(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210017387.6 (22)申请日 2022.01.08 (71)申请人 北京华诺奥美 基因医学检验实验室 有限公司 地址 100000 北京市大兴区中关村科技园 区大兴生物医药产业基地永旺西路26 号院13号楼1层101室 (72)发明人 于超计　吴文立　王倩玉　肖江山　 魏星　 (74)专利代理 机构 成都顶峰专利事务所(普通 合伙) 51224 代理人 钱学宇 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12Q 1/6804(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种糖苷类抗生素基因检测试剂盒及其检 测方法 (57)摘要 本发明属于生物检测技术领域， 公开了一种 糖苷类抗生素基因检测试剂盒及其检测方法。 由 mtDNA C1494T和mtDNA  A1555G基因检测液、 扩增 反应体系和对照品组成。 能快速、 准确且灵敏检 测出mtDNAC1494T和mtDNA  A1555G基因突变； 填 补临床检测基因空白， 为后续医生的治疗提供及 时的预判， 避免不良医疗事故的发生； 检测时间 周期短， 最快能在90分钟内完成， 极大节约检测 时间， 加快效率。 该试剂盒仅需操作者将扩增反 应液、 检测液和模板进行混合即可进行PCR， 将 PCR产物加入到层析试纸条上， 结果清晰可见， 对 操作人员要求简单， 无需依赖特定仪器的使用， 临床可推广性高。 权利要求书1页 说明书11页 序列表3页 附图2页 CN 114350784 A 2022.04.15 CN 114350784 A 1.一种糖苷类抗 生素基因检测试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒包括检测液； 所述检测液包括mtDNA  C1494T基因检测液和mtDNA  A1555G基因检测液； 所述mtDNA  C1494T基 因检测液包括mtDNA  C1494T基因的引物对， 引物对包括第一引物 和第二引物； 所述mtDNA  A1555G基 因检测液包括mtDNA  A1555G基因的引物对， 引物对包括第三引物 和第四引物； 所述第一引物至第四引物的核苷酸序列依次如  SEQ ID NO.1‑  SEQ ID NO.4 所示。 2.根据权利要求1所述的一种糖苷类抗生素基因检测试剂 盒， 其特征在于， 所述第 一引 物5′端标记FAM； 第二引物5 ′端标记Bi otin。 3.根据权利要求1所述的一种糖苷类抗生素基因检测试剂 盒， 其特征在于， 所述第 三引 物5′端标记FITC； 第四引物5 ′端标记Bi otin。 4.根据权利要求1所述的一种糖苷类抗生素基因检测试剂 盒， 其特征在于， 所述检测液 中第一引物至第四引物的引物浓度均为5 0~400 nM。 5.根据权利要求1所述的一种糖苷类抗生素基因检测试剂 盒， 其特征在于， 所述检测液 中第一引物至第四引物的引物浓度均为20 0 nM。 6.根据权利要求1所述的一种糖苷类抗生素基因检测试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒 还包括扩增反应 体系、 阳性对照品和阴性对照品。 7.根据权利要求6所述的一种糖苷类抗生素基因检测试剂 盒， 其特征在于， 所述扩增反 应体系包括 taq DNA聚合酶、 4种dNTP及各种PCR扩增反应液 所需离子。 8.根据权利要求6所述的一种糖苷类抗生素基因检测试剂 盒， 其特征在于， 所述阳性对 照品为含有mtDNA  C1494T和mtDNA  A1555G突变的质粒。 9.根据权利要求6所述的一种糖苷类抗生素基因检测试剂 盒， 其特征在于， 所述阴性对 照品为纯化水。 10.一种糖苷类抗生素基因非诊断目的的检测方法， 其特征在于， 采用权利要求1 ‑9任 一项所述的试剂盒进行检测。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114350784 A 2一种糖苷类抗生素基因检测试剂盒及其检测方 法 技术领域 [0001]本发明属于生物检测技术领域， 具体涉及 一种糖苷类抗生素基因检测试剂盒及其 检测方法。 背景技术 [0002]氨基糖苷类抗生素是由氨基糖与氨基环醇通过氧桥连接而 成的苷类抗生素。 其对 于细菌的作用主要是抑制细菌蛋白质的合 成， 作用点在细胞30S核糖体亚单位的16SrRNA解 码区的A部位。 但是氨基糖苷类抗菌药物的不良反应有很多， 其中之一就是与药物应用相关 的耳毒性， 表现为耳朵前庭损害， 主要是患者可能会有眩晕呕吐， 眼球震颤和平衡障碍， 再 就是耳蜗神经功能障碍， 表现为耳鸣听力减退甚至耳聋。 [0003]研究发现， 线粒体mtDNA  C1494T和mtDNA  A1555G与糖苷类抗生素致聋密切相关。 但是目前没有专门用于人mtDNA  C1494T和mtDNA  A1555G基因突变快速简便检测试剂盒。 [0004]相关技术公开了， 氨基糖苷类药物性耳聋易感基因检测试剂盒及方法， 该方法虽 然也提出了氨基糖苷类药物性耳聋易感基因检测， 但是该方法采用P CR溶解曲线法， 检测设 备不仅需要依赖专门荧光定量P CR仪器， 还需要仪器额外配置专门溶解曲线分析软件， 目前 该软件在临床 应用并不普及。 如ABI  7500定量PCR仪器 市价约45万， 配套溶解曲线分析软甲 约20万。 该 方法不适用于临床， 尤其是二级和社区医院的大面积推广。 [0005]相关技术公开了， 一种遗传性耳聋基因检测产品， 该方法涉及约20种耳聋相关基 因突变， 但该试剂盒不是专用于氨基糖苷类药物性耳聋易感基因检测。 且该方法采用核酸 质谱进行分析检测， 检测周期长， 检测 仪器约300万， 不适用于氨基糖苷类药物性耳聋易感 基因检测。 [0006]核酸胶体金免疫层析技术是将特异性的抗原或抗体以条带状固定在NC膜上形成 检测线1 （T1线） 、 检测线2 （T2线） 和质控线 （C线） ， 胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附 在结合垫上。 待测样本通过常规的核酸提取后， 采用5 ′端带有特定标记的引物进行PCR扩 增， 之后将扩增产物直接添加到试纸条一端的样本垫上后， 扩增产物通过毛细作用向前移 动， 在结合垫上与胶体金标记试剂相互作用， 当移动至固定的抗原或抗体的区域时， 待检物 与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留， 聚集在检测带上， 形成肉眼可观察 的显色结果。 该法已广泛应用于抗原抗体 检测， 但在核酸检测领域还 鲜有使用。 发明内容 [0007]为了解决现有技术存在的采用PCR溶解曲线法检测流程复杂且不适用临床应用； 遗传性耳聋基因检测产品不具有专一检测效用， 检测周期长及不适用的技术问题， 本发明 目的在于提供一种糖苷类抗 生素基因检测试剂盒及其检测方法。 [0008]本发明所采用的技术方案为： 一种糖苷类抗生素基因检测试剂盒， 所述试剂盒包 括检测液； 所述检测液包括mtDNA  C1494T基因检测液和mtDNA  A1555G基因检测液；说　明　书 1/11 页 3 CN 114350784 A 3