(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210008175.1 (22)申请日 2022.01.04 (71)申请人 江汉大学 地址 430000 湖北省武汉市武汉经济技 术 开发区三角湖路8号江汉大 学 (72)发明人 李论　彭海　高利芬　方治伟　 万人静　陈利红　李甜甜　周俊飞　 肖华峰　 (74)专利代理 机构 河南豫龙律师事务所 41 177 代理人 游国战 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种人类疱疹病毒8型的引物组合物、 试剂 盒及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种人类疱疹病毒8型的MNP 分子标记、 引物对组合物、 试剂盒及其应用。 所述 引物包括5对引物中的至少一对， 所述引物对均 包括正向引物和反向引物， 引物序列如SEQ  ID  NO.6～SEQ  ID NO.15所示。 所述引物特异的鉴定 HHV‑8的5个MNP分子 标记， 是指在HHV ‑8基因组上 筛选的区分于其他物种且在物种内部具有多个 核苷酸多态性的基因组区域。 所述引物互不干 扰， 可一次性对多样本的所述MNP标记进行序列 分析， 用于HHV ‑8的特异鉴定， 遗传变异 检测和指 纹数据库构建； 包含了所述引物的所述试剂盒对 HHV‑8具有免培养、 高通量、 多靶 点、 高灵敏、 免培 养的检测优势， 对HHV ‑8的科研和防疫监测均具 有重要意 义。 权利要求书1页 说明书10页 序列表3页 CN 114214464 A 2022.03.22 CN 114214464 A 1.一种人类疱疹病毒8型的MNP分子标记， 其特征在于， 所述的MNP分子标记的核苷酸序 列如序列表中SEQ  ID NO.1至SEQ  ID NO.5中任一核苷酸序列所示， 它们分别编号为MNP ‑1、 MNP‑2、 MNP‑3、 MNP‑4、 MNP‑5。 2.权利要求1所述的人类疱疹病毒8型的MNP分子标记 组合， 其特征在于， 选自人类疱疹 病毒8型的MNP分子标记MNP ‑1、 MNP‑2、 MNP‑3、 MNP‑4、 MNP‑5中的两种或更多种。 3.权利要求1所述的人类疱疹病毒8型的MNP分子标记的引物， 其特征在于， 所述引物序 列为序列表中SEQ  ID NO.6至SEQ  ID NO.15， 其中序列 SEQ ID NO.6至SEQ  ID NO.10为正向 引物， SEQ  ID NO.11至SEQ  ID NO.15为反向引物， SEQ  ID NO.6与SEQ  ID NO.11用于扩增 MNP1， SEQ ID NO.7与SEQ  ID NO.12用于扩增MNP2， 以此类 推。 4.权利要求3所述的人类疱疹病毒8型的MNP分子标记引物的组合， 其特征在于， 选自扩 增分子标记MNP ‑1到MNP‑5的引物对的两对或更多对。 5.一种鉴定人类疱疹病毒8型的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括权利要求3所述 的任一对引物或如权利要求 4所述的引物对组合。 6.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒还 包括多重PCR预混液。 7.权利要求1所述的人类疱疹病毒8型的MNP分子标记或权利要求2所述的人类疱疹病 毒8型的MNP分子标记组合在非诊断目的的人类疱疹病毒8型的定性鉴定、 毒株间和毒株内 的遗传变异监测、 MNP 指纹数据库的构建或精细分型鉴定方面的应用。 8.权利要求3所述的人类疱疹病毒8型的MNP分子标记引物或权利要求4所述的人类疱 疹病毒8型的MNP分子标记引物组合在非诊断目的的人类疱疹病毒8型的定性鉴定、 毒株间 和毒株内的遗传变异监测、 MNP 指纹数据库的构建或精细分型鉴定方面的应用。 9.权利要求5或6所述的试剂盒在非诊断目的的人类疱疹病毒8型的定性鉴定、 毒株间 和毒株内的遗传变异监测、 MNP 指纹数据库的构建或精细分型鉴定方面的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114214464 A 2一种人类疱疹病毒8型的引物组合物、 试剂盒及其应用 技术领域 [0001]本发明实施例涉及生物技术领域， 特别涉及一种人类疱 疹病毒8型的引物组合物、 试 剂盒及其应用。 背景技术 [0002]疱疹病毒生物分类归属于疱疹病毒科， 有分α、 β、 γ三个亚科， 分别称之α疱疹  病 毒、 β疱疹病毒和γ疱疹病毒， 存在于人和动物体内， 与人类感染有关者包括:α疱疹  病毒 (单纯疱疹病毒、 水痘 ‑带状疱疹病毒)； β 疱疹病毒(巨细胞病毒、 人疱疹病毒6型  即HHV‑6和 7型即HHV ‑7)和γ疱疹病毒(EB病毒、 人疱疹病毒8型即HHV ‑8)。 不同亚  科的疱疹病毒感染 特性不同， 比如， α 疱疹病毒其宿主 范围广， 复制周期短， 繁殖速度快，  是一类溶细胞性感染 的病毒， 多潜伏在感觉神经节内； β疱疹病毒的宿主范围窄， 在细胞  培养中复制缓慢， 繁殖 周期长， 受感染细胞变大形成巨细胞， 病毒在淋巴细胞内潜伏感染，  也可潜伏于 分泌腺、 肾 脏或其他组织； γ疱疹病毒 主要感染B淋巴细胞并长期潜伏， 大多  不引起溶细胞性病变。 [0003]现有的筛查技术是通过镜检、 分离培养、 免疫学检测或经DNA探针进行原位杂交， 在 检测周期、 复杂度、 交叉反应、 检测变异、 准确性、 灵敏度等方面存在一个或多个局限，   病毒的分离培养尤其困难， 现有技术难以特异鉴定一种疱疹病毒， 因此， 开发每种疱疹病   毒特异的检测技术， 包括分子标记、 引物和试剂盒等， 实现特定疱疹病毒的精准特异检测，   成为亟待解决的问题。 发明内容 [0004]本发明目的是提供一种鉴定人类疱疹病毒8型(HHV ‑8)的分子标记、 引物组、 试剂 盒 及应用， 可 以对HHV‑8进行定性鉴定和变异检测， 具有高通量、 高准确、 高特异、 高灵敏   的效果。 [0005]为了实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0006]在本发明的第二方面， 提供了一种鉴定(HHV ‑8)的引物组合物， 所述多重PCR引物 组 合物包括5对引物对中的至少一对。 每 个MNP标记的引物包括 正向引物和反向引物。 [0007]在本发明的另一方面， 提供了一种用于鉴定HHV ‑8试剂盒， 所述试剂盒包括所述的 引 物组合物。 [0008]进一步地， 所述试剂盒还 包括多重PCR预混液。 [0009]又一方面， 本 发明实施例提供了一种引物组的应用， 所述应用包括： 利用所述引物 组 对HHV‑8基因组上的5个MNP标记 中的至少一个进行检测， 根据获得的MNP标记的序列进   行非诊断目的的HHV ‑8的定性鉴定、 HHV ‑8内部的遗传变异鉴定、 HHV ‑8毒株间的遗传变异   鉴定、 MNP指纹数据库的构建， 所述5个MNP标记的序列如序列表中SEQ  ID NO.1至SEQ  ID NO.5所示。 [0010]MNP标记是一种新型分子标记， 是指在基因组上一段区域内由多个核苷酸引起的 多态性 标记。 与SSR标记和SNP标记相比， MNP标记具有以下优势： (1)等位基因丰富， 单个说　明　书 1/10 页 3 CN 114214464 A 3