(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210015141.5 (22)申请日 2022.01.07 (71)申请人 新疆畜牧科 学院畜牧 研究所 地址 830000 新疆维吾尔自治区乌鲁 木齐 市经济技 术开发区阿里山 街468号 申请人 鄂尔多斯市农牧业科 学研究院 （内 蒙古农牧科 学院鄂尔多斯分院） (72)发明人 吴翠玲　付雪峰　斯登丹巴 　谷英　 石刚　薛多雄　德德玛　 (74)专利代理 机构 乌鲁木齐合纵专利商标事务 所 65105 代理人 汤洁　谭南 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 影响鄂尔多斯细毛羊羊毛纤维直径变异系 数性状的分子标记、 获得方法及其特异性引物对 和应用 (57)摘要 本发明涉及动物分子标记 技术领域， 是一种 影响鄂尔多斯细毛羊羊毛纤维直径变异系数性 状的分子标记、 获得方法以及其特异性引物对和 应用， 该分子标记包括 分子标记Indel1和分子标 记SNP1， 分子标记Indel1为LMNB1基因P1片段的 第2内含子上缺失的四个碱基TATT， 分子标记 SNP1为LMNB1基因P1片段的第3外显子上的变化 碱基C或T。 本发明通过首次对鄂尔多斯细毛羊 LMNB1基因与羊毛性状相关性研究， 对影响鄂尔 多斯细毛羊羊毛纤维直径变异系数性状相关的 分子标记定位， 获得基因突变位点， 发现含有 ATCT和TTTT的基因型在超细型群体选育中具有 优势， 为鄂尔多斯细毛羊高产、 超细型群体的选 育提供方法和指导。 权利要求书2页 说明书7页 序列表2页 附图2页 CN 114231643 A 2022.03.25 CN 114231643 A 1.一种影响鄂尔多斯细毛羊羊毛 纤维直径变异系数性状的分子标记， 其特征在于包括 分子标记Indel1和分子标记SNP1， 分子标记Indel1位于绵羊5号染色体24654403bp ‑ 24654406bp处的LMNB1基因P1片段的第2内含子上， 分子标记SNP1位于绵羊5号染色体 24654282bp处的LMNB1基因P1片段的第3外显子上， 分子标记Indel1为绵羊5号染色体 24654403bp ‑24654406bp处 的LMNB1基因P 1片段的第2内含子上缺失的四个碱基AATA， 分子 标记SNP1为绵羊5号染色体24654282bp处的LMNB1基因P1片段的第3外显子上的变化碱基G 或A,等位基因突变C或T。 2.根据权利要求1所述的影响鄂尔多斯细毛羊羊毛纤维直径变异系数性状的分子标 记， 其特征在于按照下述方法获得： 第一步， 取待测的鄂尔多斯细毛羊母羊的血液基因组 DNA； 第二步， 以血液基因组DNA为模板进行PCR扩增， PCR反应体系： PCRMixture10 μL， 浓度为 10mol/L的上下游引物各0.5 μL， 上游引物序列为5 ’ ‑GCAGTTGAA CCCACACTTCTG‑3’， 下游引物 序列为5’ ‑TTGCCTACAGAATCCTTCCC ‑3’， DNA模板1.0 μL， 加蒸馏水至20 μL， 将建立好的PCR体 系放入PCR仪中反应， 反应条件： 95℃预变性3min， 95℃变性30s， 60℃退火30s， 72℃延伸 1min， 34个循环， 72℃延伸5min， 4℃ 保存， 得到PCR产物； 第三步， 对PCR产物进行双向测序， 根据双向测序筛选到突变位点， 设计特异性引物对， 利用Snapshot检测技术进行突变基因 分型， 得到对于鄂尔多斯细毛羊羊毛纤维直径变异系数性状显著相关的分子标记 Indel1和 分子标记SNP1。 3.根据权利要求1或2所述的影响鄂尔多斯细毛羊羊毛纤维直径变异系数性状的分子 标记， 其特征在于分子标记Indel1基因型和分子标记SNP1基因型存在连锁， 当分子标记 Indel1基因型为AA基因型时， 分子标记SNP1基因型为CC基因型， 当分子标记In del1基因型 为TT基因型时， 分子标记SNP1基因型为T T基因型。 