(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210013779.5 (22)申请日 2022.01.06 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114350837 A (43)申请公布日 2022.04.15 (73)专利权人 西南大学 地址 400700 重庆市北碚区天生路2号 (72)发明人 李强　傅佳　杨雯　陈善春　 何永睿　樊捷　黄馨　 (74)专利代理 机构 成都行之智 信知识产权代理 有限公司 5125 6 专利代理师 李林 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (56)对比文件 CN 110295183 A,2019.10.01 CN 108796 049 A,2018.1 1.13 CN 1021619 96 A,201 1.08.24 秦秀娟等.柑橘Rboh家族鉴定及其对激素和 柑橘溃疡病的响应. 《中国农业科 学》 .2020,(第 20期), 审查员 封丽娜 (54)发明名称 用于检测柑橘APX基因家族的引物对、 试剂 盒及方法和应用 (57)摘要 本发明公开了用于检测柑橘APX基因家族的 引物对、 试剂盒及方法和应用， 用于检测柑橘APX 基因家族的引物对包括6对引物对， 分别为 CsAPX01～CsAPX05、 CsAPX ‑R， 序列如SEQIDNO： 1 ～SEQIDNO： 12所示， 利用引物对对柑橘APX家族 的荧光定量PCR检测方法， 提取待测样品的总 RNA， 采用试剂盒进行荧光定量PCR检测； 本发明 提供的6对引物能够通过荧光定量PCR方法快速、 特异、 准确检测出柑橘APX家族的表达特性， 检测 灵敏度高， 检测结果准确、 可靠， 以鉴定抗坏血酸 过氧化物酶APX基因家族在胁迫中对柑橘耐性机 制的作用。 权利要求书1页 说明书8页 序列表3页 附图5页 CN 114350837 B 2022.09.20 CN 114350837 B 1.引物对在柑橘 受溃疡病原菌侵害时产生防御机制APX表达量检测中的应用， 其特征 在于， 引物对由6对引物对组成， 序列如SEQ  ID NO:1~SEQ ID NO:12所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114350837 B 2用于检测柑橘APX基因家族的引物对、 试剂盒及方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及 基因检测技术领域， 具体涉及用于检测柑橘APX基因家族的引物对、 试 剂盒及方法和应用。 背景技术 [0002]生物或非生物胁迫会使植物产生过多的活性氧(Reactiveoxygenspecies， ROS)， 造成细胞膜和细胞器的不同程度损伤(Mittleret  al.， 2011； Mittleret  al.， 2004)。 植物 在细胞器中形成的多种同工酶或非酶的抗氧化防御系统， 保证了细胞中的活性氧能够维持 在正常水平。 这个体系包括： 清除超氧自由基的超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase， SOD)和清除过氧化氢的过氧化物酶(Peroxidase， POD)等。 过氧化物酶如谷胱甘肽过氧化物 酶(Glutathionep eroxidase， GPX)、 抗坏血酸过氧化物酶(Ascorbatep eroxidase， APX)、 三 型过氧化物酶(ClassIIIperoxidase， CIIIp rx)和过氧化氢酶(Catalase， CAT)等， 是广泛存 在于动物、 植物和微生物中的活性物质， 其功能主要是催化 过氧化氢(H2O2)和其他过氧化物 的清除。 其中， APX与H2O2的亲和力最强， 是非常重要的一种过氧化物酶(苗雨晨等， 2005)。 植 物APX基因家族由4个亚家族组成， 分别是细胞质、 叶绿体、 线 粒体和过氧化物酶体基因亚家 族(Shigeruet al.， 2002； Apelet  al.， 2004)。 在拟南芥(Arabidopsisthaliana)中已经鉴 定出8个AtAPX基因家族成员， 它们编码 3个细胞质型APX， 3个过氧化物酶体型APX和2个叶绿 体型APX(Panchu ket al.， 2002； Narendraet  al.， 2006)。 APX基因编码的蛋白功能随其亚细 胞定位的不同而产生差异， 位于线粒体中的APX主要参与清除脂肪酸的β氧化产生的H2O2 (Andréiaet al.， 2014)， 细胞质型OsAPX2基因在维护H2O2稳态中起重要作用(Wuet  al.， 2018)， 过 氧化物酶体型O sAPX4的沉默会导 致水稻的早衰(Guanet  al.， 2010)。 [0003]APX基因在不同植物的生长发育和对外界环境胁迫的响应中起着非常重要的作 用。 与野生型(生态型Col ‑0)相比， 拟南芥的AtAPX1突变体生长缓慢， 对氧化应激敏感 (Pnuelinet  al.， 2010)。 在拟南芥AtAPX6突变体中， ROS含量增加， 萌发频率降低(Chenet   al.， 2014)。 水稻(OryzaSAtiva)OsAPX2突变体具有半矮化苗、 黄绿色叶片和不育种子 (Zhanget  al.， 2013)。 烟草(Nicotiana  tabacum)中过氧化物酶体抗坏血酸过氧化物酶 (SbAPX)的表达增强了对干旱胁迫的耐受性(Singhet  al.， 2014)。 不同胁迫下APX基因在番 茄、 高粱、 大豆、 黄瓜、 紫花苜蓿、 毛果杨和陆地棉等不同植物中的鉴定和表达分析也有报 道， 大量研究报道了APX在干旱、 热、 盐、 氧化和生物胁迫中对植物耐性调控的作用。 [0004]另有相关激素和病菌诱导的研究报道， 在棉花胚珠离体培养中， 缺铁诱导抗坏血 酸升高可能是通过抑制APX来减缓脱落酸(Abscisic  acid， ABA)下降的反馈调节途径 (Guoet al.， 2017)。 镉胁迫下水稻根和地上部OsAPX的活性降低， 而茉莉酸(Jasmonic   acid， JA)的加入使水稻植株OsAPX的活性恢 复并保持稳定(Singhet  al.， 2014)。 甘蔗接种 黑穗病菌48h内， 抗病品种(崖城05 ‑179)APX活性显著高于感病品种(柳城03 ‑182)(王竹青 等， 2015)。 Schenk等以拟南芥为材料研究发现， 水杨酸(Salicylic  acid， SA)和乙烯 (Ethylene， ET)的信号途径参与了茉莉酸甲酯(Methyl  jasmonate， MeJA)对脂肪氧化酶说　明　书 1/8 页 3 CN 114350837 B 3