(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210005178.X (22)申请日 2022.01.04 (71)申请人 博尔诚 （北京） 科技有限公司 地址 100176 北京市大兴区北京经济技 术 开发区宏达南路18号院3号楼10层 (72)发明人 关晋霞　韩晓亮　连明　张聪　 王小奇　吴宁宁　李永君　叶志海　 (74)专利代理 机构 北京彩和律师事务所 1 1688 代理人 闫桑田 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6818(2018.01) C12Q 1/6837(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于宫颈癌筛查的标志物、 探针组合物及其 应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于宫颈癌筛查的标志 物、 探针组合物及其应用， 所述标志物选自9 个标 志物的任一种。 本发明使用所述的标志物， 能够 灵敏和特异地检测该基因的甲基化的状态， 从而 可以用于对外周血游离DNA的检测， 并且， 本发明 所述的组合物以非侵入性的方式用于无症状人 群的筛查， 降低了侵入性检测造成的危害， 所述 的组合物具有更高的灵敏度和准确度， 能够实现 实时监测。 权利要求书2页 说明书22页 序列表18页 CN 114395626 A 2022.04.26 CN 114395626 A 1.一种用于检测宫颈癌的标志物， 其特征在于， 所述标志物选自下述中的一种： LINC00643、 ZNF773、 CITED1、 GABRA1、 BCOR、 NXPH1、 DIAPH2、 FAM13 3A和BCOR。 2.根据权利 要求1所述的标志物， 其特征在于， 所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ  ID  NO:1‑9所示的一种， 优选所述标志 物为甲基化后的标志 物。 3.一种探针组合物， 其特征在于， 所述探针组合物包含靶向权利要求1或2所述标志物 甲基化的探针。 4.根据权利要求3所述的探针组合物， 其特征在于， 所述探针组合物包含高甲基化的第 一探针组合物和 低甲基化的第二探针组合物， 所述第一探针组合物用于与经重亚硫酸盐转 化的CG高甲基化的区域杂交， 所述第二探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的C G低甲基化 的区域杂交； 优选的， 所述第一探针组合物包括n个探针， 所述n个探针与经重亚硫酸盐转化的CG高 甲基化的区域的正 义链和反义链的每 个核苷酸杂交； 优选的， 所述第二探针组合物包括m个探针， 所述m个探针与经重亚硫酸盐转化的CG低 甲基化的区域的正 义链和反义链的每 个核苷酸杂交； 优选的， n和m均是1 ‑10中的任意整数； 优选的， 第n ‑1个探针和第n个探针之间有x1个核苷酸重叠， 优选的， x1为0‑100中的任意 整数； 优选的， 第m ‑1个探针和第m个探针之间有x2个核苷酸重叠， 优选的， x2为0‑100中的任意 整数； 进一步优选 的， 所述第一探针组合物包括如SEQ  ID NO:10‑27所示的一种 或两种核苷 酸序列， 所述第二探针组合物包括如SEQ  ID NO:28‑45所示的一种或两种和苷酸序列。 5.标志物在制备用于检测宫颈癌的试剂盒中的用途， 其特征在于， 所述标志物选自下 述中的一种： L INC00643、 ZNF773、 CITED1、 GABRA1、 BCOR、 NXPH1、 DIAPH2、 FAM13 3A和BCOR。 6.根据权利要求5所述的用途， 其特征在于， 所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ  ID  NO:1‑9所示的一种， 优选所述标志 物为甲基化后的标志 物； 优选的， 所述探针组合物用于靶向宫颈癌的 甲基化后的标志 物； 优选的， 所述探针组合物为权利要求3或4所述的探针组合物。 7.一种用于宫颈癌检测的组合物， 其特征在于， 所述组合物包括用于检测选自下述标 志物中任一种甲基化的核酸： LINC00643、 ZNF773、 CITED1、 GABRA1、 BCOR、 NXPH1、 DIAPH2、 FAM133A和BCOR。 8.根据权利 要求7所述的组合物， 其特征在于， 所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ  ID  NO:1‑9所示的一种。 9.根据权利要求7或8所述的组合物， 其特征在于， 所述核酸包括权利要求3或4所述的 探针组合物； 优选的， 所述核酸包括： 引物， 所述引物为所述标志物的靶序列中的至少9个核苷酸的片段， 所述片段包含至少 一个CpG二核苷酸序列； 优选的， 所述核酸还 包括： 探针， 所述探针为在中等严紧或严紧条件下与所述标志物的靶序列中的至少15个核苷权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114395626 A 2酸片段杂交， 所述片段包 含至少一个CpG二核苷酸序列； 优选的， 所述组合物还包括将标志物的靶序列的5位未甲基化胞嘧啶碱基转化为尿嘧 啶的试剂； 优选的， 所述用于检测标志 物的靶序列甲基化的核酸还 包括： 优先与处于非甲基化状态的靶序列结合的阻断剂。 10.一种试剂盒， 其包含权利要求1或2所述的标志物或者权利要求3或4所述的探针组 合物或者权利要求7 ‑9中任一项所述的组合物。 11.一种芯片， 其包含权利要求1或2所述的标志物或者权利要求3或4所述的探针组合 物或者权利要求7或8所述的组合物。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114395626 A 3