4.一种影响鄂尔多斯细毛羊羊毛 纤维直径变异系数性状的分子标记的获得方法， 其特 征在于按照下述方法进行： 第一步， 取待测的鄂尔多斯细毛羊母羊的血液基因组DNA； 第二 步， 以血液基因组DNA为模板进行PCR扩增， PCR反应体系： PCRMixture10 μL， 浓度为10mol/L 的上下游引物各0.5 μL， 上游引物序列为5 ’ ‑GCAGTTGAACCCACACTTCTG ‑3’， 下游引物序列为 5’ ‑TTGCCTACAGAATCCTTCCC ‑3’， DNA模板1.0 μL， 加蒸馏水至20 μL， 将建立好的PCR体系放入 PCR仪中反应， 反应条件： 9 5℃预变性3min， 9 5℃变性30s， 60℃退火30s， 72℃延伸1min， 34个 循环， 72℃延伸5min， 4℃保存， 得到PCR产物； 第三步， 对PCR产物进行双向测序， 根据双向测 序筛选到突变位点， 设计特异性引物对， 利用Snapshot检测技术进 行突变基因分型， 得到对 于鄂尔多斯细毛羊羊毛纤维直径变异系数性状显著相关的分子标记Indel1和分子标记 SNP1。 5.根据权利要求4所述的影响鄂尔多斯细毛羊羊毛 纤维直径变异系数性状的分子标记 的获得方法， 其特征在于特异性引物对包括分子标记Indel1的特异性引物对和分子标记 SNP1的特异性引物对， 分子标记 Indel1的特异性引物对和分子标记SNP1的特异性引物对均 包括上游引物、 下游引物和延伸引物， 其中， 分子标记Indel1的特异性引物对： 上游引物为 5’ ‑GACTCTCATACATTGA CAAATACA‑3’、 下游引物为5 ’ ‑ACTCCAAGTCCTCAGTAAG ‑3’、 延伸引物为 5’ ‑CTGACTGACTGACTGACTGACTTGATTCAATCCATCGGTATC ‑3’， 分子标记SNP1的特异性引物对： 上游引物为5 ’ ‑GACTCTCATACATTGACAAATA CA‑3’、 下游引物为5 ’ ‑ACTCCAAGTCCTCAGTAAG ‑3’、 延伸引物为5 ’ ‑CTGACTGACTGACTGACTGACTAGATGA AACTTTACTTAAAGTGGA‑3’。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114231643 A 26.一种影响鄂尔多斯细毛羊羊毛纤维直径变异系数性状的分子标记的获得方法中的 特异性引物对， 其特征在于包括分子标记 Indel1的特异性引物对和分子标记SNP1的特异性 引物对， 分子标记Indel1的特异性引物对和分子标记SNP1的特异性引物对均包括上游引 物、 下游引物和延伸引物， 其中， 分子标记Indel1的特异性引物对： 上游引物为5 ’ ‑ GACTCTCATACATTGA CAAATACA‑3’、 下游引物为5 ’ ‑ACTCCAAGTCCTCAGTAAG ‑3’、 延伸引物为5 ’ ‑ CTGACTGACTGACTGACTGACTTGATTCAATCCATCGGTATC ‑3’， 分子标记SNP1的特异性引物对： 上游 引物为5’ ‑GACTCTCATA CATTGACAAATACA‑3’、 下游引物为5 ’ ‑ACTCCAAGTCCTCAGTAAG ‑3’、 延伸 引物为5’ ‑CTGACTGACTGACTGACTGACTAGATGA AACTTTACTTAAAGTGGA‑3’。 7.一种权利要求6所述的特异性引物对在制备体外检测影响鄂尔多斯细毛羊羊毛 纤维 直径变异系数性状的分子标记的试剂或试剂盒中的应用。 8.一种权利要求1或2或3所述的影响鄂尔多斯细毛羊羊毛 纤维直径变异系数性状的分 子标记在鄂 尔多斯细毛羊高产、 超细型群 体的选育中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114231643 A 3