(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210017358.X (22)申请日 2022.01.07 (71)申请人 宁波市第一医院 地址 315010 浙江省宁波市柳汀街59号 (72)发明人 黄毅　孙杰　高翔　 (74)专利代理 机构 宁波奥圣专利代理有限公司 33226 代理人 何仲 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于检测与脑动脉瘤相关的GSTA4基因甲基 化程度的试剂盒及其应用 (57)摘要 本发明公开了用于检测与脑动脉瘤相关的 GSTA4基因甲基化程度的试剂盒及其应用， 特点 是该试剂盒内包括一对 GSTA4基因DNA甲基化特 异性扩增引物及一个 GSTA4基因DNA甲基化特异 性测序引物： 其中特异性扩增上游引物具有如 SEQ ID NO.1所示， 特异性扩增下游引物具有如 SEQ ID NO.2所示， 甲基化特异性测序引物如SEQ   ID NO.3所示； GSTA4基因DNA被检测序列所在区 域为基因前端特定位置并通过焦磷酸测序技术 进行DNA甲基化水平分析； GSTA4基因DNA甲基化 水平与脑动脉瘤的患病率呈负相关； 优点是该诊 断试剂盒可以方便快捷地在分子水平上实现对 脑动脉瘤的检测， 检测效率高， 针对性强。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图3页 CN 114369659 A 2022.04.19 CN 114369659 A 1.一种用于检测与脑动脉瘤相关的 GSTA4基因甲基化程度的试剂盒， 其特征在于包括 一对GSTA4基因甲基化特异性扩增引物及一个 GSTA4基因甲基化特异性测序引物， 其中所述 的GSTA4基因甲基化特异性扩增上游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示： 5' ‑ AGGGAAAAAAAAGAAGAGAGAAAGG‑3’； 所述的GSTA4基因甲基化特异性扩增 下游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示： 5 ’ ‑ Biotin‑TTTAACACTATC CAAAATACCTTACAAA‑3’； 所述的GSTA4基因甲基化特异性测序引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示： 5 ’ ‑ GGAGATAGAT TTGGAGTTTA‑3’。 2.根据权利要求1所述的用于检测与脑动脉瘤相关的 GSTA4基因甲基化程度的试剂盒， 其特征在于： 所述的 GSTA4基因DNA被检测序列所在区域为基因前端区域Chr6:  52,995, 261‑52,995,336内。 3.根据权利要求2所述的用于检测与脑动脉瘤相关的 GSTA4基因甲基化程度的试剂盒， 其特征在于： 所述的C hr6: 52,995,261‑52,995,336区域内9个CpG位 点的具体位置为: 。 4.根据权利要求3所述的用于检测与脑动脉瘤相关的 GSTA4基因甲基化程度的试剂盒， 其特征在于： 所述的 GSTA4基因DNA被检测序列采用 焦磷酸测序技术对 GSTA4基因内的9个 CpG位点进行DNA甲基化水平分析。 5.一种用于检测与脑动脉瘤相关的 GSTA4基因启动子区甲基化程度的试剂盒在制备检 测脑动脉瘤试剂或者辅助诊断脑动脉瘤试剂中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114369659 A 2用于检测与脑动脉瘤相关的 GSTA4基因甲基化程度的试剂盒 及其应用 技术领域 [0001]本发明属于脑动脉瘤的辅助诊断技术领域， 具体涉及一种用于检测与脑动脉瘤相 关的GSTA4基因甲基化 程度的试剂盒及其应用。 背景技术 [0002]脑动脉瘤( Intracranial aneurysms ， IA)是脑内动脉壁的结构发育不良， 或因脑 外伤、 动脉硬化造成动脉壁损伤或老化， 使局部血管壁向外膨大形成的囊状瘤体。 脑动脉瘤 极易在偶发的紧张、 用力、 疲劳等血压升高时突然发生破裂， 所引起的脑蛛网膜下腔出血及 其导致的严重并发症对人生命和健康的威胁很大， 死亡率和伤残率 都很高。 因此， 脑动脉瘤 被称为脑的 “定时炸弹 ”。 脑动脉瘤病因尚不甚清楚， 但以先天性动脉瘤占大部 分。 任何年龄 可发病， 40 ‑66岁常见。 [0003]流行病学调查显示， IA在普通人群中的发生率为1.0% ‑2.0%， 在中国35～75岁成年 人中为7.0%。 脑动脉瘤的发病机制在很大程度上仍然不十 分清楚。 目前， 最普遍的观念都认 为脑动脉瘤的发生、 形成是一个复杂的多基因、 多生物因子共同作用的过程， 遗传和 后天不 良生活因素 （包括生活方式和其他社会心理因素等） 共同参与这个过程。 因此， 越来越多的 研究者们都逐渐倾向于脑动脉瘤的基因和生物因子方面的研究。 近年来的研究证明， 血管 相关基因DNA甲基化 程度的变化在脑动脉瘤的发生发展中扮演着重要角色。 [0004]谷胱甘肽S ‑转移酶α 4 （Glutathione  S‑transferase  alpha 4， GSTA4） 基因位于6 号染色体， 其编码的蛋白属于α类谷胱甘肽S ‑转移酶， 具有谷胱甘肽过氧化物酶的活性， 可 将脂质过氧化物转化为谷胱甘肽结合物， 在机体解毒和细胞保护方面有着重要的作用。 GSTA4是一种细胞溶质蛋白， 广泛分布于人体各个组织中， 主要在肝、 肾、 小肠和胃肠道等器 官中有较高表达。 GSTA4被称为抗氧化蛋白酶， 能够通过清除活性氧积累导致的脂质过氧 化， 丙二醛以及4 ‑羟基壬烯醛等副产 物， 进而在帕金森， 阿尔兹海默症等神经功能退行性疾 病中发挥脑保护作用。 大鼠大脑皮层中GSTA4含量随着年龄的递增呈现出， GSTA4甚至在老 年大脑皮层中增加， 并且与脑部氧化应激和神经毒性的发生密切相关。 在血管细胞中， GSTA4高表达能够提升保护内皮细胞和平滑肌细胞对抗内皮功能障碍和血管氧化应激的作 用。 小鼠动物模 型研究结果显示GSTA4的表达量与血管损伤相关。 由此可知， GSTA4可能在脑 动脉瘤的发生发展过程中可能扮演着重要的角色。 脑动脉瘤的传统诊断都是基于影像学手 段进行检查， 而病人往往都是出现相关症状才到医院就诊。 脑动脉瘤 破裂前没有任何征兆， 其死亡率极高， 大概1/3的脑动脉瘤患者都是发病后送往医院救治的过程中死亡。 目前， 国 内外没有公开任何关于 GSTA4基因DNA甲基化与脑动脉瘤相关的研究报道。 发明内容 [0005]本发明所要解决的技术问题是提供一种检测方便、 针对性强、 检测准确率高的用 于检测与脑动脉瘤相关的 GSTA4基因甲基化程度的试剂盒及其应用， 其中 GSTA4基因DNA甲说　明　书 1/5 页 3 CN 114369659 A 3