(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210022988.6 (22)申请日 2022.01.10 (71)申请人 河北师范大学 地址 050021 河北省石家庄市南 二环东路 20号 (72)发明人 郭琳　张腾腾　赵丹　刘西岗　 (74)专利代理 机构 石家庄轻拓知识产权代理事 务所(普通 合伙) 13128 代理人 张培元 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 小麦千粒重性状相关SNP位 点及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种小麦千粒重性状相关SNP 位点及其应用， 包括用于鉴定或辅助鉴定小麦单 株穗数及耐热性性状的试剂盒、 引物、 相关的分 子标记， 以及上述元素在鉴定或辅助鉴定小麦单 株穗数及耐热性性状中的用途。 本发 明为小麦的 分子标记辅助选择育种提供了一个新方法， 在培 育高产小麦品种的农业实践和/或相关科学研究 中均具有重要意 义。 权利要求书1页 说明书9页 序列表4页 附图1页 CN 114231660 A 2022.03.25 CN 114231660 A 1.一种试剂盒， 用于检测小麦基因组中如下SNP位点的单核苷酸多态性， 所述SNP位点 对应于SEQ  ID NO.1所示序列自5 ’末端第979位碱基。 2.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于： 所述SNP位点处的核苷酸为C或T； 所述 SNP位点处的核苷酸为C/C纯合时， 相对应的基因型是甲； 所述SNP位点处的核苷酸为T/T纯 合时， 相对应的基因型 是乙。 3.根据权利要求1所述的试剂盒， 其特征在于： 所述试剂盒包含序列表中SEQ  ID NO.2 和SEQ ID NO.3组成的引物对1F和1R， 和/或序列表中SEQ  ID NO.4和SEQ  ID NO.5组成的引 物对2F和2R。 4.一种引物， 用于检测小麦基因组中如下SNP位点的单核苷酸多态性， 所述的SNP位点 对应于SEQ  ID NO.1所示序列自5 ’末端第979位碱基； 所述SNP位点处的核苷酸为C或T； 所述 SNP位点处的核苷酸为C/C纯合时， 相对应的基因型是甲； 所述SNP位点处的核苷酸为T/T纯 合时， 相对应的基因型 是乙。 5.根据权利要求4所述的引物， 其特征在于： 所述引物为序列表中SEQ  ID NO.2和SEQ   ID NO.3组成的引物对1F和1R， 和/或序列表中SEQ  ID NO.4和SEQ  ID NO.5组成的引物对2F 和2R。 6.一种分子标记， 其核苷酸序列为SEQ  ID NO.1中5’末端839‑1004位序列， 和/或其核 苷酸序列为SEQ  ID NO.1中5’末端557‑1311位序列。 7.权利要求1或2或3所述的试剂盒、 权利要求4或5所述的引物、 权利要求6所述的分子 标记在鉴定或辅助鉴定小麦千粒重性状中的应用。 8.权利要求1或2或3所述的试剂盒、 权利要求4或5所述的引物、 权利要求6所述的分子 标记在小麦 育种中的应用。 9.一种鉴定或辅助鉴定小麦千粒重性状的方法， 其特 征在于： 该 方法包括如下步骤： A、 对待测小麦基因组DNA中任意一段包含如下SNP位点的DNA片段进行PCR扩增， 并将该 PCR扩增产物进行酶切鉴定； 所述SNP位点对应于SEQ  ID NO.1所示序列自5 ’末端第979位碱 基； B、 确定待测小麦的基因型， 所述SNP位点处的核苷酸为C/C纯合时， 相对应的基因型是 甲； 所述SNP位 点处的核苷酸 为T/T纯合时， 相对应的基因型 是乙； C、 根据待测小麦基因型鉴定或辅助鉴定待测小麦的千粒重性状。 10.