(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210015107.8 (22)申请日 2022.01.07 (71)申请人 新疆畜牧科 学院畜牧 研究所 地址 830000 新疆维吾尔自治区乌鲁 木齐 市经济技 术开发区阿里山 街468号 申请人 鄂尔多斯市农牧业科 学研究院 （内 蒙古农牧科 学院鄂尔多斯分院） (72)发明人 付雪峰　吴翠玲　谷英　斯登丹巴 　 石刚　薛多雄　德德玛　 (74)专利代理 机构 乌鲁木齐合纵专利商标事务 所 65105 代理人 汤洁　谭南 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6809(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 与鄂尔多斯细毛羊羊毛纤维直径性状相关 的分子标记及特异性引物对和应用 (57)摘要 本发明涉及动物分子标记 技术领域， 是一种 与鄂尔多斯细毛羊羊毛纤维直径性状相关的分 子标记及特异性引物对和应用， 包括分子标记 SNP5， 分子标记SNP5位于绵羊1号染色体 98337781处的TXNIP基因3 ’UTR区上， 分子标记 SNP5为TXNIP基因3 ’突变碱基G或A。 本发明首次 发现TXNIP基因3 ’UTR的SNP5突变位点与羊毛纤 维直径极显著相关， 随着C等位基因拷贝数的增 加， 纤维直径减小， 与鄂尔多斯细毛羊羊毛纤维 直径性状相关的分子标记为鄂尔多斯细毛羊高 产、 超细型群 体的选育提供方法和指导。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图2页 CN 114231642 A 2022.03.25 CN 114231642 A 1.一种与鄂尔多斯细毛羊羊毛 纤维直径性状相关的分子标记， 其特征在于包括分子标 记SNP5， 分子标记SNP5位于绵羊1号染色体98337781处的TXNIP基因3 ’UTR区上， 分子标记 SNP5为TXN IP基因3’UTR区突变碱基G或A,等 位基因突变C或T。 2.根据权利要求1所述的与鄂尔多斯细毛羊羊毛纤维直径性状相关的分子标记， 其特 征在于按照下述方法获得： 第一步， 取待测的鄂尔多斯细毛羊母羊的血液基因组DNA； 第二 步， 以血液基因组DNA为模板进行PCR扩增， PCR反应体系： PCRMixture10 μL， 浓度为10mol/L 的上下游引物各0.5 μL， 上游引物序列为5 ’ ‑TTGCCAGACTGGATTGTTGTG ‑3’， 下游引物序列为 5’ ‑GAACACAGTGCAA CAAGCTCT ‑3’， DNA模板1.0 μL， 加蒸馏水至2 0 μL， 将建立好的PCR体系放入 PCR仪中反应， 反应条件： 9 5℃预变性3min， 9 5℃变性30s， 60℃退火30s， 72℃延伸1min， 34个 循环， 72℃延伸5min， 4℃保存， 得到PCR产物； 第三步， 对PCR产物进行双向测序， 根据双向测 序筛选到突变位点， 设计特异性引物对， 利用Snapshot检测技术进 行突变基因分型， 得到对 于鄂尔多斯细毛羊 羊毛纤维直径性状显著相关的分子标记SNP5 。 3.一种与鄂尔多斯细毛羊羊毛 纤维直径性状相关的分子标记的获得方法， 其特征在于 按照下述方法进 行： 第一步， 取待测的鄂尔多斯细 毛羊母羊的血液基因组DNA； 第二步， 以血 液基因组DNA为模板进行PCR扩增， PCR反应体系： PCRMixture 10 μL， 浓度为10mol/L的上下游 引物各0.5μL， 上游引物序列为5 ’ ‑TTGCCAGACTGGATTGTTGTG ‑3’， 下游引物序列为5 ’ ‑ GAACACAGTGCAA CAAGCTCT ‑3’， DNA模板1.0 μL， 加蒸馏水至2 0 μL， 将建立好的PCR体系放入PCR 仪中反应， 反应条件： 95℃预变性3min， 95℃变性30s， 60℃退火30s， 72℃延伸1min， 34个循 环， 72℃延伸5min， 4℃保存， 得到PCR产物； 第三步， 对PCR产物进行双向测序， 根据双向测序 筛选到突变位点， 设计特异 性引物对， 利用Snapshot检测技术进行突变基因分型， 得到对于 鄂尔多斯细毛羊 羊毛纤维直径性状显著相关的分子标记SNP5 。 4.