(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210019266.5 (22)申请日 2022.01.07 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114672580 A (43)申请公布日 2022.06.28 (73)专利权人 中国农业科 学院蔬菜花 卉研究所 地址 100081 北京市海淀区中关村南大街 12号 (72)发明人 苗晗　顾兴芳　张圣平　彭月　 董邵云　 (74)专利代理 机构 北京百欧知识产权代理事务 所(普通合伙) 11930 专利代理师 邹晓艳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01)(56)对比文件 CN 110241245 A,2019.09.17 Eukaryota等.PREDICTED : Cucumis sativus histo ne deacetylase 19 (LOC101214717), mRNA. 《NCBI GenBan k 登录 号: XM_011658595.2》 .2019, Renata Somn icka等.Genetic map ping of psl locus and quantitative trait l oci for angular leaf spot resistance i n cucumber (Cucumis sativ us L.). 《Mo lecular Breeding》 .2018,第38卷(第9期),1-9. 刘春艳等.黄 瓜霜霉病 、 角斑病及褐斑病的 识别与防治. 《天津农业科 学》 .2010,第16卷(第 01期),48- 50. 审查员 王瑶 (54)发明名称 用于检测黄瓜抗细菌性角斑病性状的SNP分 子标记及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测黄瓜抗细菌性 角斑病性状的SNP分子 标记及其应用， 所述SNP标 记位于黄瓜第6号染色体上物理位置7,969, 469‑‑7,969,682bp处， 其中第7969575位的碱基 为G或A， 该位点碱基为G的黄瓜表现为抗细菌性 角斑病， 碱基为A的黄瓜表现为感细菌性角斑病。 采用本发明获得的SNP标记， 可以在黄瓜候选材 料的苗期判断出材料是否抗细菌性角斑病， 从而 进行对植株抗性材料的筛选， 提高了选育抗细菌 性角斑病黄瓜育种材料的效率， 缩短了育种周 期， 为开展黄瓜细菌性角斑病的分子标记辅助育 种奠定了一定的基础。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 CN 114672580 B 2022.12.06 CN 114672580 B 1.用于检测黄瓜抗细菌性角斑病性状的SNP分子标记在 如下(1)‑(4)任一中的应用： (1)鉴定或辅助鉴定 黄瓜细菌性角斑病抗 性材料； (2)筛选或者辅助筛 选抗细菌性角斑病的黄瓜品种； (3)培育或者辅助培 育抗细菌性角斑病的黄瓜品种； (4)黄瓜育种； 所述SNP分子标记位于黄瓜第6号染色体上物理位置7,969,469 ‑‑7,969,682bp处， 其中 第7969575位的碱基为G或A； 所述SNP分子标记的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示,其第107 位碱基是G的黄瓜材料为细菌性角斑病抗性候选材料， 第107位碱基是A的黄瓜为细菌性角 斑病易感候选材 料。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述应用包括以下步骤： 提取待测样品的 基因组DNA作为模板， 采用所述的SNP分子标记的扩增引物进行PCR扩增， 对PCR扩增产物进 行测序判断。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特 征在于： 所述SNP分子标记的扩增引物如下： PSL‑SNP1‑F： 5’ ‑CTGGGAGTTCAGTATCAG GAGGTC‑3’， PSL‑SNP1‑R： 5’ ‑GGGATGGAGGTTGATGATA AAA‑3’； PCR扩增获得214bp片段， 其第107个碱基为G的黄瓜材料为细菌性角斑病抗性候选材 料， 为A的黄瓜材 料为细菌性角斑病易感候选材 料。