(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210021091.1 (22)申请日 2022.01.10 (71)申请人 云南省农业科 学院花卉研究所 地址 650000 云南省昆明市盘龙区北京路 2238号 (72)发明人 邱显钦　晏慧君　陈敏　周宁宁　 王慧纯　李慧敏　孙建丽　高鹏华　 郭艳红　 (74)专利代理 机构 云南凌云律师事务所 5 3207 代理人 康珉 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种快速筛选抗蔷薇长管蚜月季种质资源 的方法 (57)摘要 一种快速筛选抗蔷薇长管蚜月季种质资源 的 方 法 ， 该 方 法 包 括 抗 蚜 标 记 专 用引物 RhWRKY14， 蔷薇长管蚜的接种， 荧光定量RTFQ ‑ PCR试验， 以及抗蚜材料的等级划分。 该方法仅用 1天时间和少量植物材料， 即可准确高效地在我 国各地鉴定出对蔷薇长管蚜具有抗虫性的月季 种质资源， 节约成本、 省工省时。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 CN 114292949 A 2022.04.08 CN 114292949 A 1.一种利用荧光定量RTFQ ‑PCR技术快速筛选抗蔷薇长管蚜月季种质资源的专用引物 RhWRKY14， 其特征在于， 所述专用引物RhWRKY14由RhWRKY14上游引物和RhWRKY14下游引物 组成， 所述RhWRKY14上游引物的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 1所示， RhWRKY14下游引物的核苷 酸序列如SEQ  ID NO： 2所示。 2.一种利用荧光定量RTFQ ‑PCR技术快速筛选抗蔷薇长管蚜月季种质资源的方法， 其特 征在于， 用权利要求1所述的专用引物RhWRKY14对对照月季种质资源材料叶片和接种蔷薇 长管蚜成虫 的月季种质资源材料培养1d后去除蔷薇长管蚜成虫后的叶片样本进行抗蔷薇 长管蚜标记基因相对表达量的测定， 按抗蔷薇长管蚜标记基因相对表达量划分的抗蔷薇长 管蚜等级鉴定月季种质资源 对蔷薇长管蚜的抗 性级别。 3.根据权利 要求2所述的利用荧光定量RTFQ ‑PCR技术快速筛选抗蔷薇长管蚜月季种质 资源的方法， 其特征在于， 所述抗蔷薇长管蚜标记基因相对表达量划分的抗蔷薇长管蚜等 级为如下4个等级： 0级： 免疫， 相对表达量≧20； 1级： 高抗， 相对表达量≧15， 且<20； 2级： 中抗， 相对表达量≧10， 且<15； 3级： 低抗， 相对表达量≧ 5， 且<10。 4.根据权利要求2或3所述的利用荧光定量RTFQ ‑PCR技术快速筛选抗蔷薇长管蚜月季 种质资源的方法， 其特征在于， 所述接种为： 将待鉴定的月季种质资源材料的叶片用70％v/ v乙醇处理1min， 然后用无菌水清洗3～5次作为待接种的叶片； 将蔷薇长管蚜成虫饥饿处理 4h， 而后用已灭菌的湿润毛笔将蔷薇长管蚜成虫接种到待接种的叶片上。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114292949 A 2一种快速筛选抗蔷薇长管蚜月季种质资源的方 法 技术领域 [0001]本发明属木本花卉抗虫育种技术领域， 具体涉及 不同月季种质资源对蔷薇长管蚜 的抗性鉴定和筛 选。 背景技术 [0002]月季(Rosa  hybrida)是蔷薇科(Rosaceae)蔷薇属(Rosa  L.)植物， 栽培广泛， 是全 球第一大切花。 在我国， 云南省是月季切花的主产区之一。 [0003]危害月季的蚜虫主要包括蔷薇长管蚜(Macrosiphum  rosae)、 月季长管蚜 (Macrosiphum  rosivorum)、 桃蚜(Myzuspe  rsicae)、 月季冠蚜(Myzaphis  rosarum)、 棉蚜 (Aphis gossypii)等， 其中蔷薇长管蚜最为常见且危害严重， 其常聚集于月季嫩梢部位刺 吸汁液， 进而使花卉长势衰弱， 同时增加其他病虫害的感染率。 随着切花月季生产规模的不 断扩大， 蚜虫对月季的危害日渐严重， 目前， 主要是采用施用农药对其进行防治， 但这样不 仅增加了生产商的生产成本， 而且对环境造成了污染。 因此， 选育和种植抗蚜月季新品种是 今后绿色生产的关键 。 [0004]选育月季抗蚜新品种的前提， 就是要应用准确高效的抗蚜鉴定和筛选方法， 对大 量的月季亲本材料和大量的月季杂交后代， 进行抗蚜鉴定和筛选工作， 以期缩短抗蚜育种 的周期。 迄今为止， 国内外尚未有利用分子标记 技术筛选抗蚜月季种质资源的研究报道。 目 前， 国内外对于抗蚜植物的传统筛选鉴定方法主要 是： 将蚜虫接种到鉴别寄主植物上， 经过 一定产蚜周期， 记录和统计寄主叶片上产蚜数量变化情况， 以此鉴别出不同抗蚜等级的植 物材料。 [0005]基于我们前期对月季蔷薇长管蚜对月季资源各个阶段的危害特点、 月季抗蚜基 因 的克隆和测序、 月季抗蚜基因分子标记开发等多方面开展了大量的科研工作， 发现结合现 代分子生物技术对抗蚜材料进行鉴定筛选， 不仅能准确 地鉴定和筛选出抗蚜材料， 而且能 缩短鉴定周期， 同时还具有操作方便、 省工省材等优点。 发明内容 [0006]本发明的目的在于提供一种能够快速筛选抗蔷薇长管蚜的月季种质资源的方法， 以便解决目前抗蚜植物的传统筛 选鉴定方法存在的费事费力和鉴别不精准的缺陷。 [0007]本文本以下 所使用的术语： [0008]抗蚜： 抗蔷薇长管蚜。 [0009]蚜虫： 蔷薇长管蚜。 [0010]荧光定量RTFQ ‑PCR技术： 实时荧光定量聚合酶链反应， 英文Real ‑Time  Fluorescence  Quantitative  Polymerase Chain Reaction， 简称： RTFQ ‑PCR。 [0011]UBC基因： 泛素 结合蛋白(UBiquiti n Conjugating protein)基因。 [0012]RhWRKY14基因： 月季七肽(WRKYGQK)保守转录因子基因(Rosa  hybrida probable   WRKY transcripti on factor 40Locus Chromosome  2， RhWRKY14)说　明　书 1/6 页 3 CN 114292949 A 3