(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210036424.8 (22)申请日 2022.01.11 (71)申请人 武汉明了生物科技有限公司 地址 430058 湖北省武汉市经济技 术开发 区2HA地块办公及生产用房4楼401室 （东方工业园5号楼） 申请人 湖北省疾病预防控制中心 （湖北省 预防医学 科学院） (72)发明人 彭海　江永忠　刘琳琳　李论　 高利芬　方斌　张婷　蔡昆　 雷亚克　余晓　 (74)专利代理 机构 北京欣鼎专利代理事务所 (普通合伙) 11834 专利代理师 王阳虹(51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) (54)发明名称 一种鉴定人博卡病毒的引物组、 试剂盒及应 用 (57)摘要 本发明公开了一种鉴定人博卡病毒的引物 组、 试剂盒及应用， 属于生物技术领域。 所述引物 组包括如序列表中SEQ  ID NO： 1至SEQ  ID NO： 30 所示的引物。 本发明提供的MNP标记位点是人博 卡病毒特异的且在物种内部多态的基因组区域。 所述引物组对所述MNP标记位点的扩增具有较高 的稳定性和特异性； 使用该引物组的试剂盒对人 博卡病毒的鉴定具有良好的灵敏度、 稳定性、 较 高的重现率和准确率。 所述引物组和试剂盒能够 用于非诊断目的的人博卡病毒的定性鉴定、 毒株 内部及毒株间的遗传变异监测、 数据库的构建和 精细分型。 权利要求书1页 说明书27页 CN 114703319 A 2022.07.05 CN 114703319 A 1.一种鉴定人博卡病毒的引物组， 其特征在于， 所述引物组包括： 第一引物对、 第二引 物对、 第三引物对、 第四引物对、 第五引物对、 第六引物对、 第七引物对、 第八引物对、 第九引 物对、 第十引物对、 第十一引物对、 第十二引物对、 第十三引物对、 第十四引物对和第十五引 物对中的至少一对， 每对所述引物对均包括 正向引物和反向引物， 所述第一引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 1所示， 所述第一引物对的反向引 物如序列表中SEQ  ID NO： 2所示， 所述第二引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 3所 示， 所述第二引物对的反向引物如序列表中S EQ ID NO： 4所示， 所述第三引物对的正向引物 如序列表中SEQ  ID NO： 5所示， 所述第三引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 6所示， 所述第四引物对的正 向引物如序列表 中SEQ ID NO： 7所示， 所述第四引物对的反向引物如 序列表中SEQ  ID NO： 8所示， 所述第五引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 9所示， 所 述第五引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 10所示， 所述第六引物对的正向引物如序 列表中SEQ  ID NO： 11所示， 所述第六引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 12所示， 所 述第七引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 13所示， 所述第七引物对的反向引物如序 列表中SEQ  ID NO： 14所示， 所述第八引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 15所示， 所 述第八引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 16所示， 所述第九引物对的正向引物如序 列表中SEQ  ID NO： 17所示， 所述第九引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 18所示， 所 述第十引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 19所示， 所述第十引物对的反向引物如序 列表中SEQ  ID NO： 20所示， 所述第十一引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 21所示， 所述第十一引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 22所示， 所述第十二引物对的正向引 物如序列表中SEQ  ID NO： 23所示， 所述第十二引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 24 所示， 所述第十三引物对的正 向引物如序列表 中SEQ ID NO： 25所示， 所述第十三引物对的 反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 26所示， 所述第十四引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID  NO： 27所示， 所述第十四引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 28所示， 所述第十五引物 对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 29所示， 所述第十五引物对的反向引物如序列表中 SEQ ID NO： 30所示。 2.一种鉴定人博卡病 毒的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包括如权利要求1所述的引 物组。 3.根据权利要求2所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒还 包括多重PCR预混液。 4.一种如权利要求1所述的引物组的应用， 其特征在于， 所述应用包括： 利用所述引物 组对人博卡病毒基因组上的15个MNP标记 位点中的至少一个进 行检测， 根据获得的MNP标记 位点的序列进 行非诊断目的的人博卡病毒的定性鉴定、 人博卡病毒毒株间及毒株内的遗传 变异监测、 MNP指纹数据库的构建和人博卡病毒的精细分型鉴定， 所述15个MNP标记位点的 序列如序列表中SEQ  ID NO： 31至SEQ  ID NO： 45所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114703319 A 2一种鉴定人 博卡病毒 的引物组、 试剂盒及应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 特别涉及一种鉴定人博卡病毒的引 物组、 试剂盒及应 用。 背景技术 [0002]人博卡病毒(Human  bocavirus， HBoV)属 于细小病毒科博卡病毒属， 是一种DNA病 毒， 容易感染2岁以下的婴幼儿， 主要引起肺炎、 支气管炎、 鼻炎、 咽喉炎等呼吸道疾病； 通过 空气传播， 感染率高， 病征与普通感冒相似， 很难与普通感冒区分开。 根据世界范围内对其 广泛的流行病学报道， 检出率一般介于2 ‑19％。 因此， 快速、 准确的人博卡病毒的鉴定对于 及时诊断病因， 做到早发现早治疗， 减少病情恶化具有重要意 义。 [0003]另外， 人博卡病毒也是实验室进行研究常用的模式病原微生物。 其作为群体生物， 在和宿主、 环境的互作中， 群体内个体会发生变异， 导致检测或治疗方法的失效； 对于实验 室的研究来说， 这种不易被察觉的变异会导致不同实验室或同一 实验室不同时期相同命名 的菌毒株实际上并不相同， 导致实验 结果的不可重现和不可比较。 人Hella细胞实验室间的 异质性已经导致大量的实验结果的不可比较和数据浪费。 因此， 开发快速、 准确的、 可监测 变异的金黄葡萄球菌人博卡病毒鉴定分析方法对于人博卡病毒的临床治疗、 防疫鉴定和科 学研究和应用都具有重要意 义。 [0004]经典的人博卡病毒鉴定方法， 包括分离培养和基于核酸序列的PCR技术等， 人博卡 病毒难以分离培养， 而且基于分离培养的鉴定技术耗时长、 操作复杂、 鉴定通量低、 不能鉴 定变异； 基于PCR的鉴定技术鉴定人博卡病毒的准确性和灵敏度低， 也不能鉴定序列变异， 不利于人 博卡病毒的鉴定 。 发明内容 [0005]为了解决现有技术的问题， 本发明实施例提供了一种鉴定人博卡病毒的引 物组、 试剂盒及应用。 所述 技术方案如下： [0006]一方面， 本发明提供了一种鉴定人博卡病毒的引物组， 所述引物组包括： 第一引物 对、 第二引物对、 第三引物对、 第四引物对、 第五引物对、 第六引物对、 第七引物对、 第八引物 对、 第九引物对、 第十引物对、 第十一引物对、 第十二引物对、 第十三引物对、 第十四引物对 和第十五引物对中的至少一对， 每对所述引物对均包括 正向引物和反向引物， [0007]所述第一引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 1所示， 所述第一引物对的反 向引物如序列表中SEQ  ID NO： 2所示， 所述第二引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 3 所示， 所述第二引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 4所示， 所述第三引物对的正向引 物如序列表中SEQ  ID NO： 5所示， 所述第三引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 6所 示， 所述第四引物对的正向引物如序列表中S EQ ID NO： 7所示， 所述第四引物对的反向引物 如序列表中SEQ  ID NO： 8所示， 所述第五引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 9所示， 所述第五引物对的反向引物如序列表中S EQ ID NO： 10所示， 所述第六引物对的正向引物如说　明　书 1/27 页 3 CN 114703319 A 3