(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210025537.8 (22)申请日 2022.01.11 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114032340 A (43)申请公布日 2022.02.11 (66)本国优先权数据 202110411139.5 2021.04.16 CN (73)专利权人 杭州安誉科技有限公司 地址 310016 浙江省杭州市江干区大农港 路1216号2号楼6层6 07室 (72)发明人 冯瑞娟　章贤骏　李海锋　陈倩倩　 (74)专利代理 机构 北京国翰知识产权代理事务 所(普通合伙) 11696 专利代理师 张天辰 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01)C12Q 1/6844(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (56)对比文件 CN 112176035 A,2021.01.0 5 CN 111560472 A,2020.08.21 EP 3670669 A1,2020.0 6.24 梁圣楠等. “基于实时荧 光RT-PCR法对新型 冠状病毒 核酸检测的研究 ”. 《病毒学报》 .2020, 第36卷(第6期),第1 171-1176页. 王桢等.“新型冠状病毒肺炎防控关键技 术 研究”. 《万方》 .2020,第1- 3页. Jun Lu等. “Automatic system for high - throughput and high -sensitivity dia gnosis of SARS- CoV-2”. 《Bioprocess and Bi osystems Engineering》 .2022,第45卷第5 03-514页. 审查员 宋如生 (54)发明名称 一种新型 冠状病毒 核酸检测试剂盒 (57)摘要 本发明公开了一种新型冠状病毒核酸检测 试剂盒， 属于生物检测技术领域。 本发明使用实 时荧光定量交叉引物等温扩增技术检测新型冠 状病毒， 设计了两组适用于这一技术的引物。 两 组引物分别针对型冠状病毒基因组中的ORF1ab 基因和型冠状病毒基因组中的S基因进行检测。 本发明新型冠状病毒核酸检测试剂盒特异性强， 灵敏度高， 不仅可以对样品进行定性定量的检 测， 还可以实时观测数据的变化， 有利于对样品 数据的全面收集， 方便进行下一步的研究。 因此 本发明不仅适用于现场快速检测， 还适用于以科 研为目的 的检测。 权利要求书1页 说明书8页 序列表6页 附图2页 CN 114032340 B 2022.07.08 CN 114032340 B 1.一种检测新型冠状病 毒的引物， 包括两组引物， 每组引物包含一对剥离引物、 一对交 叉扩增引物、 一对检测引物， 分别是： 第一组： 剥离引物： 如SEQ  ID NO.1所示的正向引物和SEQ  ID NO.2所示的反向引物； 交叉扩增引物： 如所SEQ  ID NO.3示的正向引物和SEQ  ID NO.4所示的反向引物； 检测引物： 如SEQ  ID NO.5所示的正向引物和SEQ  ID NO.6所示的反向引物； 第二组： 剥离引物： 如SEQ  ID NO.7所示的正向引物和SEQ  ID NO.8所示的反向引物； 交叉扩增引物： 如SEQ  ID NO.9所示的正向引物和SEQ  ID NO.10所示的反向引物； 检测引物： 如SEQ  ID NO.11所示的正向引物和SEQ  ID NO.12所示的反向引物。 2.根据权利要求1所述的检测新型冠状病 毒的引物， 其特征在于， 所述两组引物均适用 于实时荧 光定量交叉引物等温扩增技 术。 3.根据权利要求1所述的检测新型冠状病 毒的引物， 其特征在于， 所述第 一组引物用于 检测新型冠状病毒基因组中的ORF1 ab基因； 所述第二组引物用于检测新型冠状病毒基因组 中的S基因。 4.一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒， 包括权利要求1 ‑3任一项所述的检测新型冠状 病毒的引物。 5.根据权利要求4所述的新型冠状病 毒核酸检测试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒还包 括dNTPs、 缓冲液、 Mg2+、 Bst DNA聚合酶、 逆转录酶、 RNase抑制剂、 荧 光染料。 6.