术领域 [0001]本发明为微生物技术领域， 特别涉及一种洋葱伯克霍尔德氏菌显色培养基及 其应 用。 背景技术 [0002]伯克霍尔德菌(burkholderia  cepacia)是一种广泛存在于水、 土壤、 植物和人体 中的革兰氏阴性细菌。 1949年美国的植物病理学家bur kholder首次发现它可以引起洋葱茎 腐烂， 称为洋葱 假单胞菌， 1992年将其归属为伯克霍尔德菌属， 称为洋葱伯克霍尔德菌 。 [0003]洋葱伯克霍尔德菌广泛存在于土壤及水中的革兰氏阴性杆菌， 对健康人体不致 病， 通常定植于囊性纤维病患者的肺部， 一旦感染， 致死率较高。 洋葱伯克霍尔德氏菌也是 进出口化妆品和进出口 口腔清洁类产品的检验项目。 [0004]洋葱伯克霍尔德氏菌的生长对于营养要求不高， 能在多种培养基上生长且生长良 好。 目前， 常用的用于检验洋葱伯克霍尔德氏菌的培养基有BCSA 琼脂和麦康凯琼脂， 但是都 需要经过选择性增菌的前 处理， 检验周期 较长， 菌落特征不明显， 且培养出疑似菌落后还需 要进行一系列生 化鉴定， 步骤繁琐， 检验 难度相对较大。 [0005]显色培养基是一类微生物自身代谢产生的特异性酶与培养基中相应的显色底物 结合并反应显色的新型培养基， 用来快速准确检测微生物， 现在市场上常见 的显色培养基 有大肠菌群显色培养基、 金黄色葡萄球菌显色培养基、 单核细胞增生李斯特氏菌显色培养 基、 念珠菌 显色培养基等， 还并未 出现洋葱伯克霍尔德氏菌 显色培养基的相关报道。 发明内容 [0006]为解决现有技术存在的以上问题， 本发明提供了一种洋葱伯克霍尔德氏菌显色培 养基及其应用。 [0007]本发明运用分子生物学、 微生物学、 化学及基本的碳氮源无机盐等作用原理， 通过 对培养基各组分进 行筛选和对其pH进 行调控， 研究出本发明的一种洋葱伯克霍尔德氏菌显 色培养基， 为洋葱伯克霍尔德氏菌提供了更 快捷简便的检验方案 。 [0008]本发明所采用的技 术方案为： 一种洋葱伯克霍尔德氏菌显色培养基， 其特征在于， 每升所述洋葱伯克霍尔德氏 菌显色培养基含有15 ‑25g所述蛋白胨、 3 ‑10g所述葡萄糖、 5 ‑10g所述氯化钠、 10 ‑15g所述琼 脂、 0.1‑0.5g所述显色剂， 其 余为去离子水， 并以氢 氧化钠调节pH值 为7.2‑7.4。 [0009]一种洋葱伯克霍尔德氏菌 显色培养基的配制方法， 包括如下步骤： （1） 称取15 ‑25g所述蛋白胨、 3 ‑10g所述葡萄糖、 5 ‑10g所述氯化钠、 10 ‑15g所述琼 脂、 0.01‑0.1g所述硫酸庆大霉素、 0.1 ‑0.5g所述显色剂； （2） 将步骤 （1） 各组分加入一个干净的锥形瓶， 加入10 00mL去离子水， 搅拌溶解； （3） 用氢 氧化钠调节pH 至7.2‑7.4； （4） 将锥形瓶置于电热套上缓慢加热， 边加热边用玻璃棒搅拌， 防止加热过程中培说　明　书 1/5 页 3 CN 115491407 A 3