据权利要求3所述的与鄂尔多斯细毛羊羊毛 纤维直径性状相关的分子标记的获得方 法， 其特征在于特异性引物对包括分子标记SNP5的上游引物、 分子标记SNP5的下游引物和 分子标记SNP5的延伸引物， 分子标记SNP5的上游引物为5 ’ ‑CGAGATGATGTGATACAGAG ‑3’、 分 子标记SNP5的下游引物为5 ’ ‑CCATTCCAGGATGCCATT ‑3’、 分子标记SNP5的延伸引物为5 ’ ‑ ACTCAAAACTACTGA AAATGCCTC‑3’。 5.一种与鄂尔多斯细毛羊羊毛纤维直径性状相关的分子标记的获得方法中的特异性 引物对， 其特征在于包括分子标记SNP5的上游引物、 分子标记SNP5的下游引物和分子标记 SNP5的延伸引物， 分子标记SNP5的上游引物为5 ’ ‑CGAGATGATGTGATACAGAG ‑3’、 分子标记 SNP5的下游引物为5 ’ ‑CCATTCCAGGATGCCATT ‑3’、 分子标记SNP5的延伸引物为5 ’ ‑ ACTCAAAACTACTGA AAATGCCTC‑3’。 6.一种根据权利要求5所述的特异性引物对在制备体外检测与鄂尔多斯细毛羊羊毛 纤 维直径性状相关的分子标记的试剂或试剂盒中的应用。 7.一种权利要求1或2所述的与鄂尔多斯细毛羊羊毛纤维直径性状相关的分子标记在 鄂尔多斯细毛羊高产、 超细型群 体的选育中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114231642 A 2与鄂尔多斯细毛羊 羊毛纤维直径性状相关的分子标记及特异 性引物对和应用 技术领域 [0001]本发明涉及动物分子标记技术领域， 是一种与鄂尔多斯细毛羊羊毛纤维直径性状 相关的分子标记及特异性引物对和应用。 背景技术 [0002]鄂尔多斯细毛羊羊毛综合品质优良， 被毛闭合性良好， 密度大， 细度以66支至70支 为主。 群体羊毛性状遗传稳定。 羊毛纤维直径、 纤维长度、 产毛量决定了羊毛纤维的品质， 是 绒毛羊产业重要的经济性状和数量性状， 受微效多基因控制， 利用传统的育种 方法很难再 提高羊毛品质及生产性能。 目前对绵、 山羊绒毛性状相关基因多态性的研究均主要集中在 角蛋白家族基因和角蛋白关联蛋白家族基因中， 未见TXNIP基因多态性显著影响羊毛性状 的报道。 [0003]目前对TXNIP的研究， 主要集中在人类肥胖、 糖尿病、 高血压和神经疾病等， 在绵羊 上的研究较少。 发明内容 [0004]本发明提供了一种与鄂尔多斯细毛羊羊毛纤维直径性状相关的分子标记及特异 性引物对和应用， 克服了上述现有技术之不 足， 首次对鄂尔多斯细 毛羊TXNIP基因中突变位 点遗传多态性分析， 通过与鄂尔多斯细毛羊羊毛纤维直径性状相关的分子标记， 实现了鄂 尔多斯细毛羊超细型群 体的选育。 [0005]本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的： 一种与鄂尔多斯细毛羊羊毛纤 维直径性状相关的分子标记， 包括分子标记SNP5， 分子标记SNP5位于绵羊1号染色体 98337781处 的TXNIP基因3 ’UTR区上， 分子标记SNP5为TXNIP基因3 ’UTR区突变碱基G或A,等 位基因突变C或T。 [0006]下面是对上述发明技 术方案之一的进一 步优化或/和改进： [0007]上述按照下述方法获得： 第一步， 取待测的鄂尔多斯细毛羊母羊的血液基因组 DNA； 第二步， 以血液基因组DNA为模板进行PCR扩增， PCR反应体系： PCRMixture10 μL， 浓度为 10mol/L的上下游引物各0.5 μL， 上游引物序列为5 ’ ‑TTGCCAGA CTGGATTGTTGTG ‑3’， 下游引物 序列为5’ ‑GAACACAGTGCAA CAAGCTCT ‑3’， DNA模板1.0 μL， 加蒸馏水至2 0 μL， 将建立好的PCR体 系放入PCR仪中反应， 反应条件： 95℃预变性3min， 95℃变性30s， 60℃退火30s， 72℃延伸 1min， 34个循环， 72℃延伸5min， 4℃ 保存， 得到PCR产物； 第三步， 对PCR产物进行双向测序， 根据双向测序筛选到突变位点， 设计特异性引物对， 利用Snapshot检测技术进行突变基因 分型， 得到对于鄂 尔多斯细毛羊 羊毛纤维直径性状显著相关的分子标记SNP5 。 [0008]本发明的技术方案之二是通过以下措施来实现的： 一种与鄂尔多斯细毛羊羊毛纤 维直径性状相关的分子标记的获得方法， 按照下述方法进行： 第一步， 取待测的鄂尔多斯细 毛羊母羊的血液基因组DNA； 第二步， 以血液基因组DNA为模板进行PCR扩增， PCR反应体系：说　明　书 1/6 页 3 CN 114231642 A 3