(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210005685.3 (22)申请日 2022.01.05 (71)申请人 兰州大学 地址 730000 甘肃省兰州市城关区天水南 路222号 (72)发明人 刘志鹏　贾程琳　周强　闫龙凤　 包琴燕　王彦荣　 (74)专利代理 机构 北京超凡宏宇专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11463 代理人 张金铭 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种检测紫花苜蓿中蓟属植物的引物对及 其应用和检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种检测紫花苜蓿中蓟属植 物的引物对及其应用和检测方法， 属于生物技术 领域。 该引 物对包括引物MSC1 ‑F和引物MSC1 ‑R； 引物MSC1 ‑F的碱基序列如SEQ  ID NO.1所示， 引 物MSC1‑R的碱基序列如SEQ  ID NO.2所示， 上述 引物对可以特异性扩增出蓟属植物的DNA片段， 通过一次扩增即可检测出紫花苜蓿待测样品中 是否含有蓟属植物， 相应的检测方法简单便捷， 能够进行大批量紫花苜蓿草产品的检测， 检测结 果灵敏性强、 准确率和重复性均较高。 含有上述 引物对的试剂盒同样也可 具有上述效果。 权利要求书1页 说明书8页 序列表1页 附图1页 CN 114231659 A 2022.03.25 CN 114231659 A 1.一种检测紫花苜蓿中蓟属植物的引物对， 其特征在于， 所述引物对包括引物MSC1 ‑F 和引物MSC1 ‑R； 所述引物MSC1 ‑F的碱基序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述引物MSC1 ‑R的碱基序列如SEQ   ID NO.2所示。 2.一种试剂盒， 其特 征在于， 包括权利要求1所述的引物对； 优选地， 所述试剂盒还 包括Mg2+、 dNTP、 DNA聚合酶以及PCR缓冲液。 3.如权利要求1所述的引物对或权利要求2所述的试剂盒在检测紫花苜蓿草产品中是 否含有蓟属植物的用途。 4.一种检测紫花苜蓿草产品中是否含有蓟属植物的方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 对紫花苜蓿草产品的DNA进 行PCR扩增， 并检测扩增产物中是否含有蓟属植物的DNA片段， 若 产物中含有 蓟属植物的DNA片段， 则紫 花苜蓿草产品中包 含蓟属植物； 所述PCR扩增时使用的引物包括权利要求1或2所述的引物对。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述紫花苜蓿草产品为紫花苜蓿草颗粒饲 料。 6.根据权利要求4或5所述的方法， 其特征在于， PCR扩增的体系包括2 ×PCR Master、 DNA模板、 引物MSC1 ‑F 1、 引物MSC1 ‑R和ddH2O； 其中， 所述2 ×PCR Master包括MgCl2、 dNTP、 Taq酶和2 ×PCR缓冲液。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特征在于， 每20 μL  PCR扩增体系中， 含有10 μL所述2 × PCR Master、 1μL浓度为50ng/ μL的所述DNA模板、 1μL浓度为10nM的所述引物MSC1 ‑F、 1μL浓 度为10nM的所述引物MSC1 ‑R1 μL以及7 μL所述d dH2O； 所述2×PCR Master中， 所述MgCl2的浓度为3mmol/L， 所述dNTP的浓度为0.2mmol/L， 所 述Taq酶的浓度为0.1U/ μL。 8.根据权利要求7 所述的方法， 其特 征在于， PCR扩增条件 包括： 步骤a、 94℃预变性4min； 步骤b、 94℃变性30s； 步骤c、 56℃退火30s； 步骤d、 72℃延伸 20s； 步骤b至步骤d循环 25‑40次； 步骤e、 72℃延伸10mi n。 9.根据权利要求8所述的方法， 其特 征在于， 步骤b至步骤d循环3 0‑38次； 优选地， 步骤b至步骤d循环32 ‑36次。 10.根据权利要求 4所述的方法， 其特 征在于， 采用凝胶电泳方法检测所述扩增产物； 优选地， 凝胶电泳是于180 ‑220V的电压下进行90 ‑120min， 所用的凝胶为浓度为6 ‑ 10wt％的聚丙烯酰胺凝胶。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114231659 A 2一种检测紫花苜蓿中蓟属植物的引物对及其应用和检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 具体而言， 涉及一种检测紫花苜蓿中蓟属植物的引 物 对及其应用和检测方法。 背景技术 [0002]紫花苜蓿(Medicago  sativa L.)在80多个国家广泛种植， 种植面积达3500万hm2 以上， 也是我国种植面积最大 的优质牧草之一。 开发苜蓿叶粉， 为饲料工业提供优质、 廉价 蛋白质饲料原料， 对发展饲料工业具有重要意 义。 [0003]菊科(Compositae)蓟属(Cirsium  Adans.)植物在 全世界有250 ‑350种， 广 布于欧、 亚、 北美、 北非大陆。 我国分布有50多种， 广布于全国。 该属植物大多以全草、 地上部分或根 入药， 具有凉血止血、 祛瘀消肿的功效。 临床主要用于治疗咳血、 吐血、 咯血、 尿血以及外伤 出血等症， 具有重要的药用价值。 蓟属植物的应用历史悠久， 民间用该属植物的汁液来治疗 外伤出血、 吐血、 尿血等疾病的习惯 一直沿用至今。 近年来， 对蓟属植物的研究不断深入， 不 但从该属植物中分离得到了黄酮 类、 挥发油类、 有机酸类等类型的化合物， 而且通过大量的 药理学实验证明了该属植物具有保肝、 止血、 抗炎等多种药理作用。 [0004]虽然蓟属植物具有很好的药用价值， 但 浑身长满利刺的蓟属植物对于牛羊的口腔 和胃来说， 赛过吞刀。 如果将蓟属植物打碎后添加进紫花苜蓿草产品中， 会使草产品的品质 下降， 且会伤害到牛羊的口腔和胃， 进而使消费者的权益受到伤害。 目前， 已有公告明确将 丝路蓟(Cirsium  arvense L.)(又称田蓟)列为 “检疫性有 害生物”。 [0005]紫花苜蓿打成草粉用来制作草产品时， 无法通过肉眼分辨其中是否含有蓟属植 物， 利用常规化学分析法检测苜蓿草产品质量会耗费大量人力、 物力和财力， 目前还未有能 够准确快速地检测紫 花苜蓿草颗粒中是否含有 蓟属植物的方法。 [0006]鉴于此， 特提出本发明。 发明内容 [0007]本发明的目的之一在于提供一种检测紫花苜蓿中蓟属植物的引物对， 其可实现准 确快速地检测紫 花苜蓿待测样品中是否含有 蓟属植物。 [0008]本发明的目的之二在于提供一种上述引物对的应用。 [0009]本发明的目的之三在于提供一种含有上述引物对的试剂盒。 [0010]本发明的目的之四在于提供一种上述试剂盒的应用。 [0011]本发明的目的之五在于提供一种利用上述引物对检测紫花苜蓿草产品中是否含 有蓟属植物的方法。 [0012]本申请可这样实现： [0013]第一方面， 本申请提供一种检测紫花苜蓿中蓟属植物的引 物对， 该引 物对包括引 物MSC1‑F和引物MSC1 ‑R； [0014]引物MSC1 ‑F的碱基序列如SEQ  ID NO.1所示， 引物MSC1 ‑R的碱基序列如SEQ  ID 说　明　书 1/8 页 3 CN 114231659 A 3