(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210024411.9 (22)申请日 2022.01.07 (71)申请人 中南大学湘雅二医院 地址 410011 湖南省长 沙市芙蓉区人民中 路139号 (72)发明人 李吉　张慧芳　丁宗烽　彭宏凌　 张广森　 (74)专利代理 机构 长沙市融智专利事务所(普 通合伙) 43114 代理人 袁靖 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/62(2006.01) (54)发明名称 一种AML相关的融合基因及其应用， 检测引 物、 试剂盒 (57)摘要 本发明涉及AML临床诊断技术领域， 公开了 一种AML相关的融合基因及其应用， 检测引物、 试 剂盒。 本发 明针对高通量测序发现的白血病新融 合基因SART3 ‑RARG， 设计了特异性的PCR引物， 通 过实验证实该引物可用于常规RT ‑PCR特异性检 测， 亦可用于实时荧光定量qPCR用于诊断以及定 量监测， 本发明扩大了原有检测手段的检测范 围,能够应用于临床,可用于SART3 ‑RARG急性髓 系白血病的诊断及疗效监测,为白血病的诊断分 型及分子靶向干预提供依据。 权利要求书1页 说明书4页 序列表4页 附图2页 CN 114350804 A 2022.04.15 CN 114350804 A 1.一种AML相关的融合基因， 其特征在于， 由SART3外显子18及其上游序列和RARG外显 子3及其下游序列， 通过SART3外显子18和RARG外显子3直接融合形成， 其序列见SEQ  ID  NO.1所示。 2.检测权利要求1所述的AML相关的融合基因的试剂在制备AML辅助诊断制剂中的应 用。 3.根据权利要求1所述的应用， 其特 征在于， 辅助鉴别经典APL。 4.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 检测所述的AML相关的融合基因的试剂包 括PCR检测试剂。 5.根据权利 要求4所述的应用， 其特征在于， 所述的PCR检测试剂中上游引物以SA RT3外 显子18为靶基因设计， 下游引物以RARG外 显子3为靶基因设计。 6.根据权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述引物序列如SEQ  ID NO.2和SEQ  ID  NO.3所示。 7.用于扩增权利要求1所述的AML相关的融合基因的引物， 其特征在于， 所述引物序列 如SEQ ID NO.2和SEQ  ID NO.3所示。 8.一种AML诊断试剂盒， 其特 征在于， 包括检测所述融合基因的试剂。 9.根据权利要求1所述的应用， 其特 征在于， 辅助鉴别经典APL。 10.根据权利要求8所述的试剂盒， 其特征在于， 检测所述的AML相关的融合基因 的试剂 包括PCR检测试剂； 进一步地， 所述的PCR检测试剂中上游引物以SART3外显子18为靶基因设 计， 下游引物以RARG外显子3为靶基因设计； 更进一步地， 所述引物序列如SEQ  ID NO.2和 SEQ ID NO.3所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114350804 A 2一种AML相关的融合基因及其应用 ， 检测引物、 试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及AML临床诊断技术领域， 具体的说是涉及一种AML相关的融合基因及其 应用， 检测引物、 试剂盒。 背景技术 [0002]急性髓性白血病(AML)是一类来源于髓系造血干祖细胞的恶性克隆性血液系统疾 病， 急性早幼粒细胞白血病(APL)是AML的一个特殊类型， 约占AML的10％， FAB协作组根据其 细胞形态学特点将其定义为AML ‑M3型， 其分子学特点为涉及17号染色体q21上的维甲酸受 体α(RARA)与位于15号染色体q22上的早幼粒白血病 基因(PML)的断裂重组， 在超过95％的 患者中可检测出PML ‑RARA融合基因， 2016年世界卫生组织(WHO)因此将其定义为APL  with  PML‑RARA。 该型疾病易 合并弥漫性血管内凝血及重要脏器出 血， 早期死 亡率高。 [0003]全反式维甲酸(ATRA)通过靶向PML ‑RARA融合蛋白， 诱导早幼粒白血病细胞分化、 改善凝血功能障碍， 显著降低了此类患者的早期死亡， 维甲酸联合化疗或三氧化二砷已成 为临床上 该类患者的一线 治疗， 经过规范治疗80％以上患者可获长期无病生存。 [0004]维甲酸受体(RAR)属于核受体因子超家族成员， 包括alpha(RARA)、 beta(RARB)、 gamma(RARG)三个亚型， 三个亚型具有高度的序列相似性， 功能上有重复亦有区别。 近期陆 续报道了涉及 RARB或RARG的重排极少数病例， 包括1种累及RARB的融合基因(TBLR1 ‑RARB) 和5种累及RARG的融合基因(NUP98 ‑R ARG,PML‑RARG,CPSF6 ‑RARG， NPM1 ‑RARG， HNRNPC ‑ RARG)。 这些患者都表现出AML ‑M3的形态学和免疫表型特点， 以及出凝血障碍， 但普遍对维 甲酸诱导分化治疗 无效， 凝血功能得不到纠正， 早期死亡率高， 部 分患者对AML化疗有效， 部 分学者认为 这类疾病应归属为AML， 因此， 早期识别并调整 治疗方案非常重要。 [0005]融合基因在恶性血液肿瘤的诊 断、 分型、 微小残留病(MRD)监测及其预后， 均有重 要价值。 累及维甲酸受体的不同亚型， 虽然具有相同的细胞形态学、 免疫表型特点， 但同时 具有一些独特的致病机理， 对维甲酸治疗反应不一， 因此， 对RAR相关融合基因的精确诊断 将有助于及早采取正确有效的干预措施， 实施个 体化治疗。 发明内容 [0006]本发明首要目的是提供一种AML相关的融合基因， 扩展了APL样AML中RAR  G相关融 合基因的类型。 [0007]所述的AML相关的融合基因由SART3外显子18及其上游序列(上游序列是指SART3 基因的外显子1 ‑外显子17的序列)和RARG外显子3及其下游序列(下游序列是RARG基因外显 子4‑外显子10的序列)， 通过SART3外显子18和 RAR G外显子3直接融合形成， 其序列见SEQ   ID NO.1所示。 [0008]SART3基因序列在GeneBank中的登录号为NM_014706.4， RARG基因序列在GeneBank 中的登录号为NM_000966.6； 所述SART3外显子18 核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示， RARG外显 子3核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示， 通过两者直接融合为SART3  exon18‑RARG exon3。 融合说　明　书 1/4 页 3 CN 114350804 A 3