(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210020388.6 (22)申请日 2022.01.10 (71)申请人 广州达安基因股份有限公司 地址 510665 广东省广州市高新 技术开发 区香山路19号 (72)发明人 蒋析文　彭海龙　范建　莫斯喻　 (74)专利代理 机构 上海助之鑫知识产权代理有 限公司 31328 代理人 陈详 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 检测新型冠状病毒及其N501Y突变位点的试 剂盒及检测方法 (57)摘要 本发明提供了检测新型冠状病毒及其N501Y 突变位点的试剂盒及检测方法， 具体的地， 本发 明经过多轮筛选验证， 从大量引物探针集合中获 得了灵敏度高、 特异性强、 重复性好、 对野生型新 型冠状病毒无交叉反应， 并且能够进行多重检测 的引物探针集合， 可以用于检测鉴定新型冠状病 毒及其501Y.V2突变株。 权利要求书1页 说明书9页 序列表2页 附图7页 CN 114410840 A 2022.04.29 CN 114410840 A 1.一种用于检测新型冠状病毒及其N501Y突变位点的引物对集， 其特征在于， 所述引物 对集包括： 第一引物对， 所述第一引物对 包括： 如SEQ ID NO.1所示的正向引物； 和， 如SEQ  ID NO.2所示的反向引物； 第二引物对， 所述第二引物对 包括： 如SEQ ID NO.4所示的正向引物； 和， 如SEQ  ID NO.5所示的反向引物。 2.如权利要求1所述的引物对集， 其特 征在于， 所述引物对集还 包括： 第三引物对， 所述第三引物对 包括： 如SEQ ID NO.8所示的正向引物； 和， 如SEQ  ID NO.9所示的反向引物。 3.一种用于检测新型冠状病毒及其N501Y突变位点的探针集， 所述探针集包括核苷酸 序列如SEQ  ID NO.3所示的第一探针、 核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示的第二探针、 核苷酸 序列如SEQ  ID NO.10所示的第三探针； 优选地， 所述探针集还包括SEQ  ID NO.7所示的封闭 探针。 4.一种用于检测新型冠状病毒及其N501Y突变位点的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒 包括权利要求1所述的引物对集。 5.如权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括权利要求3所述的探针 集。 6.如权利要求4所述的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒还包括选自下组 的一种或多重 成分： 热启动Taq抗体酶、 逆转录酶、 dNTPs。 7.如权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括引物探针混合液， 所述引 物探针混合液包括本发明第一方面所述的引物对集和本发明第二方面所述的探针集。 8.一种检测新型冠状病毒及其N501Y突变位点的方法， 其特征在于， 所述方法包括步 骤： (1)提供待检测对象的核酸样本； (2)制备RT ‑PCR反应体系并进行RT ‑PCR检测： 其中， 所述RT ‑PCR反应体系包括： 步骤(1)提供的所述核酸样本、 权利要求1所述的引物 对集、 和权利要求3所述的探针集。 9.如权利要求6所述的方法， 其特征在于， 所述核酸样本来自咽拭子样本、 肺泡灌洗液 样本、 血液样本、 痰液样本、 粪便样本或环境样本 。 10.权利要求1所述的引物对集、 和/或权利要求3所述的探针集的用途， 用于制备PCR检 测试剂盒， 所述PCR检测试剂盒用于检测新型 冠状病毒及其5 01Y.V2突变株。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114410840 A 2检测新型冠状病毒及其N501Y突变位点的试剂盒及检测方 法 技术领域 [0001]本发明属于生物技术和分子诊断领域， 本发明可用于检测2019 ‑nCoV新型冠状病 毒及N501Y突变位点， 具体地说， 本发明涉及新型冠状病毒2019 ‑nCoV N基因与501Y.V2突变 株N501Y突变位 点核酸检测试剂盒。 背景技术 [0002]新型冠状病毒临床表现以发热、 乏力、 干咳为主要表现。 少数患者伴有鼻塞、 流涕、 腹泻等症状。 部分患者仅表现为低热、 轻微乏力等， 无肺炎表现， 多在1周后恢复。 多数患者 预后良好， 感染严重者可导致肺炎、 严重畸形呼吸综合征、 肾衰竭， 更有甚者可导致死亡。 这 种新型冠状病毒(2019 ‑nCoV)对人类具有有很强的感染力， 所引起的肺部感染被命名为 “新 型冠状病毒肺炎 ”(NCIP)。 [0003]新型冠状病毒(2019 ‑nCoV)属于β 冠状病毒属成员， 有包膜， 颗粒呈圆形或椭圆形， 常为多形性， 直径60 ‑140nm， 是目前已知的可以感染人的第7种冠状病毒。 2019 ‑nCoV作为一 种RNA病毒， 具有较高的突变率。 随着突变株的越来越多， 针对各突变型的鉴别需求， 越来越 大。 目前传统的分离培养法培养检测2019新型冠状病毒耗时长、 成本高， 未能形成快速、 完 整的2019新型冠状病毒检测体系。 因此， 针对新型冠状病毒(2019 ‑nCoV)以及各突变株有必 要开发快速、 灵敏、 使用便捷的检测体系， 以满足临床需要。 发明内容 [0004]本发明针对新型冠状病毒及其N501Y突变位点开发了检测的方法和 试剂盒， 以便 能够高效率、 高特异性、 低成本的对感染患者进行检测。 [0005]在本发明的第一方面， 提供了一种用于检测新型冠状病毒及其N501Y突变位点 (501Y.V2突变株)的引物对集， 所述引物对集包括： [0006]第一引物对， 所述第一引物对 包括： [0007]如SEQ ID NO.1所示的正向引物； 和， 如SEQ  ID NO.2所示的反向引物。 [0008]在另一优选例中， 所述引物对集还 包括： [0009]第二引物对， 所述第二引物对 包括： [0010]如SEQ ID NO.4所示的正向引物； 和， 如SEQ  ID NO.5所示的反向引物。 [0011]在另一优选例中， 所述引物对集还 包括： [0012]第三引物对， 所述第三引物对 包括： [0013]如SEQ ID NO.8所示的正向引物； 和， 如SEQ  ID NO.9所示的反向引物。 [0014]本发明的第二方面， 提供了一种用于检测新型冠状病毒及其501Y.V2突变株的探 针集， 所述探针集包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示的第一探针。 [0015]在另一优选例中， 所述探针集还包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示的第二探针； 优选地， 所述探针集还 包括SEQ ID NO.7所示的封闭探针。 [0016]在另一优选例中， 所述探针集还包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.10所示的第三探说　明　书 1/9 页 3 CN 114410840 A 3