(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210016055.6 (22)申请日 2022.01.07 (71)申请人 中国农业科 学院农业质量标准与检 测技术研究所 地址 100000 北京市海淀区中关村南大街 12号 (72)发明人 陈爱亮　赵睿明　张娟　王楠　 (74)专利代理 机构 北京超凡宏宇专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11463 代理人 张金铭 (51)Int.Cl. C12Q 1/6806(2018.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6888(2018.01)C12Q 1/689(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/63(2006.01) (54)发明名称 一种集成DNA提取和LAMP可视化核酸检测的 方法 (57)摘要 本发明公开了一种集成DNA提取和LAMP可视 化核酸检测的方法， 涉及分子生物学技术和微流 控芯片技术领域。 其包括： DNA提取和LA MP扩增检 测。 该核酸检测方法可以同步快速地进行核酸的 提取和核酸检测。 具有核酸提取方便， 成本低， 不 依赖复杂仪器 设备的技术优势。 本发 明提供的集 成DNA提取和LA MP可视化核酸检测的方法方便了 实验室之外的现场实施快速 检测。 权利要求书1页 说明书8页 附图3页 CN 114150042 A 2022.03.08 CN 114150042 A 1.一种集成DNA提取和LAMP可视化核酸检测的方法， 其特征在于， 所述方法为非疾病的 诊断用途， 其包括： DNA提取和LAMP扩增检测； 所述DNA提取包括： 采用DNA提取装置对待测样本进行DNA提取， 然后将携 带有待测样本 的DNA提取装置转移至微 流控芯片主体上的液体通路； 所述LAMP扩增检测包括： 控制微流控芯片使得反应缓冲液储液单元中的反应缓冲液流 出至液体通路中， 使得DNA提取装置上的待测样本随反应缓冲液进入反应单元进行LAMP反 应。 2.根据权利要求1所述的集成DNA提取和LAMP可视化核酸检测的方法， 其特征在于， 所 述DNA提取是将金属针状物刺穿于待测样本上， 然后将金属针状物转移至微流控芯片主体 上的液体通路。 3.根据权利要求2所述的集成DNA提取和LAMP可视化核酸检测的方法， 其特征在于， 所 述LAMP扩增 检测包括： 按压反应缓冲液储液单元上的指压膜， 使得反应缓冲液流出至液体 通路中， 在反应缓冲液的洗脱作用下， 待测样 本随反应缓冲液进入反应单元， 待测样本与反 应单元上固定的扩增引物进行LAMP反应。 4.根据权利要求3所述的集成DNA提取和LAMP可视化核酸检测的方法， 其特征在于， 按 压指压膜后， 通过 甩动微流控芯片使得混合反应液从微 通道结构进入反应池中。 5.根据权利要求3所述的集成DNA提取和LAMP可视化核酸检测的方法， 其特征在于， 所 述LAMP反应时， 将所述微流控芯片的反应池所在的一端插入微流控芯片反应发生装置， 并 按下Strat按钮启动反应程序。 6.根据权利要求5所述的集成DNA提取和LAMP可视化核酸检测的方法， 其特征在于， 所 述方法还包括结果的判定， 所述结果的判定是根据反应池中反应液的颜色判定待测样本的 阴阳性。 7.根据权利要求6所述的集成DNA提取和LAMP可视化核酸检测的方法， 其特征在于， 所 述若反应池中反应液 的颜色为黄色， 则判断待测样本为阳性， 若反应池中反应液 的颜色为 红色， 则判断待测样本为阴性。 8.根据权利要求5所述的集成DNA提取和LAMP可视化核酸检测的方法， 其特征在于， 将 所述微流控芯片插入微流控芯片反应发生装置后， 在反应单元的反应温度下， 石蜡贮藏室 的石蜡融化， 经流体通道进入所述反应单元以形成石蜡层； 所述反应单元的反应温度为60 ‑ 65℃。 9.根据权利要求1所述的集成DNA提取和LAMP可视化核酸检测的方法， 其特征在于， 所 述待测样本 选自植物病原微 生物、 动物病原微 生物、 非人动物组织。 10.根据权利 要求1所述的集成DNA提取和LAMP可视化核酸检测的方法， 其特征在于， 所 述方法还 包括拉动废液池的拉杆， 将液体通路中多余的反应液抽入废液池中。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114150042 A 2一种集成DNA 提取和LAMP可视化核酸检测的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物学技术和微流控芯片技术领域， 具体而言， 涉及一种集成D NA 提取和LAMP可视化核酸检测的方法。 背景技术 [0002]目前， 主流技术还是基于PCR方法进行分子检测， 而PCR技术又难以在现场进行快 速检测， 限制了PCR方法在POCT 领域的发展， 进而影 响新技术的发展。 另外， 在 疫情等因素刺 激下， 分子诊断、 核酸检测技术日新月异。 如果分子检测能走出实验室， 那将极大程度上促 进分子诊断的应用落地， 可以应用于门急诊的随到随检。 而分子诊断的下一个突破方向之 一， 是开发具有一定高通 量的分子检测试剂和核酸 提取技术。 [0003]微流控芯片技术是一种通过微通道、 反应室和其他功能部件， 对流体进行精准操 控， 对生物、 化学、 医学分析过程的样品制备、 反应、 分离、 检测等基本操作单元进行集成分 析的技术。 该技术具有液体流动可控、 集成化、 消耗低、 通量高、 分析快等优点， 已经被广泛 应用于生物医学和环境科 学等研究领域。 [0004]钨针是一种结构细长由纯钨或者钨合金制得的钨制品。 钨针通常可用于氩弧焊技 术中的电极材料， 也可用做仪器探针使用。 钨针有耐高温， 导电性好等优点。 微创钨针可作 为工具用于某些临床手术中， 在临床上具有切割速度快、 热损伤范围小等优势。 现有技术 中， 未见有利用钨针或其他金属针进行生物组织样品核酸提取方面的相关报道， 也未见有 利用钨针提取技 术结合微流控芯片进行DNA提取， 扩增结合。 [0005]鉴于此， 特提出本发明。 发明内容 [0006]本发明的目的在 于提供一种集成D NA提取和LAMP可视化核酸检测的方法以同步实 现核酸提取和LAMP可视化快速检测。 [0007]本发明是这样实现的： [0008]本发明提供了一种集成DNA提取和LAMP可视化核酸检测的方法， 方法为非疾病的 诊断用途， 其包括： DNA提取和LAMP扩增检测； [0009]DNA提取包括： 采用D NA提取装置对待测样本进行D NA提取， 然后将携带有待测样本 的DNA提取装置转移至微 流控芯片主体上的液体通路； [0010]LAMP扩增检测包括： 控制微流控芯片使得反应缓冲液储液单元中的反应缓冲液流 出至液体通路中， 使得DNA提取装置上的待测样本随反应缓冲液进入反应单元进行LAMP反 应。 [0011]本发明提供的微流控芯片通过反应单元进行LAMP反应， 使用时， 反应缓冲液从反 应缓冲液储液单元流出， 经液体通路流入反应单元， 当将携带样 本的DNA提取装置置于液体 通路中后， 在反应缓冲液的洗脱作用下， 待测样本随反应缓冲液进入反应单元进行LAMP扩 增反应。说　明　书 1/8 页 3 CN 114150042 A 3