(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210010027.3 (22)申请日 2022.01.05 (71)申请人 中国人民解 放军军事科学院军事医 学研究院 地址 100850 北京市海淀区太平路27号 (72)发明人 王治东　李亚琼　王琪　戚振华　 厉卫红　周仕香　 (74)专利代理 机构 哈尔滨市阳光惠远知识产权 代理有限公司 2321 1 代理人 邓宇 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) G16B 25/10(2019.01)G16B 25/20(2019.01) G16B 30/00(2019.01) (54)发明名称 一组标志物、 检测模 型及其在辐射剂量检测 中的应用 (57)摘要 一组标志物、 检测模 型及其在辐射剂量检测 中的应用， 属于生物检测技术领域。 为了解决现 有辐射生物剂量估算方法存在的问题， 本发明基 于DDB2、 AEN、 TRIAP1和TRAF4的本底水平和在辐 射早期的敏感性特异性， 针对每个基因在不同检 测时间点检测给出了指导的阈值， 最终， 针对这 四种基因在辐射早期不同的变化模式对其进行 组合， 构建了有效的辐射早期剂量检测模型。 该 模型可以在暴露后24小时内用于大批量核辐射 受照人员分类和剂量估算， 为辐射剂量相应的科 学研究提供了新的思路和方法。 权利要求书2页 说明书10页 附图3页 CN 114369655 A 2022.04.19 CN 114369655 A 1.一种用于检测辐射剂量的标志物， 其特征在于， 所述标志物由AEN基因、 DDB2基因、 TRIAP1基因和TRAF4基因组成； 所述AEN基因的GeneID为64782； 所述DDB2基因的GeneID为 1643； 所述TRIAP1基因的GeneID为5149 9； 所述TRAF4基因的Gene  ID为9618。 2.一种辐射剂量的检测模型， 其特征在于， 以权利要求1所述的标志物为检测目标， 通 过不同辐射后时间对应的公式来计算辐射剂量， 所述模型为Dose2h＝1.5129 ×AEN‑ 1.8314； Dose4h＝0.374 ×D(TRAF4)+0.541 ×D(DDB2)， D(TRAF4)＝0.158e0.4637×TRAF4， D (DDB2)＝4.6682 ×DDB2‑7.4239； Dose8h＝0.111 ×D(AEN)‑0.109×D(TRIAP1)+0.941 ×D (DDB2)+0.080 ×D(TRAF4)， D(AEN)＝0.1685e0.2132×AEN， D(TRIAP1)＝0.1956e0.3743×TRIAP1， D (DDB2)＝0.6926 ×DDB2‑3.1684， D(TRAF4)＝0.0912e1.026×TRAF4； Dose12h＝0.616 ×D (TRIAP1)+0.412 ×D(DDB2)， D(TRIAP1)＝0.1147e0.6063×TRIAP1， D(DDB2)＝0.2054e0.3563×DDB2； Dose24h＝0.5452 ×TRIAP12‑1.6696×TRIAP1+1.2567； 所述Dose为辐射剂量(Gy)， 公式中 AEN， TRAF4， D DB2和TRIAP1分别表示各 标志物基因的相对拷贝数。 3.一种辐射剂量检测方法， 其特 征在于， 所述方法包括如下步骤： 步骤一、 获取用于辐射剂量检测的标志 物， 所述标志 物为权利要求1所述的标志 物； 步骤二、 建立用于辐射剂量的检测模型， 所述模型为权利要求2所述的模型； 步骤三、 利用步骤二所述模型检测 辐射剂量。 4.根据权利要求3所述的方法， 其特 征在于， 步骤三包括以下步骤： (1)采集人外周血作为样品， 提取总RNA， 反转录为cDNA； (2)利用AEN基因、 DDB2基因、 TRIAP1基因和TRAF4基因对应的上下游引物和探针， 采用 RealTimePCR的TaqMan探针两步法进行qRT ‑PCR分析； (3)利用2‑Δ ΔCT方法对样品中各基因的相对拷贝数进行计算； (4)根据步骤(3)获得的各基因的相对拷贝数和步骤二所述的检测模型计算辐射剂量。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述AEN基因对应的上游引物核苷酸序列 如SEQ ID NO.4所示， 下游引物核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示； 所述DDB2基因对应的上游 引物核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 下游引物核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示； 所述 TRIAP1基因对应的上游引物核苷酸序列如SEQ  ID NO.7所示， 下游引物核苷酸序列如SEQ   ID NO.8所示； 所述TRAF4基因对应的上游引物核苷酸序列如SEQ  ID NO.10所示， 下游引物 核苷酸序列如SEQ  ID NO.11所示； 所述AEN基因的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示； 所述DDB2基因的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示； 所述TRIAP1基因的探针的核苷酸 序列如SEQ  ID NO.9所示； 所述TRAF4基因的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.12所示。 6.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述2‑ΔΔCT方法中， 以β ‑actin作为内参基 因。 7.一种辐射剂量的检测系统， 其特征在于， 包括： (1)检测权利要求1所述标志物的基因 相对拷贝数的平台， 所述平台包括用于检测标志 物的引物和探针； 和(2)权利要求2所述的辐射剂量检测的模型； 其中， 通过将(1)获得的标志物的相对拷贝数， 在权利要求2所述的检测模型中计算辐 射剂量。 8.根据权利要求7所述的检测系统， 其特征在于， 所述AEN基因对应的上游引物核苷酸 序列如SEQ  ID NO.4所示， 下游引物核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示； 所述DDB2基因对应的权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114369655 A 2上游引物核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 下游引物核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示； 所述 TRIAP1基因对应的上游引物核苷酸序列如SEQ  ID NO.7所示， 下游引物核苷酸序列如SEQ   ID NO.8所示； 所述TRAF4基因对应的上游引物核苷酸序列如SEQ  ID NO.10所示， 下游引物 核苷酸序列如SEQ  ID NO.11所示； 所述AEN基因的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示； 所述DDB2基因的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示； 所述TRIAP1基因的探针的核苷酸 序列如SEQ  ID NO.9所示； 所述TRAF4基因的探针的核苷酸序列如SEQ  ID NO.12所示。 9.根据权利要求7所述的检测系统， 其特征在于， 以β ‑actin作为内参基因， 利用2‑ΔΔCT 方法对样品中各基因的相对拷贝数进行计算。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114369655 A 3