(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210020814.6 (22)申请日 2022.01.10 (30)优先权数据 17/147,549 2021.01.13 US (71)申请人 益福生医股份有限公司 地址 中国台湾台北市 (72)发明人 蔡英杰　吴健诚　许智捷　 (74)专利代理 机构 北京戈程知识产权代理有限 公司 11314 专利代理师 程伟 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/04(2006.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 检测乳酸杆菌的寡核苷酸及其用 于检测乳 酸杆菌的方法 (57)摘要 本公开提供检测乳酸杆菌的寡核苷酸及其 用于检测乳酸杆菌的方法。 具体地， 提供用于鉴 定植物乳酸杆菌特定菌株的组合物和方法， 该特 定菌株例如存放在DSMZ登录号为DSM  28632的植 物乳酸杆菌植物亚种PS128(Lactobacillus   plantarum  subsp.plantarum  PS128)。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图3页 CN 114763578 A 2022.07.19 CN 114763578 A 1.一种检测植物乳酸杆菌植物亚种P S128的方法， 包括： 提供包含核酸模板的样品； 提供一对核酸作为引物； 以所述引物扩增所述 植物乳酸杆菌植物亚种P S128的核酸序列； 以及 检测所述扩增的产物， 其中所述 一对核酸分别包 含SEQ ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2的至少12个连续核苷酸。 2.根据权利要求1所述的方法， 其中所述一对核酸分别包含SEQ  ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2的至少15个连续核苷酸。 3.根据权利要求1所述的方法， 其中所述一对核酸分别包含SEQ  ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2的至少18个连续核苷酸。 4.根据权利要求1所述 的方法， 其中所述一对核酸分别由SEQ  ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2 的核酸序列组成。 5.根据权利要求1所述的方法， 其中所述扩增的产物的大小为大约90 0个碱基对。 6.根据权利要求1所述的方法， 其中所述扩增通过选自 以下项的一种 进行： 聚合酶链反 应、 链置换扩增、 核酸序列 依赖性扩增、 滚环扩增、 T 7聚合酶介导的扩增、 T3聚合 酶介导的扩 增和SP6聚合酶介导的扩增。 7.根据权利要求1所述的方法， 其中所述检测通过凝胶电泳、 质谱或单链DNA检测技术 进行。 8.根据权利要求7 所述的方法， 其中所述单链DNA检测技 术包括荧光共振能量转移。 9.一种反应混合物， 其包括： (i)包含核酸模板的样品； 以及 (ii)一对核酸， 其被 配置为检测植物乳酸杆菌植物亚种P S128基因 组序列的存在与否， 其中所述 一对核酸分别包 含SEQ ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2的至少12个连续核苷酸。 10.根据权利要求9所述的反应混合物， 其进一 步包含聚合酶和三磷酸脱氧核苷。 11.一种寡核苷酸， 其包 含SEQ ID NO： 1或SEQ  ID NO： 2的至少12个连续核苷酸。 12.一种用于鉴定植物乳酸杆菌植物亚种PS128基因组序列的存在的试剂盒， 其包含一 对核酸， 其中， 所述 一对核酸分别包 含SEQ ID NO： 1和SEQ  ID NO： 2的至少12个连续核苷酸。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114763578 A 2检测乳酸杆菌的寡核 苷酸及其用于 检测乳酸杆菌的方 法 技术领域 [0001]本公开涉及用于检测包括乳酸杆菌属物种的核酸、 探针、 试剂盒和方法。 背景技术 [0002]乳酸菌(Lactic  acid bacteria， 以下称为LAB)是能够将碳水化合物底物转化为 有机酸(主要是乳酸)并产生多种代谢物的细菌。 LAB被发现对动物具有许多有益健康的作 用。 例如， 由于LAB具有调节宿 主肠道菌群的能力， 因此可有效帮助肠道 健康， 并且可有效预 防或治疗腹痛、 腹泻、 便 秘和腹胀。 [0003]LAB还可以调节宿主对心理压力的心理和生理反应。 压力是引起人和动物情绪障 碍和神经化学变化的因素之一， 并且可以导致压力引起的疾病， 包括焦虑、 抑郁和肠道易激 综合征(irritable  bowel syndrome)。 因此， 除了传统 的精神科药物之外， LAB可以作为补 充物， 治疗压力引起的疾病， 因为已显示LAB可影响宿主的肠脑轴(gut ‑brain axis， GBA)。 例如， 鼠李糖乳酸杆菌(Lactobacillus  rhamnosus)可通过迷走神经改变健康小鼠的中枢 神经系统功能， 而遭受压力的大鼠补充婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium  infantis)益生菌 菌株后， 可逆转强迫游泳试验(forced  swimming  test， FST)的行为缺陷， 并恢复脑干中基 础去甲肾上腺素(n oradrenal ine， NA)的量。 [0004]但是， 乳酸菌是一个异质性群体的组成， 其存在于与植物和动物物质相关的多种 营养丰富的环境中， 以及人类的呼吸道、 胃肠道和生殖道中。 在厚壁菌门(Firmicutes   phylum)中， LAB成员属于乳杆菌目(Lactobacillales)， 并包括以下各属： 气球菌属 (Aerococcus)、 异球菌属(Alloiococcus)、 肉杆菌属(Carnobacterium)、 肠球菌属 (Enterococcus)、 乳酸杆菌属(Lactobacillus)、 乳酸球菌属(Lactococcus)、 白念珠球菌属 (Leuconostoc)、 酒球菌属(Oenococcus)、 小球菌属(Pediococcus)、 链球菌属 (Streptococcus)、 四联球菌属(Tetragenococcus)、 徘徊球菌属(Vagococcus)以及魏斯氏 菌属(Weissella)。 其中， 乳酸杆菌属是LAB群体中最大的属， 共超过100个种 。 例如， 从中国 台湾客家族群传统上制备的自然发酵的芥菜产品 “福菜”和“酸菜”中， 分析了500株LAB分离 株， 并经鉴定为分属 于5个属18个种的119个代表性菌株， 包括了肠球菌属(1个种)、 乳酸杆 菌属(11个种)、 白念珠球菌属(3个种)、 小球菌属(1个种)和魏斯氏菌属(2个种)。 [0005]此外， 因为这些细 菌为适应不同的环境而演化， LAB的益生菌特性为具有菌株特异 性(strain ‑specific)。 因此， 有必要能够从菌株中鉴别出特定的LAB菌株， 尤其是在发现该 LAB菌株具有某些有益健康的特性时。 例如， 如欧洲专利号EP  2937424B1所示， LAB菌株 PS128可以降低受试者的血清皮质酮并减缓由压力引起的疾病或精神疾病。 PS128的情绪镇 定作用可扩展到其他非人类动物， 例如狗(W O2020/156418A1)。 LAB菌株PS128 还可治疗功能 性胃肠道疾病， 例如便秘和功能性消化不良(US  10188684B2)。 LAB菌株PS128还显示出可通 过调节基底神经节中的多巴胺神经传递来预防或治疗运动障碍， 例如抽动障碍(tic   disorders)和基底神经节疾病(WO  2018/01422 5 A1)。 此外， LAB菌株PS128也显示出可增加 耐力并减少肌肉疲劳或肌肉损伤， 进 而增强个 体的体力和表现(WO  2020/156417 A1)。说　明　书 1/6 页 3 CN 114763578 A 3