(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210026099.7 (22)申请日 2022.01.11 (71)申请人 佛山科学技术学院 地址 528225 广东省佛山市南海区狮山 镇 广云路33号 申请人 云南农业大 学 (72)发明人 苟潇　孔小艳　杨舒黎　展亚楠　 朱莉　唐琳　张晓燕　李昕鹏　 (74)专利代理 机构 北京隆达恒晟知识产权代理 有限公司 1 1899 代理人 李宁 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 与牛红细胞膜结构相关的SNP标记位点及其 应用 (57)摘要 本发明涉及与牛红细胞膜结构相关的SNP标 记位点及其应用， 属于基因工程领域。 该SNP标记 位于牛第10号染色体 SPTB基因第19 外显子G108C 位点 （chr10： 77230398） ， 该位点发生非同义突变 （谷氨酸变为天冬氨酸， Glu1370Asp） ， CC基因型 个体全血高切相对指数极显著低于GG或GC基因 型个体 （P<0.01） ， 表明CC基因型有更 强的红细胞 变形能力； CC基因型个体的低氧 耐受和高原适应 能力显著高于GG或GC基因型个体。 本发明提供的 与牛红细胞膜结构和低氧耐受相关的 SPTB基因 上的SNP位点可作为牛低氧耐受或选育耐高原低 氧环境牛的分子标记， 同时对牛特色基因的保存 和利用也具有重要意 义。 权利要求书1页 说明书10页 附图2页 CN 114410800 A 2022.04.29 CN 114410800 A 1.与牛红细胞膜结构相关的SNP标记位点， 其特征在于： 所述的SNP标记位点位于牛第 10号染色体 SPTB基因第19外显子G108C位点 （chr10： 77230398） ， 该位点发生非同义突变 Glu1370Asp， 碱基变异信息为G  > C； CC基因型个体全血高切相对指数极显著低于GG或GC基 因型个体， CC基因型个 体的低氧耐受和高原适应能力显著高于G G或GC基因型个 体。 2.权利要求1所述的SNP标记位点在检测牛高原适应能力或选育耐高原低氧环境的牛 中的应用。 3.权利要求1所述的SNP标记位点在制备检测牛高原低氧环境适应性或选育耐高原低 氧环境牛的试剂盒中的应用。 4.一种检测牛低氧环境适应性的方法， 其特征在于： 以待测牛的全基因组DNA为模板， 检测权利要求1所述的SNP标记位点； 若该位点为CC基因型， 则待测牛的低氧耐受和高原适 应能力较好， 判定为低氧耐受优势型； 若该位点为GG或GC基因型， 则待测牛的低氧耐受和高 原适应能力较弱， 判定为低氧耐受劣势型。 5.一种选育耐高原低氧环境牛的方法， 其特征在于： 通过检测权利要求1所述的SNP标 记位点， 选择SPTB基因G108C位 点基因型为C C型的个体作为育种亲本 。 6.用于检测权利 要求1中所述的SNP标记位点的PCR引物， 其特征在于： 上游引物SPTB ‑F 为TCCGTCCCTGTCTTACC， 下游引物S PTB‑R为CTGCCATCCATCATCCT。 7.如权利要求6所述的PCR引物， 其特征在于： 引物PCR扩增反应条件如下： 95℃预变性   5min； 95℃变性  45s， 59℃退火  45s， 72℃延伸45s， 3 5个循环； 72℃后延伸8mi n。 8.一种辅助选育耐高原低氧环境牛的试剂盒， 其特征在于： 包含权利要求6或7所述的 PCR引物。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114410800 A 2与牛红细胞膜结构相关的SNP标记位点 及其应用 技术领域 [0001]本发明属于基因工程领域， 具体的说， 涉及与牛红细胞膜结构相关的SNP标记位点 及其应用。 背景技术 [0002]遗传性球形红细胞增多症(hereditary  spherocytosis， HS)是一组遗传性疾病， 其特征是在外周血涂片上存在球形红细胞， 是由于调控红细胞膜蛋白的基因发生突变引 起。 HS的特征是贫血、 黄疸、 脾肿大和胆石症。 编码β ‑血影蛋白亚基的SPTB基因突变为球形 红细胞增多症2型， SPTB基因是除ANKl基因外， HS常见的致病基因。 其位于染色体14q23 ‑ q24.2， 由32个外显子构成。 β ‑血影蛋白是一种多功能蛋白质， 由α和β 两个亚基组成， 尽管有 一 些 相 似 之 处 ，但 它 们 在 结 构 上 是 截 然 不 同 的 ，并 由 不 同 的 基 因 编 码 (Speicheretal.1984)。 α和β 血影蛋白链以反向平行的方式相互缠绕形成异二聚体， 而异二 聚体又反过来自结合形成四聚体和低聚体。 β亚基的分子量为246kD， 由106个氨基酸组成 (Ipsaro etal.2010)。 研究发现， 血影蛋白在红细胞膜中可形成 网状结构， 与锚蛋白的锚定 结合在维持红细胞膜形状及机械性等方面起着关键性的作用。 血影蛋白突变导致红细胞膜 脆性增加， 降低红细胞的柔韧性而引发遗传溶血性贫血(Delaunay  2007)。 SPTB基因突变包 括起始密码子破坏、 移码和无义突变。 世界范围内不同国家和地区HS发生的类型和发病率 都有所不同， 北美多以β ‑血影蛋白缺陷引起， 占比达到15％～30％， 而由α ‑血影蛋白缺陷引 起的HS在国内更常见(李津婴etal.2005)。 SPTB基因常见的突变类型有Bari突变 (Perrottaetal.2009)和Guemene ‑Penfao突变。 除HS外， SPTB基因异常还可导致多种疾病， 如新生儿黄疽、 椭圆形红细胞增多症等(Gal lagheretal.19 98)。 [0003]牦牛和藏黄牛是分布于青藏高原及其毗邻地区的土著畜种， 是牛属动 物中能适应 高寒、 高海拔气候的珍稀遗传资源。 与低地黄牛相比， 牦牛和藏黄牛能很好的适应青藏高原 极度缺氧等恶劣的自然环境， 并在生理、 生化和形态学上形成了稳定的适应高原低氧的独 特特征和机制， 被认为是研究哺乳动物高原适应性的典型动物。 近几年， 通过对高原土著居 民和高原动物的研究， 已发掘了许多低氧适应相关基因， 但目前国内对SPTB基因在动物低 氧适应上的作用未 见相关报道。 发明内容 [0004]基于现有技术背景， 本发明提供了与牛红细胞膜结构相关的SNP标记位点及其特 异性引物与应用。 [0005]为实现上述目的， 本发明是通过如下技 术方案实现的： [0006]本发明提供了与牛红细胞膜结构相关的S NP标记位点， 该S NP标记位点位于牛第19 外显子G108C位点(chr10： 772 30398)， 该位点发生非同义突变Glu1370Asp， 碱基变异信息为 G>C； CC基因型个体全 血高切相对指数极显著低于 GG或GC基因型个体， CC基因型个体的低氧 耐受和高原适应能力显著高于G G或GC基因型个 体。说　明　书 1/10 页 3 CN 114410800 A 3