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于： PCR扩增的反应体系为： 总反应体系20μL， 浓度5.0ng ·μL‑1的基因组DNA  2 μL， 浓度50ngμL‑1的引物PSL ‑SNP1‑F/PSL‑SNP1‑R各1 μL， 10 μL 2×Phanta Max Master Mix， 6 μL双蒸水。 5.根据权利要求4所述的应用， 其特征在于： PCR扩增的程序为： 95℃预变性3分钟； 95℃ 变性15秒， 5 5℃退火15秒， 72℃延伸3 0秒， 35个循环； 72℃保温5分钟。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114672580 B 2用于检测黄瓜抗细菌性角斑病性状的SNP分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物技术领域， 具体涉及一种用于检测黄瓜抗细菌性角斑病性状的 SNP分子标记及其应用。 背景技术 [0002]黄瓜是人们生活中常见的具有丰富营养价值的一种蔬菜， 近年来随着人们对黄瓜 的需求量日益增加， 黄瓜的栽培面积越来越 大。 早在20世纪50年代， 我国就有黄瓜细菌性角 斑病(Cucumber  bacterial  angular leaf spot)发生的报道(方仲达和俞大绂， 1956)， 该 病害主要发生在东北、 华中和华北等地区， 病害发生严重时， 病株率可达到100％， 使黄瓜减 产大半， 甚至绝收。 细菌性角斑病在黄瓜的苗期和成株期均可发病， 叶片初期会 出现黄色圆 形小斑点， 后 期圆形斑点由于受叶脉限制而发展成为多角形褐色斑点， 最 终导致叶片穿孔、 干枯、 植株死 亡(陈明和赵永 波， 2010； 李 宝聚和李焕玲， 2012； 刘燕 妮等， 2018)。 [0003]黄瓜细菌性角斑病抗性是多基因控制的数量遗传性状(Chand&Walker， 1964)， 目 前仅有少数研究定位了黄瓜细菌性角斑病抗病相关的基因/QTL位点。 等人 (2018)使用SNP标记构建包含7个连锁群， 717个位点的遗传图谱， 图长599.7cM， 平均距离为 0.84cM， 最终在5号染色体上检测到p sl5.1和p sl5.2这2个主 效QTL位点。 Zh ang等(2019)利 用重组自交系群体发现细菌性角斑病 抗性由单隐性位点psl ‑1控制， 并将psl ‑1定位到1号 染色体的3,118,855～ 3,951,558bp区间。 Wang等(2 019)发现Gy14 ×WI2757群体中dm1、 cla、 psl是同一位点， 黄瓜对3种病害的抗性可能是由同一个基因CsSGR(Pan  et al.， 2018)控制 的， 但其分子机制尚未研究清楚。 吴志明等(2019)基于黄瓜细菌性角斑病抗性基因CsPSL的 SNP位点开发了1个KAS P标记。 [0004]上述研究对于开展黄瓜细菌性角斑病的分子标记辅助育种奠定了一定的基础， 然 而依然缺乏与细菌性角斑病抗 性基因紧密连锁的分子标记， 且很少应用于 黄瓜育种。 发明内容 [0005]本发明基于对上述领域的研究， 提供一种与黄瓜细菌性角斑病相关的SNP分子标 记， 所述SNP分子标记位于黄瓜第6号染色体上物理位置7,969,469 ‑‑7,969,682bp处， 其中 第7969575位的碱基为G或A， 该位点碱基为G 的黄瓜材料为细菌性角斑病 抗性候选材料， 碱 基为A的黄瓜为细菌性角斑病易感候选材 料。 [0006]所述SNP分子标记的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示,其中第107位碱基是G或A。 [0007]本发明还提供一种用于检测上述 的SNP分子标记的特异性引物对， 包括引物PSL ‑ SNP1‑F、 PSL‑SNP1‑R， 所述引物的序列为： [0008]PSL‑SNP1‑F： 5’ ‑CTGGGAGTTCAGTATCAG GAGGTC‑3’， [0009]PSL‑SNP1‑R： 5’ ‑GGGATGGAGGTTGATGATA AAA‑3’。 [0010]本发明还提供一种用于检测上述的SNP分子标记的试剂盒， 包含上述的特异性引 物对。说　明　书 1/5 页 3 CN 114672580 B 3