(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210022238.9 (22)申请日 2022.01.10 (71)申请人 佛山科学技术学院 地址 528225 广东省佛山市南海区狮山 镇 广云路33号 (72)发明人 贾新正　陈淑慧　贾少炎　谢夏兰　 林树茂　 (74)专利代理 机构 广州新诺专利商标事务所有 限公司 4 4100 专利代理师 刘婉　林玉芳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种利用分子标记对鸡进行体重选育的方 法及其应用及试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种利用分子标记对鸡进行 体重选育的方法， 其包括以下步骤： (1)提取待测 鸡DNA样本； 以所述待测鸡DNA为模板， 进行PCR扩 增， 检测是否具有序列如SEQ  ID NO： 1所示的分 子标记。 本发明还公开了SH3RF2 基因分子标记在 肉鸡体重选育中的应用、 试剂盒、 以及用于肉鸡 体重选育的分子标记。 本发明利用了SH3RF2基因 的第6内含子和外显子剪接区域存在19bp的小片 段插入缺失变异， 该插入突变获得的分子标记显 著影响肉鸡6 ‑12周龄的体重。 使用该分子标记， 可以快速检测肉鸡群体中不同个体的基因型， 进 而依据基因型来预测不同个体体重的差异， 进行 肉鸡体重的选育， 从而提高选 育效率。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图1页 CN 114561475 A 2022.05.31 CN 114561475 A 1.一种利用分子标记对鸡进行体重 选育的方法， 其特 征在于包括以下步骤： (1)提取待测鸡DNA； (2)以所述待测鸡DNA为模板， 进行PCR扩增， 检测是否具有序列如SEQ  ID NO： 1所示 的 分子标记。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 使用引物对扩增所述鸡样本DNA， 所述引物 对的正向引物序列如SEQ  ID NO： 3所示， 反向引物序列如SEQ  ID NO： 4所示。 3.根据权利 要求1所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的反应体系总体积为10 μL， 其 中所述待测鸡DNA模板1 μL， 正向引物和反向引物各0.2nmol/ μL， PCR通用预混液5 μL， 最后加 入去离子水至总反应 体积为10 μL。 4.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的反应条件为： 95℃预变性 3min后， 循环3 3次95℃变性3 0s、 61℃退火3 0s、 72℃延伸15s； 最后72℃延伸3mi n。 5.SH3RF2基因分子标记在肉鸡体重选育中的应用， 其特征在于， 所述分子标记的序列 如SEQ ID NO： 1所示， 在该序列第35个碱基处发生19bp的插入突变， 所述插入突变的序列如 SEQ ID NO： 2所示， 对应如SEQ  ID NO： 1所示的序列的第17 ‑35个碱基片段。 6.一种用于肉鸡体重选育的分子标记， 其特征在于， 所述分子标记的序列如SEQ  ID  NO： 1所示， 在该序列第35个碱基处发生19bp的插入突变， 所述插入突变的序列如SEQ  ID  NO： 2所示， 对应如SEQ  ID NO： 1所示的序列的第17 ‑35个碱基片段相同。 7.引物对， 其特征在于， 所述引物对特异性扩增权利要求6所述的分子标记， 所述引物 对的正向引物序列如SEQ  ID NO： 3所示， 反向引物序列如SEQ  ID NO： 4所示。 8.一种试剂盒， 其包括用于检测权利要求6所述的分子标记的PCR扩增引物对， 所述引 物对的正向引物序列如SEQ  ID NO： 3所示， 反向引物序列如SEQ  ID NO： 4所示。 9.根据权利要求8所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒还 包括PCR通用预混液。 10.一种肉鸡体重选育方法， 其特征在于， 应用权利要求8 或9所述的试剂 盒对待测样品 进行检测。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114561475 A 2一种利用分子标记对鸡 进行体重选育的方 法及其应用及 试 剂盒 技术领域 [0001]本发明属于基 因工程领域， 具体涉及一种利用分子标记对鸡进行体重选育的方法 及其应用及试剂盒。 背景技术 [0002]分子标记辅助选择(MAS， marker ‑assisted  selection)是目前畜禽分子育种最为 常规和有效的育种手段， 它 可以从分子水平上快速准确 地分析个体的遗传组成， 从而实现 对基因型的直接选择， 进行分子育种。 目前， MAS技术应用主要集中在基因聚合(Gene   pyramiding)、 基因渗入(Gene  transgression)、 根据育种计划构建基因系等方面。 在鸡育 种中最为 典型的育种案例即为鸡性连锁矮小基因(dw基因)的鉴定， 目前多家育种公司利用 该基因的分子标记辅助选育， 从而培育出节粮型 的矮脚肉鸡和蛋鸡， 为推动鸡育种做出极 大贡献(牛晓艳， 20 06； 孙建等， 201 1； 楼立峰等， 2010)。 [0003]家鸡在驯化过程中， 根据人类的需求， 人工培育出快大型商品肉鸡和高繁殖力的 商用蛋鸡。 通过全基因组遗传选择分析， 可以揭示控制家鸡重要 经济性状的遗传调控机制， 进而对鸡进行针对性的选育。 2012年， Rubin等人对鸡的多个品系进行全基因组的重测序， 发现了许多鸡基因组中的选择性清除区域。 结果发现， 位于13号染色体上的SH3RF2基因存 在18kb的插入缺失突变， 该大片段缺失突变与生长性状密切相关， 并且缺失型在快大型肉 鸡中得到固定， 而在低生长或者未经选育的品系中基因频率较低(Rubin等,2010)。 这为研 究SH3RF2基因与生长性状的关系提供了前期基础。 现有技术认为SH3RF2 基因上18,961bp的 大片段缺 失突变是影响肉鸡体重的重要标记， 但是在我国大多数地方鸡品种中均未发现此 大片段缺失等位基因的存在， 中国农业大学曲鲁江研究组同步对国内15个鸡种进 行长片段 缺失检测， 均检测不到大片段的缺失存在(赵妤娟等， 2012)。 [0004]以上研究表明， 前期针对鸡SH3RF2的遗传标记不存在于当前国内多个地方品种 中。 而针对该基因是否可以作为国内肉鸡体重性状分子选育的遗传标记基因， 值得开展更 为精细的基因变异扫描和鉴定， 从而确定有效的遗传标记位点， 为实施国内肉鸡的分子辅 助选育提供新的分子标记， 从而促进肉鸡体重的分子 选育工作。 发明内容 [0005]本发明的一个目的是针对以上要解决的技术问题， 提供一种与肉鸡体重相关的分 子标记， 其能够对鸡进行有效体重 选育。 [0006]为了实现以上发明目的， 本发明提供了一种利用分子标记对鸡进行体重选育的方 法， 其包括以下步骤： [0007](1)提取待测鸡DNA； [0008](2)以所述待测鸡DNA为模板， 进行PCR扩增， 检测是否具有序列如SEQ  ID NO： 1所 示的分子标记。说　明　书 1/4 页 3 CN 114561475 A 3