(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210013778.0 (22)申请日 2022.01.06 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114277180 A (43)申请公布日 2022.04.05 (73)专利权人 西南大学 地址 400700 重庆市北碚区天生路2号 (72)发明人 李强　杨雯　傅佳　陈善春　 何永睿　黄馨　樊捷　 (74)专利代理 机构 成都行之智 信知识产权代理 有限公司 5125 6 专利代理师 李林 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/686(2018.01)C12N 15/11(2006.01) 审查员 谷城橙 (54)发明名称 用于检测柑橘SOD基因家族的引物对、 试剂 盒及方法和应用 (57)摘要 本发明公开了用于检测柑橘SOD基因家族的 引物对、 试剂盒及方法和应用， 用于检测柑橘SOD 基因家族的引物对包括13对引物对， 分别为 CSSOD1‑CSSOD13， 序列如SEQ  ID NO:1～SEQ  ID  NO:26所示， 利用引物对对柑橘超氧化物歧化酶 基因家族的荧光定量PCR检测方法， 提取待测样 品的总RNA， 采用前述的试剂盒进行荧光定量PCR 检测； 本发明提供的13对引物能够通过荧光定量 PCR方法快速、 特异、 准确检测出柑橘超 氧化物歧 化酶基因家族的表达特性， 检测灵敏度高， 检测 结果准确、 可靠， 为柑橘抗逆研究打下基础。 权利要求书1页 说明书6页 序列表5页 附图9页 CN 114277180 B 2022.08.30 CN 114277180 B 1.引物对在柑橘 受溃疡病原菌侵害时产生防御机制SOD表达量检测中的应用， 其特征 在于， 引物对由13对引物对组成， 序列如SEQ  ID NO:1~SEQ ID NO:26所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114277180 B 2用于检测柑橘SOD 基因家族的引物对、 试剂盒及方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及 基因检测技术领域， 具体涉及用于检测柑橘SOD基因家族的引物对、 试 剂盒及方法和应用。 背景技术 [0002]超氧化物歧化酶(Superoxide  dismutase， SOD)是一种金属抗氧化物酶， 它是植物 免疫系统的第一道防线， 通 过催化超氧阴离子分解为 过氧化氢(Hydrogenperoxide， H2O2)和 O2来维持植物活性氧(Reactive  oxygen species， ROS)动态平衡。 根据金属辅助因子的不 同， 植物SOD酶可分为三类： 铜锌超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD)、 铁超 氧化物歧化 酶(FeSOD)和 锰超氧化物歧化酶(MnSOD)。 Cu/ZnSOD主要存在于细胞溶胶、 叶绿体、 过氧化物酶体和细胞 外液中； 而FeSODs主要存在于叶绿体中， 也可能存在于细胞溶胶中； MnSODs存在于线粒体 中； 在植物中还没有发现镍超氧化物歧化酶N iSOD。 [0003]植物应对胁迫时会引发次级氧化胁迫， 产生氧化应激反应， 造成体内大量ROS积 累。 在细胞及分子水平上， ROS会破坏生物膜， 引起膜脂过氧化， 改变蛋白质核酸的空间结 构； 个体水平上， 植物体内生理平衡被打破， 难以维持正常生长发育。 SOD作为清除ROS的活 性酶发挥重要作用， 并且协同其他抗氧化酶缓解ROS给植物带来的伤害。 在植物遭受高温、 低温、 水分、 盐碱、 重金属、 臭氧、 紫外线和营养素缺乏等逆境胁迫时， 可以通过施加外源物 质在一定程度上调节抗氧化 酶活性， 增强植物体抗逆性。 在面临病原菌侵害时， 病原菌侵染 宿主， 释放体内毒素， 破坏植物细胞结构。 寄主抵御毒素过程中， 产生了大量的超出正常水 平的ROS， 这打破了植物体内ROS产生和消除之间的动态平衡， 所以SOD水平的变化在植物 ‑ 病原体相互作用中也发挥着重要作用。 [0004]超氧化物歧化酶基因家族已经在拟南芥、 尖叶芭蕉、 高粱和三果杨等许多植物中 展开研究， SOD 基因在植物的生长发育过程中发挥着不同的作用， 已有研究证实它们 与逆境 胁迫反应有关， 在拟南芥中， MnSOD在一系列氧化胁迫处理后表达没有变化， 但在豌豆中对 盐胁迫和小麦中对低 温和干旱胁迫有积极的响应， 表明SOD基因对氧化应激的调控是复杂 的。 有研究通过过表达或敲除的植物SOD 基因以证实它们在提高抗逆性方面的作用： 在转基 因水稻植株中， 豌豆中的MnSOD参与叶绿体的ROS清除系统， 提高了水稻的耐旱性； 拟南芥的 FeSOD基因可以改善转基因株系对体外氧化应激耐受性； 脱落酸(Abscisic  acid， ABA)处理 的AtSOD转基因植株中， 干 燥反应转录因子的表达强烈上调， 该信号通路通 过消除·O2‑增强 耐寒性。 综上 所述， SOD基因家族广泛参与植物对非生物和生物胁迫的响应。 [0005]来自逆境胁迫的阻碍对柑橘产业的发展产生非常大的影响， 如 柑橘溃疡病和黄龙 病等生物逆境和 低温、 干旱等非生物逆境。 在柑橘中对于SOD基因家族的研究比较少， 因此， 检测柑橘体内SOD含量有利于研究柑橘在 逆境状态下的氧化应激反应的功能， 探索SOD基因 在提高柑橘对各种环境胁迫的耐受性上 的机制， 很有必要。 研究植物体受病原菌侵染后生 理生化的变化， 对于揭示植物抗病机制有着重要的作用。 同时， ABA、 水杨酸(Salicylic   acid， SA)、 茉莉酸(Jasmonic  acid， JA)等激素是植物的生长发育， 生物和非生物胁迫响应说　明　书 1/6 页 3 CN 114277180 B 3