(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211525559.7 (22)申请日 2022.12.01 (71)申请人 华南理工大 学 地址 510640 广东省广州市天河区五山路 381号 (72)发明人 王菊芳　文霞　谢小保　陈漪汶　 苏皑庭　 (74)专利代理 机构 广州科粤专利商标代理有限 公司 44001 专利代理师 刘明星 (51)Int.Cl. C12N 1/20(2006.01) C12Q 1/04(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种检测食品中VBNC状态醋酸菌的复苏培 养基及方法 (57)摘要 本发明公开了一种检测食品中VBNC状态醋 酸菌的复苏培养基及方法。 本发 明的复苏培养基 是先配置AS培养基， 然后在AS培养基中加入EMEM 培养液和/或椰子汁， 使得EMEM培养液体积分数 为25%～50%、 椰子汁体积分数为25%～50%， 或者 他们的总和为体积分数2 5%～50%， 其中AS培养基 每升含有胰蛋白胨4.0g～8.0g， 酵母膏1.5g～ 10g， 葡萄糖0.5g～8g， 余量为水。 检测方法是取 食品样品加入复苏培养基中振荡培养， 食品中 VBNC状态醋酸菌即可复苏并恢复生长能力。 本发 明方法简便快速， 为公共卫生安全提供了准确、 高效的检测方法， 可用于食品中VBNC状态醋酸菌 的快速检测。 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 CN 115537365 A 2022.12.30 CN 115537365 A 1.一种用于检测食品中VBNC状态醋酸菌的复苏培养基， 其特征在于， 是先配置AS培养 基， 然后在AS培养基中加入EMEM培养液和/或椰子汁， 使得EMEM培养液体积分数为25%～ 50%、 椰子汁体积分数为25%～50%， 或者他们的总和为体积分数25%～50%， 所述的AS培养基 每升含有胰蛋白胨4.0g～8.0g， 酵母膏  1.5g～10g， 葡萄糖0.5g～8g， 余 量为水。 2.根据权利要求1所述的复苏培养基， 特征在于， 所述的复苏培养基 中含EMEM培养液体 积分数为12.5% ～25%、 椰子汁体积分数为12.5% ～25%。 3.根据权利要求2所述的复苏培养基， 特征在于， 所述的复苏培养基 中含EMEM培养液体 积分数为12.5%、 椰子汁体积分数为12.5%， 或所述的复苏培养基中含EMEM培养液体积分数 为25%、 椰子汁体积分数为25%。 4.一种用于检测食品中VBNC状态醋酸菌的方法， 其特征在于， 取食品样品加入复苏培 养基中振 荡培养， 食品中污染的VBNC状态 Asaia属醋酸菌 即可复苏并恢复生长能力， 所述的 复苏培养基是先配置AS培养基， 然后在AS培养基中加入EMEM培养液和/或椰子汁， 使 得EMEM 培养液体积分数为25%～50%、 椰子汁体积分数为25%～50%， 或者他们的总和为体积分数25% ～50%， 所述的AS培养基每升含有胰蛋白胨4.0g～8.0g， 酵母膏  1.5g～10g， 葡萄糖0.5g～ 8g， 余量为水。 5.根据权利要求4所述的方法， 特征在于， 所述的取食品样品加入复苏培养基， 其培养 条件是振荡培 养是置于28±2℃， 180rpm培 养8h～24h。 6.根据权利要求4所述的方法， 特征在于， 所述的食品样品是指含糖量大于0.1g/mL的 液体食品。 7.根据权利要求6所述的方法， 特征在于， 所述的液体食品是含糖饮料、 果汁、 蜂蜜水、 调味糖浆。 8.根据权利要求4所述的方法， 特征在于， 所述的醋酸菌是指 Asaia lannensis 或Asaia  bogorensis 。 9.根据权利要求4所述的方法， 特征在于， 所述的复苏培养基 中含EMEM培养液体积分数 为12.5%～25%、 椰子汁体积分数为12.5% ～25%。 