(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210003867.7 (22)申请日 2022.01.05 (71)申请人 中国农业科 学院作物科 学研究所 地址 100081 北京市海淀区中关村南大街 12号 申请人 黑龙江省农业科 学院作物资源研究 所 (72)发明人 邱丽娟　郭勇　杨静　刘广阳　 王秀君　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 苏士莹 (51)Int.Cl. C12N 15/29(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12Q 1/686(2018.01) (54)发明名称 一种大豆抗蚜虫基因及其分子标记和应用 (57)摘要 本发明提供了一种大豆抗蚜虫基因及其分 子标记和应用， 涉及分子标记辅助育种技术领 域。 本发明所述大豆抗蚜虫基因位于大豆基因组 第13号染色体 上物理位置30,700,000～30,900, 000之间， 并基于所述大豆抗蚜虫基因设计了分 子标记和对应的分子标记检测方法。 利用这些分 子标记进行辅助选择， 极大地提高了筛选效率， 从而缩短培育抗蚜品种的育种年限。 权利要求书1页 说明书9页 序列表2页 附图2页 CN 114438094 A 2022.05.06 CN 114438094 A 1.一种大豆抗蚜虫基因， 其特征在于， 所述抗蚜虫基因位于大豆基因组第13号染色体 上物理位置 30,700,000～30,900,000之间。 2.一种与权利要求1所述抗蚜虫基因紧密连锁的分子标记， 其特征在于， 所述分子标记 包括SNPM20、 SNPM80、 M1 147和M1151中的一个或多个的组合； 所述SNPM20位于大豆第13号染色体30,702,907位， 抗蚜大豆的碱基为T， 感蚜大豆的碱 基为G； 所述SNPM80位于大豆第13号染色体30,855,712位， 抗蚜大豆的碱基为T， 感蚜大豆的碱 基为G； 所述M1147在抗蚜大豆的扩增片段为2 28bp， 在感蚜大豆的扩增片段为21 1bp； 所述M1151在抗蚜大豆的扩增片段为286bp， 在感蚜大豆的扩增片段为239bp。 3.一种鉴定权利要求2所述分子标记的引物对， 其特征在于， 针对所述SNPM20设计的引 物对包括SNPM20 ‑F和SNPM20 ‑R， 所述SNPM20 ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述 SNPM20‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示； 针对所述SNPM80设计的引物对包括SNPM80 ‑F和SNPM80 ‑R， 所述SNPM80 ‑F的核苷酸序列 如SEQ ID NO.3所示， 所述SNPM80 ‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示； 针对所述M1147设计的引物对包括M1147 ‑F和M1147 ‑R， 所述M1147 ‑F的核苷酸序列如 SEQ ID NO.5所示， 所述M1 147‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示； 针对所述M1151设计的引物对包括M1151 ‑F和M1151 ‑R， 所述M1151 ‑F的核苷酸序列如 SEQ ID NO.7所示， 所述M1 151‑R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.8所示。 4.权利要求1所述抗蚜虫基因或权利要求2所述分子标记或权利要求3所述引物对在大 豆分子标记辅助育种中的应用。 5.一种大豆抗蚜虫分子标记检测方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 以大豆基因组DNA 为模板， 与权利要求 4所述引物对混合配制PCR反应 体系， 进行PCR扩增。 6.根据权利 要求5所述分子标记检测方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的程序包括： 95℃ 预变性3mi n； 95℃变性25s， 58℃退火25s， 72℃延伸10s， 34个 循环； 72℃延伸5mi n。 