根据权利要求9所述的鉴定或辅助鉴定小麦千粒重性状的方法， 其特 征在于： 步骤A中： 所述的PCR扩增的DNA片 段为SEQ ID NO.1中5’末端839‑1004bp； 所述PCR扩增 的特异性引物对为SEQ  ID NO.2和SEQ  ID NO.3组成的引物对1F和1R， SEQ  ID NO.4和SEQ   ID NO.5组成的引物对2F和2R； 所述酶切包括以下步骤： 以小麦基因组DNA为模板， 以引物1F 和1R为引物对扩增得到PCR产物； 将此PCR产物稀释10倍， 以其作为模板， 以引物2F和2R为引 物对扩增得到PCR产物； 用限制性内切酶NheI酶切PCR产物； 步骤B中： 若PCR产物可以被切开， 则该核苷酸多态性位点为C/C， 基因型为甲； 若PCR产 物不能被切开， 则该核苷酸多态性 位点为T/T， 基因型为乙； 步骤C中： 鉴定或辅助鉴定的标准为： 基因型甲纯合的小麦大于/候选大于基因型乙纯 合的小麦 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114231660 A 2小麦千粒重性状相关SNP位点 及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学技术领域， 尤其涉及一种与小麦千粒重相关的SNP位点及 其分子标记、 检测试剂盒、 检测引物及其相关应用。 背景技术 [0002]小麦(Triticum  aestivum L)是禾本科小麦属植物， 其颖果可作为食物， 除此之外 还有六分之一可作为饲料。 中国是较早种植小麦的国家之一， 同时小麦也是我国重要的粮 食作物之一， 小麦产业发展是直接关系到 国家粮食安全和社会稳定的大事。 近年来人 口的 增加对小麦产业发展提出了更大 的挑战。 国内资源环境、 粮食供求格局和国际贸易形势都 发生了深刻变化， 因此提升小麦的高产稳产水平显得 尤为重要。 [0003]小麦产量是由单位面积穗数、 每穗粒数和千粒重三要素构成的。 千粒重作为影响 小麦产量的因素之一， 对小麦增产具有一定的作用。 因此， 挖掘调控千粒重的优异 等位变异 并开发功能标记在小麦高产育种中具有重要的应用价 值。 [0004]目前， 研究者已经定位了大量调控千粒重的QTL。 王瑞霞等利用已构建的含有170 个SSR标记和2个EST标记的遗传图谱进行了QTL定位分析。 共检测到35个QTLs,可解释表型 变异的4.36％～16.80％； 涉及小麦1A、 1B、 2A、 2D、 3A、 3B、 4A、 4D、 5A、 5B、 6D和7D染色体,特别 是1B、 2A、 3B染色体上(Xwmc269、 Xgwm33、 Xwmc419、 Xbarc124、 Xgwm636、 Xgwm359、 Xgwm533、 Xwmc307、 Xwmc418)的QTL可在多个环境下稳定的表达,为千 粒重的QTL精细定位和分子标记 辅助选择奠定了基础。 严俊等采用来自以色列Git it的野生二粒小麦(编号:G18 ‑16)与来自 欧洲的硬粒小麦 栽培种Langdon杂交构建的重组自交系F6代152个家系,进 行千粒重数量性 状基因位点(QTL)的研究分析。 结果表明:全部家系在3个生态环境下千粒重表现出宽广的 遗传差异； 共有6个千粒重QTL被分别 定位在1A(2个),4A,4B,6B和7A染色体上,LOD值为3.0 ～10.6,贡献率为2.1％～18.5％。 廖祥政等以含85个株系的F2:3群体为材料,利用复合区 间作图法检测到3个千粒重QTL,其对表型变异的贡献率为10.90％～33.79％， 其中Am3的等 位基因能够增 加千粒重2.3～4.8g。 [0005]尽管目前已经定位了如此大量的与 小麦千粒重相关的QTL。 但是， 由于绝大多数这 些QTL多为微效QTL， 且不同生态环 境中很难稳定表达， 所以这些QTL难以应用于小麦千 粒重 的遗传改良。 发明内容 [0006]本发明要解决的技 术问题是提供一种小麦千粒重性状相关SNP位 点及其应用。 [0007]为解决上述 技术问题， 本发明所采取的技 术方案如下。 [0008]一种试剂盒， 用于检测小麦基因组中如下SNP位点 的单核苷酸多态性， 所述SNP位 点对应于SEQ  ID NO.1所示序列自5 ’末端第979位碱基。 [0009]作为本发明的一种优选技术方案， 所述SNP位点处的核苷酸为C或T； 所述SNP位点 处的核苷酸为C/C纯合时， 相对应的基因型是甲； 所述SNP位点处的核苷酸为T/T纯合时， 相说　明　书 1/9 页 3 CN 114231660 A 3