(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210006037.X (22)申请日 2022.01.05 (71)申请人 吉林省农业科 学院 地址 130033 吉林省四平市公主岭市科贸 西大街303号 (72)发明人 王薪淇　孟令聪　卢实　周德龙　 周旭东　董亚琳　岳尧海　王敏　 周小辉　代秀云　侯国生　李穆　 郑淑波　张建新　路明　刘文国　 (74)专利代理 机构 北京慕达星云知识产权代理 事务所 (特殊普通合伙) 11465 代理人 崔自京 (51)Int.Cl. A01H 1/02(2006.01)A01H 1/04(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种快速选育糯质单倍体诱导系的双重诱 导方法 (57)摘要 本发明公开了一种快速选育糯质单倍体诱 导系的双重诱导方法， 属于玉米遗传育种技术领 域。 本发明公开的一种快速选育糯质单倍体诱导 系的双重诱导方法， 包括糯玉米诱导系F2杂交分 离群体组建、 高油型单倍体诱导系诱导、 利用双 PARMS引物扫描DH系基因型、 入选DH系糯性验证 及诱导率测定。 本发明的 “双重诱导 ”方法， 是一 种可在3年完成的诱导系选育方法， 且分子标记 及诱导率鉴定次数减少至1次， 减少大量 劳动力， 提升育种效率。 权利要求书2页 说明书5页 序列表2页 附图3页 CN 114342800 A 2022.04.15 CN 114342800 A 1.一种快速 选育糯质单倍体诱 导系的双重诱 导方法， 其特 征在于， 具体步骤如下： (1)糯玉米诱 导系F2杂交分离群 体组建， 组建步骤如下： ①组配杂交 组合F1： JNX22×CAU5， 完成 “一重诱导”； ②挑选胚与糊粉层均为紫黑色的F1籽粒自交获得F2， 选择糯质且胚与糊粉层均为紫黑 色的F2代籽粒种植 形成F2分离群体， 单株自交； 分穗挑选糯质且 胚与糊粉层均为紫黑色的籽 粒， 组建F2:3糯质家系群 体并种植成穗行； (2)高油型 单倍体诱 导系诱导： 利用CHOI3对F2:3群体进行诱导杂交， 利用单倍体核磁共振自动分拣系统进行单倍体籽 粒识别， 含油量阈值设为3％； 剔除虫蚀霉变粒和发育异常粒， 使用浓度为0.06％(w/v)的秋 水仙素浸泡处理单倍体籽粒并播种， 加倍成功的单倍体植株 自交并繁殖后形成DH群体， 完 成“二重诱导”； (3)利用双PARMS引物扫描DH系基因型， 针对ZmPLA1和ZmDMP两个基因突变型设计双 PARMS引物， 使用酶标仪对PCR产 物在包含2种荧光信号下进行DH系基因型扫描， 筛选具备双 突变的DH个 体； (4)入选DH系糯性验证及诱 导率测定， 验证分为两步： 第一步， 肉眼观察及碘染色法鉴别杂交果穗籽粒是否为糯质， 筛选出糯质诱导系测定 诱导率； 第二步， 以糯质诱导系为父本， 以糯玉米杂交种吉农糯7号为母本进行杂交诱导， 用肉 眼识别杂交当代籽粒中的拟单倍体籽粒， 田间种植并剔除杂合植株， 最终确定单倍体诱导 率。 2.根据权利要求1所述的一种快速选育糯质单倍体诱导系的双重诱导方法， 其特征在 于， 步骤(1) ②分穗挑选糯质的观察指标为： 籽粒晾干后， 相比于 常规玉米的透明角质， 肉 眼 观察为不透明、 蜡质状的玉米粒。 3.根据权利要求1所述的一种快速选育糯质单倍体诱导系的双重诱导方法， 其特征在 于， 步骤(3)所述双PARMS引物序列如下： ZmPLA1基因PARMS引物序列： PLA‑2Fg： 5’ ‑GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGGTCACCGGTTCGTACCTCC ‑3’； SEQ ID NO.1； 5’端 标记FAM； PLA‑2Fc： 5’ ‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGGTCACCGGTTCGTACCTCG ‑3’； SEQ ID NO.2； 5’端 标记HEX； PLA‑2R： 5’ ‑GTCCAGGGTCAACGTGGAGAC‑3’； SEQ ID NO.3； ZmDMP基因PARMS引物序列： DMP‑A： 5’ ‑GAAGGTGACCAAGTTCATGCTACGCTCTCCAAGACGTCCAT ‑3’； SEQ ID NO.4； 5’端标 记FAM； DMP‑B： 5’ ‑GAAGGTCGGAGTCAACGGATTACGCTCTCCAAGACGTCCAC ‑3’； SEQ ID NO.5； 5’端标 记HEX； DMP‑C： 5’ ‑CCGTGGGGAGGAAGTTGG‑3’； SEQ ID NO.6。 4.根据权利要求1所述的一种快速选育糯质单倍体诱导系的双重诱导方法， 其特征在 于， 步骤(4)第二步， 用肉眼识别杂交当代籽粒中的拟单倍体籽粒的观察指标为： 糊粉层黑权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114342800 A 2色、 胚无色。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114342800 A 3