10.根据权利要求9所述的方法， 特征在于， 所述的复苏培养基中含EMEM培养液体积分 数为12.5%、 椰子汁体积分数为12.5%， 或所述的复苏培养基中含EMEM培养液体积分数为 25%、 椰子汁体积分数为25%。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115537365 A 2一种检测食品中VBNC状态醋酸菌的 复苏培养基 及方法 技术领域 [0001]本发明属于微生物快速检测领域， 具体涉及一种检测食品中VBNC状态醋酸菌的复 苏培养基及方法。 背景技术 [0002]醋酸菌得名于它们能够将乙醇氧化成醋酸。 然而Asaia属细 菌与其他醋酸菌不同， 它们不能(或只能轻微地)将乙醇氧化为乙酸。 Asaia属细菌是一种革兰氏阴性 发酵菌， 过氧 化氢酶阳性， 氧化酶阴性， 最佳生长温度为22℃～30℃， 在0.35%乙酸和甲醇的培养基上不 生长[1]。 目前Asaia属共有8株菌， 分别是 Asaia bogorensis 、Asaia siamensis 、Asaia  krungthepensis 、Asaia lannensis 、Asaia spathodeae 、Asaia astilbes 、Asaia  platycodi 、Asaia prunellae。 到目前为止， Asaia bogorensis 和Asaia lannensis 可以从 热带气候下的花朵和果 实、 肠道和蚊子的生殖道以及作为机会致病菌从免疫缺陷的儿童和 成人血液中分离出来。 由于对防腐剂、 消毒剂和抗生素的低敏感性， 这些细菌经常造成食品 的污染， 尤其是含糖量较高的饮料。 在变质的饮料中， 它们形成粉红色或橙色的细胞聚集 体， 但是无法用普通的培养基分离出来， 导致检测结果出现假阴性， Asaia细菌对饮料行业 的污染已成为 一个严重的问题。 [0003]活的但不可培养(viable  but non‑culturable  ， VBNC)状态是细菌应对外部压力 （如饥饿、 寒冷） 的一种常见生存策略。 在1982年， VBNC细胞被发现并呈现后， 研 究人员发现 了不同种类的细菌可以以VBNC状态存在于自然界中， VBNC细菌的特征是不能在传统培养基 上形成菌落， 但 仍然具有代谢活动。 VBNC状态使细菌能够逃避常规平板计数方法的检测， 对 医疗卫生和食品安全构成了潜在的风险。 [0004]更重要的是该属细菌对人类 的健康带来巨大威胁， 有报道称Asaia属细菌可引起 癌症和骨髓移植的患儿发生血液感染以及两例有扩张性性疾病的儿童感染、 导致具有慢性 疾病和/或内置器械的病人感染等， 目前发现大多数引起临床感染 的是Asaia bogorensis 和Asaia lannensis ， 其中Asaia lannensis 对抗生素的耐药性更强， 另外， Asaia  lannensis 和Asaia bogorensis 无法在MH （Mueller –Hinton broth） 肉汤培养基中生长， 无 法进行敏感性测试， 给临床用药带来极大困难， 极有可能是 Asaia lannensis 和Asaia  bogorensis 进入VBNC状态 导致其无法在普通培养基上生长。 虽然目前人们对这些新出现的 Asaia病原体如何传播给人类知之甚少， 但食物可能是最重要的来源。 Asaia属对饮料的污 染以及其引发的临床感染不仅造成严重的经济损失， 而且对公共健康构成严重威胁， 因此， 研究如何准确快速的检出食品中处于VBNC状态的Asaia属醋酸菌非常重要。 也有研 究者对 其它进入VBNC状态的细菌进 行了复苏培养， 但是多 数培养基复杂， 不易操作， 根据我们前期 的研究， 也不能用来复苏Asaia属醋酸菌。 因此， 食品安全监控需要寻找更加简单、 高效的复 苏方法以评估 食品安全状态。说　明　书 1/5 页 3 CN 115537365 A 3