(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210004780.1 (22)申请日 2022.01.05 (71)申请人 华北理工大 学 地址 063509 河北省唐山市曹妃甸新城渤 海大道21号 (72)发明人 李世峰　蔡文臣　刘舒鹏　徐洪　 高学敏　李耕旭　范宇杭　陈思　 (74)专利代理 机构 北京东方盛凡知识产权代理 事务所(普通 合伙) 11562 代理人 程小芳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种尘肺病人早期筛查的mRNA检测引物组 和探针、 试剂盒及应用 (57)摘要 本发明公开了一种尘肺病人早期筛查的 mRNA检测引物组和探针、 试剂盒及应用， 属于医 药医学技术领域。 本发明提供一种尘肺病人早期 筛查的mRNA的检测引物组和探针， 包括下列中的 一种或多种： (1)检测KIF3A 基因的mRNA表 达水平 的引物组和探针； (2)检测IFT88基因的mRNA表 达 水平的引物组和探针； (3)检测ARL13B基因的 mRNA表达水平的引物组和探针。 本发明可以证明 初级纤毛KIF3A、 IFT88和ARL13B的mRNA任意一种 或多种组合可作为尘肺病检测标志物， 且具有客 观性、 特异性和准确性的特点， 同时本发明提供 的检测试剂盒对于尘肺病的早期筛查具有重大 意义， 具有极大的经济和社会价 值。 权利要求书1页 说明书6页 序列表2页 附图3页 CN 114350801 A 2022.04.15 CN 114350801 A 1.一种尘肺病人早期筛查的mRNA的检测引物组和探针， 其特征在于， 包括下列中的一 种或多种： (1)检测KIF3A基 因的mRNA表达水平的引物组和探针： 上游引物序列为SEQ  ID NO： 1， 下 游引物序列为SEQ  ID NO： 2， 探针序列为SEQ  ID NO： 7； (2)检测IFT88基 因的mRNA表达水平的引物组和探针： 上游引物序列为SEQ  ID NO： 3， 下 游引物序列为SEQ  ID NO： 4， 探针序列为SEQ  ID NO： 8； (3)检测ARL13B基因的mRNA表达水平的引物组和探针： 上游引物序列为SEQ  ID NO： 5， 下游引物序列为SEQ  ID NO： 6， 探针序列为SEQ  ID NO： 9。 2.根据权利要求1所述的检测引物 组和探针， 其特征在于， 所述探针的5 ’端和3’端分别 携带荧光基团FAM和淬灭基团NFQ ‑MGB。 3.一种用于尘肺病人早期筛查的mRNA的检测试剂盒， 其特征在于， 所述检测试剂盒包 括权利要求1或2所述的检测引物组和探针。 4.一种权利要求1或2所述的检测引物组和探针在制备筛查 早期尘肺病产品中的应用。 5.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于， 所述产品通过测定样本中KIF3A和/或 IFT88和/或ARL13B基因的mRNA 表达水平以筛查 早期尘肺病。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述产品包括通过荧光定量PCR来检测 KIF3A和/或IFT8 8和/或ARL13B基因的mRNA 表达水平以筛查 早期尘肺病的产品。 7.根据权利要求6所述的应用， 其特 征在于， 所述产品包括以下使用方法： 步骤1： 提取待测患者血清样本中的RNA， 并以正常人 血清样本为对照； 步骤2： 以提取的RNA为模板， 合成cDNA,利用所述的检测引物组和探针进行荧光定量 PCR， 分别检测待测患者和正常人血清样本中KIF3A和/或IFT88和/或ARL13B基因的cDNA含 量， 并将所 得结果进行比对； 步骤3： 根据比对结果判断待测患者是否为 早期尘肺病患者。 8.