(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210003583.8 (22)申请日 2022.01.04 (71)申请人 南京农业大 学 地址 210095 江苏省南京市玄武区卫岗1号 (72)发明人 周波　徐庆磊　 (74)专利代理 机构 南京天华专利代理有限责任 公司 32218 代理人 傅婷婷　徐冬涛 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种鉴定猪攻击性强弱的分子标记及检测 方法和应用 (57)摘要 本发明公开了一种鉴定猪攻击性强弱的分 子标记及检测方法和应用。 本发 明首次发现与猪 的攻击行为发生显著关联的SNP， 位于猪基因组 Sscrofa11.1版本参考序列第8号染色体的第 133243042bp处多态性为G/A的SNP。 本发明提供 的与猪的攻击 行为发生显著关联的SNP可作为分 子标记用于检测猪的攻击性强弱， 选育攻击性相 对较低的猪群体， 对于提高猪肉品质和改善动物 福利具有重要的指导意义。 本发明操作简单， 仅 需获得个体耳样或血样基因组便可自动化上机 检测， 获得个体的基因型， 从而分析该个体的攻 击性， 费用低， 精确性高， 省时省力， 适于推广应 用。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图3页 CN 114317773 A 2022.04.12 CN 114317773 A 1.一种开发鉴定猪攻击性强弱的分子标记的方法， 其特征在于以含有猪基因组 Sscrofa11.1版本第8号染色体的第133243042bp处rs335052970核苷酸位点的核苷酸序列 为基础序列， 设计引物对， 以猪基因组DNA为模板进行PCR扩增， 使猪基因组Sscrofa11.1版 本猪第8号染色体的第13 3243042bp处rs3 35052970核苷酸 位点转化为分子标记。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于所述的引物对序列 为上游引物： SEQ  ID NO： 2， 下游引物： SEQ  ID NO： 3。 3.按照权利要求1或2所述的方法得到的分子标记。 4.根据权利要求3所述分子标记， 其特征在于所述的分子标记序列如SEQ  ID NO： 1所 示， 所述的猪基因组Sscrofa11.1版本第8号染色体的第133243042bp处rs335052970核苷酸 位点在SEQ ID NO： 1中位于第2 93位， 存在G/A多态性。 5.一种鉴定猪攻击性强弱的SNP标记引物对， 其特征在于上游引物为： SEQ  ID NO： 2， 下 游引物为： SEQ  ID NO： 3。 6.权利要求3或4所述的分子标记、 权利要求5所述的引物对在鉴定猪攻击性强弱中的 应用。 7.权利要求5所述的引物对在制备鉴定猪攻击性强弱的试剂中的应用。 8.一种用于检测猪攻击性强弱的试剂盒， 其特 征在于包 含权利要求5所述的引物对。 9.权利要求3或4所述的分子标记、 权利要求5所述的引物对或包含所述特异性引物的 试剂盒在提高动物福 利或猪遗传育种中的应用。 10.一种鉴定猪攻击性强弱的方法， 其特征在于包括检测待测猪基因组Sscrofa11.1版 本第8号染色体的第133243042bp处rs335052970核苷酸位点的基因型， 通过基因型判 定确 定猪只猪攻击性强弱， 其中基因型为A A的猪的攻击性较强， 基因型为G G的猪的攻击性较弱。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114317773 A 2一种鉴定猪攻 击性强弱的分子标记及检测方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物学及 生物分析应用领域， 具体涉及 一种鉴定猪攻击性强弱的 分子标记及检测方法和应用。 背景技术 [0002]猪混群后的攻击行为会导致体表损伤、 生长速度减慢、 肉质变差以及由攻击应激 引起短暂免疫力降低等问题， 影响养猪业的健康发展， 同时也是一项重要的动物福利问题。 近年来人们已经认识到在猪育种中加强对猪攻击行为性状选择的必 要性， 但目前针对猪攻 击行为的研究多数停留在识别判断、 营养调控、 生理生化标记物等， 而对于猪攻击行为遗传 机制的解析报道较少。 [0003]随着分子生物学技术和数量遗传学的发展， 分子遗传标记和标记辅助选择被广泛 地应用于畜禽遗传育种中， 并在提高动物生产性能等方面取得了显著的效果。 Sanger测序 法主要是对短基因片段(有效长度一般800bp)进行SNP鉴定， 通过直接测序方法进行SNP检 测的检出率及准确度接近100％， 是测序的金标准。 Sanger测序法检测SNPs的原理是针对 可 能存在SNPs的基因组片段设计特异 性引物， 进 行PCR扩增， 根据测序结果结合原始序列找到 SNPs并确定碱基替换类型。 开发高效的用于检测猪攻击性强弱的SNP分子标记对于猪攻击 行为发生的检测和选育出低攻击性的猪具有重要意义。 然而， 目前尚缺 乏能够直接用于检 测猪攻击性强弱的SNP分子标记。 发明内容 [0004]为解决现有技术中存在的问题， 本发明的目的是提供一种准确性高、 方便快捷、 价 格低廉， 适 合推广应用的检测猪攻击性强弱的方法。 [0005]为实现上述目的， 本 发明通过对大量的具有攻击行为表型的猪的包括5 ‑羟色胺通 路、 多巴胺通路、 轴突引导通路等多个信号通路内的基因及其上下游序列进行分析， 发现了 与猪攻击行为相关的1个SNPs， 这个SNPs位于猪基因组Sscrofa11.1版本参考序列第8号染 色体的第133243042bp处(rs335052970)， 具有G/A多态性。 ARHGAP24  rs335052970基因型为 AA的猪的攻击性较强， 基因型为GG的猪的攻击性较弱。 该SNP均位于ARHGAP24基因的5 ’侧翼 区， 该SNP的突变可能通过调控ARHGAP24基因的表达或改变 mRNA的结构等， 使得猪的攻击行 为异常。 [0006]具体地， 本发明的技 术方案如下： [0007]一种开发鉴定猪攻击性强弱的分子标记的方法， 以含有猪基因组Sscrofa11.1版 本第8号染色体的第133243042bp处rs335052970核苷酸位点的核苷酸序列为基础序列， 设 计引物对， 以猪基因组DNA为模板进行PCR扩增， 使猪基因组Sscrofa11.1版本猪第8号染色 体的第13 3243042bp处rs3 35052970核苷酸 位点转化为分子标记。 [0008]作为本发明的一种优选， 所述的引物对序列为上游引物： SEQ  ID NO： 2， 下游引物： SEQ ID NO： 3。说　明　书 1/4 页 3 CN 114317773 A 3