(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210006626.8 (22)申请日 2022.01.05 (71)申请人 广西南亚热带农业科 学研究所 地址 532415 广西壮 族自治区崇左市龙州 县彬桥乡 (72)发明人 周彩霞　李文砚　周婧　卢美瑛　 韦雪英　韦优　赵静　蒋娟娟　 黄丽君　卓福昌　唐景美　周之珞　 颜桢灵　罗培四　杨志强　卢艳春　 孔方南　 (74)专利代理 机构 南宁启创知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 4512 2 代理人 谢美萱 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01)C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种蛋黄果SCoT分子标记的PCR反应 体系 (57)摘要 本发明公开了一种蛋黄果SCoT分子标记的 PCR反应体系， 属于生物技术领域。 该该PCR反应 体系的组成与含量如下： 模板DNA为80ng， Mg2+为 3mmol/L， dNTPs浓度为0.25mmol/L， 引物浓度为 0.6μmol/L， Taq酶浓度为2U。 所述引物为SCoT9、 SCoT16、 SCoT24、 SCoT33、 SCoT48中的任一条， 其 核苷酸序列如SEQ  ID NO.1‑SEQ ID NO.5所示。 本发明所建立的蛋黄果SCoT ‑PCR反应体系扩增 出的条带稳定性高， 清晰度高， 具有操作简单、 灵 敏度高、 重复性好等优点， 能够实现对蛋黄果遗 传多样性的分析。 权利要求书1页 说明书9页 序列表2页 附图4页 CN 114292948 A 2022.04.08 CN 114292948 A 1.一种蛋黄果SCoT分子标记的PCR反应体系， 其特征在于， 该PCR反应体系的组成与含 量如下： 模板DNA为80ng， Mg2+为3mmol/L， dNTPs浓度为0.25mmol/L， 引物浓度为0.6 μmol/L， Taq酶浓度为2U。 所述引物为SCoT9、 SCoT16、 SCoT24、 SCoT33、 SCoT48中的任一条， 其核苷酸序列如SEQ   ID NO.1‑SEQ ID NO.5所示。 2.根据权利要求1所述的蛋黄果SCoT分子标记的PCR反应体系， 其特征在于， 所述PCR反 应程序为： 94℃ 预变性3min； 94℃1min， 50℃退火1min， 72℃2min， 进行35个循环； 72℃延伸 5min； 4℃保存。 3.如权利要求1 ‑2任一所述的蛋黄果SCoT分子标记的PCR反应体系在蛋黄果遗传多样 性评价分析中的运用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114292948 A 2一种蛋黄果SCoT分子标记的PCR反 应体系 技术领域 [0001]本发明属于生物技术领域， 具体涉及 蛋黄果SCoT分子标记的最佳PCR反应体系的 构建。 背景技术 [0002]蛋黄果(Lucuma  nervosa A.DC)， 又名狮头果、 蛋果、 桃榄、 仙桃等， 为山榄科 (Sapotaceae)蛋黄果属(Lucuma)多年生的热带常绿稀有果树。 原产古巴和美洲热带， 20世 纪30年代开始引入中国， 适宜在我国北纬24 °以南的地区种植(邓成菊等， 2013)。 蛋黄果果 肉黄色粉质， 似煮熟的蛋黄， 口感独特， 含有丰富的人体必需氨基酸， 其蛋白质、 矿物质和维 生素等营养成分都比芒果高(欧世坤等， 2007)， 且其成熟期一般在12月到第二年3月份， 为 供果期较长的淡季水果， 对水果市场具有良好的调节和促进作用(蛋黄果引种试种初报， 罗 心平等， 2004)。 除鲜食外， 蛋黄果还被加工成果酱、 奶油、 果酒和醋等(蛋黄果果醋生产工艺 的研究， 顾宗珠， 2011)； 其叶片中含有8种三萜 类化合物， 因此具有较高的药用价值(Fu ‑Cai  Ren， 2019)。 近年来， 蛋黄果的研究在我国正逐步展开， 广西、 海南、 广东、 云南和福建等地区 先后引种试种， 并筛选出一些适应性好、 抗性强、 坐果率高、 果实品质优的品种， 如 “仙桃1 号”(周婧， 2011)、“仙桃2号”(周婧， 2012)、“蛋黄果云热‑205”(2012)和“蛋苹一号 ”(邓成菊 等， 2014)等， 并对其栽培管理以及果实保鲜与加工等方面进行了相关 的研究， 但分子标记 在蛋黄果上的研究尚少， 仅有邢姗姗等(2009)探讨了蛋黄果ISSR—PCR反应的最佳体系， 且 尚无种质资源鉴定、 遗传多样性分析等方面的研究。 [0003]目标起始密码子多态性(start  codon targeted  polymorphism， SCoT)分子标记 是一种基于单引物扩增目的基因的共显性中性分子标记方法， 与传统的分子标记相比， 其 能有效产生与性状连锁的标记， 是一种能跟踪性状的新型分子标记， 其最早由Collard和 Mackill(2009)提出并在水稻上应用， 因其重复性好、 灵敏度高、 稳定性强、 操作简单、 成本 较低、 引物通用、 多态性高、 遗传信息丰富等优点被广泛用于其他植物资源的研究， 如割手 密(罗霆等， 2013)、 芥菜(林清等， 2013)、 番木瓜(杨祥燕等， 2013)、 鸭茅(蒋林峰等， 2014)、 枸杞(查美琴等， 2016)、 皂荚(张安世等， 2017)、 猕猴桃(张安世等， 2017)、 柑橘(韩国辉等， 2019)、 杨桃(欧景莉等， 2019)和地黄(杨珂等， 2019)等种质资源的遗传多样性研究、 亲缘关 系研究以及DNA指纹图谱构建等， 但由于植物品种不同， 生长特性不同， 具体标记过程， 引物 的共显性等也有 所不同。 目前国内外尚无针对蛋黄果， 利用SCoT分子标记进 行质资源鉴定、 遗传多样性分析的文献报道， 因此， 构建优化蛋黄果SCoT ‑PCR反应体系， 获得最佳反应体 系， 为今后利用SCoT分子标记进行蛋黄果种质资源遗传多样性分析、 种质保护和创新选种 等研究提供技 术保障基础。 发明内容 [0004]本发明的目的是提供一种蛋黄果SCoT分子标记的PCR反应体系， 为蛋黄果的生物 学研究提供参 考。 本发明的反应 体系具有稳定性强， 扩增出的条 带清晰度高等特点。说　明　书 1/9 页 3 CN 114292948 A 3