根据权利 要求7所述的应用， 其特征在于， 所述荧光定量PCR扩增条件为： 95℃预变性 30s， 95℃变性10s， 58℃退火3 0s， 72℃延伸3 0s， 进行45个 循环。 9.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 所述荧光定量PCR扩增体系包括： Premix   Ex Taq(2×)10μL、 上游引物0.4μL、 下游引物0.4μL、 探针0.4μL、 cDNA模板2μL、 ROX   Reference  Dye II(50×)0.4 μL、 d dH2O6.4 μL。 10.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， 若待测患者血清样本中KIF3A和/或IFT88 和/或ARL13B基因的表达水平高于对照， 则判断为 早期尘肺病患者。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114350801 A 2一种尘肺病人早期筛查的mRNA检测引物组和探针、 试剂盒及 应用 技术领域 [0001]本发明涉及医药医学技术领域， 特别是涉及一种尘肺病人早期筛查的 mRNA检测 引物组和探针、 试剂盒及应用。 背景技术 [0002]尘肺病(矽肺)是最严重的职业病之一， 也是占比最高的纤维化间质性肺疾病。 近 十年每年新 发病例年均 2万例左右， 累计病例数已达90万例。 平均每例患者患病后 将造成的 经济负担为207.5万元， 由于缺乏有效地早期识别、 进展监控和有效的治疗靶点， 尘肺病群 体生命质量下降、 已经成为 严重的公共卫 生问题。 [0003]目前对矽肺的诊断主要依据是生产性粉尘接触史、 排除其他肺部疾病和X射线结 合确定分期， 目前除了肺移植， 没有阻断或者逆转矽肺纤维化进展的治疗方法， 因此， 患者 尽早(0+期和I期)脱离职业环境是延缓病情进展、 提高病人生活质量的重要干预措施。 然 而， 矽肺早期(0+期和I 期)肺组织表现为巨噬细胞炎症反应为主， 伴随形成较小的矽结节， 该阶段结节常不 典型， 且与肺结核、 肺部感染等疾病难以鉴别， 此阶段患者极难确诊。 因此， 亟待寻求新的临床诊断方法。 [0004]目前， 血液由于采样 方便且能较好反映机体病理生理过程而成为疾病标志物的最 好来源， 但是要寻找特异性和准确性高， 能用于矽肺早期 筛查的血液标志物有一定难度。 广 泛的组学测序可以对生理状态或者是一个细胞表型有关的基因进 行系统监控。 测序和芯片 技术以其通量高、 数据输出和获取快捷等优势， 在 疾病机制探索、 疾病诊断标记物的筛选和 治疗靶点的挖掘中发挥了重要的作用。 因此， 本发 明提出一种尘肺病人早期 筛查的 mRNA检 测引物组和探针、 试剂盒及应用， 以解决现有技 术存在的技 术问题。 发明内容 [0005]本发明的目的是提供一种尘肺病人早期筛查的mRNA检测引物组和探针、 试剂盒及 应用， 以解决上述现有技术存在的问题， 本发明可以证明初级纤毛KIF3A、 IFT88和ARL13B的 mRNA任意一种或多种组合可作为尘肺病检测标志物， 且具有客观性、 特异性和准确性的特 点。 [0006]为实现上述目的， 本发明提供了如下 方案： [0007]本发明提供一种尘肺病人早期筛查的mRNA的检测引物组和探针， 包括下列中的一 种或多种： [0008](1)检测KIF3A基因的mRNA表达水平的引物组和探针： 上游引物序列为SEQ ID NO： 1， 下游引物序列为SEQ ID NO： 2， 探针序列为SEQ ID NO： 7； [0009](2)检测IFT88 基因的mRNA表达水平的引物组和探针： 上游引物序列为SEQ ID NO： 3， 下游引物序列为SEQ ID NO： 4， 探针序列为SEQ ID NO： 8； [0010](3)检测ARL13B基因的mRNA表达水平的引物组和探针： 上游引物序列为SEQ ID 说　明　书 1/6 页 3 CN 114350801 A 3