(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210013453.2 (22)申请日 2022.01.06 (71)申请人 云南省烟草质量 监督检测站 地址 650106 云南省昆明市高新 开发区科 医路41号 申请人 云南省烟草农业科 学研究院 (72)发明人 童治军　张轲　肖炳光　方敦煌　 张晓伟　孙浩巍　陈丹　龙杰　 张冀武　蔡浩云　王春琼　彭丽娟　 顾健龙　刘忠华　 (74)专利代理 机构 北京酷爱智慧知识产权代理 有限公司 1 1514 专利代理师 刘志刚 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01)C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种鉴别白肋烟类型的共显性InDel标记及 其应用 (57)摘要 本发明公开了一种鉴别白肋烟类型的共显 性InDel标记及其应用， 所述共显性InDel标记的 核苷酸序列如SEQ  ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2所示； 本发明共显性InDel标记能够实现白肋烟类型的 精准鉴别， 具有稳定、 可靠、 简便、 快捷和低成本 的特点， 并能够用于鉴别待检测烟草中是否存在 白肋烟。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图1页 CN 114480703 A 2022.05.13 CN 114480703 A 1.一种鉴别白肋烟类型的共显性InDel标记， 其特征在于， 所述共显性InDel标记的核 苷酸序列如SEQ  ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2所示。 2.用于获得权利要求1所述共显性InDel标记的引物对， 其特征在于， 所述引物对包括 上游引物和下游引物； 所述上游引物序列如SEQ  ID NO： 3所示； 所述下游引物序列如SEQ  ID NO： 4所示。 3.权利要求1所述的共显性 InDel标记在鉴别白肋烟类型中的应用。 4.权利要求2所述的引物对在鉴别白肋烟类型中的应用。 5.一种白肋烟类型的鉴别方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 利用SEQ ID NO： 3和SEQ  ID NO： 4所示的引物对对待测 烟草基因组DNA进行PCR扩增， 然 后， 检测PCR扩增产物片段 大小； 如果PCR扩增产物中仅含有长度 为169bp的片段， 则 待测烟草的类型为白肋烟； 如果PCR 扩增产物中仅含有长度为181bp的片段， 则待测烟草类型为非白肋烟类型； 如果PCR扩增产 物中同时含有长度为169b p和181bp的片段， 则待测烟草为白肋 烟类型与其他烟草类型的杂 合体。 6.根据权利要求5所述的鉴别方法， 其特征在于， 所述PCR扩增产物通过凝胶电泳检测 片段大小。 7.一种用于鉴别白肋烟类型的试剂盒， 其特 征在于， 包括权利要求2所述的引物对。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114480703 A 2一种鉴别白肋烟类型的共显性InDel标记及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及白肋烟类型鉴别技术领域， 具体涉及一种鉴别白肋烟类型的共显性 InDel标记及其应用。 背景技术 [0002]烟草是叶用型经济作物， 按照烟叶品质特点、 生物学性状和栽培调制方法分类， 可 分为烤烟、 白肋烟、 雪茄烟、 香料烟、 黄花烟和野生烟等6个 类型。 [0003]白肋烟是1864年在美国俄亥俄州布朗郡的马里兰阔叶型烟苗床里发现的缺绿型 突变株， 后经系统选育种植， 证明其具有特殊使用价值， 从而发展成为烟草的一个新类型。 作为烟草6大类型之一的白肋烟， 其主要特点是叶片主脉呈乳白色， 苗期叶片黄绿色， 叶绿 素含量约为其他正常绿色烟草叶片的三分之一。 故此， 烟草叶片主脉呈乳白色是白肋烟类 型区别于其他5个烟草类型的典型特征。 在烟草的苗期甚至是其全部生育期内， 均可依据烟 草叶片主 脉的颜色(叶片主脉颜色是否为乳白色)来鉴别 烟草中的白肋烟类型， 但在工业生 产应用中， 卷烟行业利用的烟草叶片是成熟后并经烘烤(或晾晒)、 存储、 发酵、 切丝、 卷制等 一系列繁琐工艺流程后的制烟原料， 故此， 针对制烟原料中白肋烟类型 的鉴别就无法依据 乳白色主叶脉进 行。 鉴于此， 本发明提供了一种在分子水平上， 简易、 快速、 稳定的鉴别 烟草 中白肋烟类型的标记及方法。 发明内容 [0004]本发明的目的在于提供一种鉴别白肋烟类型的共显性InDel标记及其应用， 该共 显性InDel标记能够实现在分子水平上 快速、 稳定的鉴别烟草中的白肋烟类型。 [0005]为了实现本发明的上述目的， 特采用以下技 术方案： [0006]本发明第一方面提供一种鉴别白肋烟类型的共显性InDel标记， 所述共显性InDel 标记的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2所示。 [0007]本发明第二方面通过一种用于获得上述共显性InDel标记的引物对， 所述引物对 包括上游引物和下游引物； [0008]所述上游引物序列如SEQ  ID NO： 3所示； 所述下游引物序列如SEQ  ID NO： 4所示。 [0009]本发明第三方面 提供一种上述共显性 InDel标记在鉴别白肋烟类型中的应用。 [0010]本发明第四方面 提供一种上述引物对在鉴别白肋烟类型中的应用。 [0011]本发明第五方面 提供一种白肋烟类型的鉴别方法， 所述 鉴别方法包括如下步骤： [0012]利用SEQ ID NO： 3和SEQ  ID NO： 4所示的引物对对待测烟草基因组DNA进行PCR扩 增， 然后， 检测PCR扩增产物片段 大小； [0013]如果PCR扩增产物中仅含有长度为169bp的片段， 则待测烟草 的类型为白肋烟； 如 果PCR扩增产 物中仅含有长度为181bp的片段， 则待测烟草类型为 非白肋烟类型； 如果P CR扩 增产物中同时含有长度为 169bp和181bp的片段， 则待测烟草为白肋 烟类型与其他烟草类型 的杂合体。说　明　书 1/6 页 3 CN 114480703 A 3