根据权利要求5所述的新型冠状病 毒核酸检测试剂 盒， 其特征在于， 所述荧光染料为 SYBR Green I。 7.根据权利要求4所述的新型冠状病 毒核酸检测试剂 盒， 其特征在于， 还包括阳性对照 组和阴性对照组。 8.根据权利要求7所述的新型冠状病 毒核酸检测试剂 盒， 其特征在于， 所述阳性对照组 为新 型冠状病毒基因 组中的ORF1ab基因片段和新型 冠状病毒基因 组中的S基因片段。 9.根据权利要求7所述的新型冠状病 毒核酸检测试剂 盒， 其特征在于， 阴性对照组为无 菌去离子水。 10.根据权利要求5所述的新型冠状病 毒核酸检测试剂 盒， 其特征在于， 包括六个容器， 分别为： 第一容器包括dNTPs、 缓冲液； 第二容器包括两组引物和荧光染料； 第三容器包括 Bst DNA聚合酶、 逆转录酶和RNase抑制剂； 第四容器包括Mg2+； 第五容器包括阳性对照； 第六 容器包括阴性对照。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114032340 B 2一种新型冠状病毒核酸检测试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及生物检测技 术领域， 尤其涉及一种新型 冠状病毒 核酸检测试剂盒。 背景技术 [0002]冠状病毒(Coronavirus， CoV)是一类具有囊膜， 基因组为线性单股正链的RNA病 毒， 是自然界广泛存在的一大类病毒。 冠状病毒分为α、 β 、 γ和 δ共4个属， 其中α和β 冠状病毒 可以感染哺乳动物， 而γ和 δ冠状病毒主要感染鸟类。 此前已经发现有6种冠状病毒可感染 人类： α 冠状病毒(HCoV ‑229E、 HCoV ‑NL63)和β 冠状病毒 （HCoV ‑HKU1， HCoV ‑OC43、 MERS ‑CoV、 SARS‑CoV） ， 患者表现从普通感冒到重症肺部感染。 新型冠状病毒 （严重急性呼吸综合征冠 状病毒2， SARS ‑CoV‑2） 是一种先前尚未在人类中发现的β 属冠状病毒， 在人群中具有极强的 传染性， 主要通过呼吸道飞沫、 呼吸道分泌物和直接接触传播。 C OVID‑19患者通常表现出特 定的相似症状， 例如发烧、 全身乏力和咳嗽。 大多数患者都表现出轻度的流感样症状， 预后 良好， 少数患者病情危重 。 [0003]目前病毒的检测方法主要包括病毒分离法、 免疫学方法和 分子诊断法。 病毒分离 法耗时长、 不能大规模应用于临床快速、 准确的检测； 免疫学方法 （ELISA、 抗原 抗体检测等） 可以快速检出， 但灵敏度不足， 多在患病后才能检出， 比较滞后， 不利于筛查， 也无法确诊； 现代分子生物学诊断方法特异性 好、 灵敏度高， 目前市面上 大多采用RT ‑PCR方法进行检测。 [0004]为了控制疫情， 诊断试剂盒的研制成为热门领域， 但由于新型冠状病毒的发现时 间短， 对其基因组特征、 结构特征、 发病机理等方面还在不断的研究当中。 目前的新型冠状 病毒抗体 检测试剂盒， 也因研发周期短， 检测试剂盒的灵敏度和特异性都有 待提高。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供一种利用实时荧光定量交叉引物等温扩增技术特异、 快 速、 高效地检测新型 冠状病毒的试剂盒。 [0006]为达到上述目的， 本发明采用了以下技 术方案： [0007]本发明公开了一种检测新型冠状病毒的引 物， 包括两组引 物， 每组引 物包含一对 剥离引物、 一对交叉扩增引物、 一对检测引物， 分别是： [0008]第一组： [0009]剥离引物： 如SEQ  ID NO.1所示的正向引物和SEQ  ID NO.2所示的反向引物； [0010]交叉扩增引物： 如所SEQ  ID NO.3示的正向引物和SEQ  ID NO.4所示的反向引物； [0011]检测引物： 如SEQ  ID NO.5所示的正向引物和SEQ  ID NO.6所示的反向引物； [0012]第二组： [0013]剥离引物： 如SEQ  ID NO.7所示的正向引物和SEQ  ID NO.8所示的反向引物； [0014]交叉扩增引物： 如SEQ  ID NO.9所示的正向引物和SEQ  ID NO.10所示的反向引物； [0015]检测引物： 如SEQ  ID NO.11所示的正向引物和SEQ  ID NO.12所示的反向引物。 [0016]优选地， 检测新型冠状病毒的两组引物均适用于实时荧光定量交叉引物等温扩增说　明　书 1/8 页 3 CN 114032340 B 3