7.根据权利要求5或6所述分子标记检测方法， 其特征在于， 所述PCR反应体系以20μL 计， 包括： 模板1μL， 上下游引物各2 μL， 2хM5  HiPerplus  Taq HiFi PCR Mix10 μL和余量的 ddH2O。 8.一种筛选抗蚜虫大豆的方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 以大豆基因组DNA为模板， 与权利要求3所述引物对混合配制PCR反应 体系， 进行PCR扩增； 对PCR产物进行检测， 具有以下任一特性的品种(品系)为 抗蚜虫大豆： (1)分子标记SNPM20在大豆第13号染色体3 0,702,907位扩增出T； (2)分子标记SNPM80在大豆第13号染色体3 0,855,712位扩增出T； (3)分子标记M1 147扩增出2 28bp的DNA片段； (4)分子标记M1 151扩增出286bp的DNA片段。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114438094 A 2一种大豆抗蚜虫基因及其分子标记和应用 技术领域 [0001]本发明属于分子标记辅助育种技术领域， 具体涉及一种大豆抗蚜虫基因及其分子 标记和应用。 背景技术 [0002]大豆蚜虫(Aphisglycines  Matsμmura)是大豆的主要害虫之一， 广泛地分布在我 国的各个大豆主产区， 通过吸食大豆韧皮部光合作用产物， 传播植物病毒来影响大豆的产 量和品质。 大豆蚜虫常常聚集在植株的嫩茎和嫩叶处， 使得植株被害处叶绿素消失， 叶片卷 曲， 受害严重的植株， 茎叶卷缩、 发黄、 植株矮小， 分枝和结荚减少， 从而影响大豆产量。 苗期 蚜虫发生严重时， 整株可能死亡， 蚜虫大发生时若不及时采取防治措施， 会导致减产20～ 40％， 严重时减产可达50％以上。 目前大豆蚜虫的防治依赖于使用杀虫剂， 不仅增加生产成 本， 还会杀死蚜虫的天敌、 危害环境， 利用寄主植物抗 性是防治蚜虫的有效方法。 [0003]国内外研究人员已经筛选到了一些抗蚜虫的大豆资源， 先后发现了Dowling、 Jackson、 PI  71506、 PI  567543C、 PI  567597C等抗源(HILL等2004； MENSAH等2005； MIAN等 2008； BHUSAL等2013)。 国内筛选鉴定到地方品种青皮平顶、 嘟鲁豆和野生大豆85 ‑32等， 这 些资源由于农艺性状较差很难直接应用于育种中。 传统的育种手段受到周期长， 效率低等 条件的限制， 而分子标记辅助育种技术利用分子标记与决定目标性状基因紧密连锁的特 点， 通过检测分子标记， 即可检测到目的基因的存在， 可以显著提高育种效率。 但是目前国 内对于大豆抗蚜虫 的研究相对较少， 缺 乏优异的抗性资源及可用于育种的分子标记， 已发 掘的抗性资源无法得到 很好的利用。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种大豆抗蚜虫基因及其分子标记和应用， 开 发并充分利用与所述抗蚜基因紧密连锁的分子标记， 用于筛选优异的抗蚜品系， 培育抗蚜 大豆品种。 [0005]为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技 术方案： [0006]本发明提供了一种大豆抗蚜虫基因， 所述抗蚜虫基因位于大豆基因组第13号染色 体上物理位置 30,700,000～30,900,000之间。 [0007]本发明还提供了一种与上述抗蚜虫基 因紧密连锁的分子标记， 所述分子标记包括 SNPM20、 SNPM80、 M1 147和M1151中的一个或多个的组合； [0008]所述SNPM20位于大豆第13号染色体30,702,907位， 抗蚜大豆的碱基为T， 感蚜大豆 的碱基为G； [0009]所述SNPM80位于大豆第13号染色体30,855,712位， 抗蚜大豆的碱基为T， 感蚜大豆 的碱基为G； [0010]所述M1147在抗蚜大豆的扩增片段为2 28bp， 在感蚜大豆的扩增片段为21 1bp； [0011]所述M1151在抗蚜大豆的扩增片段为286bp， 在感蚜大豆的扩增片段为239bp。说　明　书 1/9 页 3 CN 114438094 A 3