(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210036282.5 (22)申请日 2022.01.11 (71)申请人 武汉明了生物科技有限公司 地址 430058 湖北省武汉市经济技 术开发 区2HA地块办公及生产用房4楼401室 （东方工业园5号楼） 申请人 湖北省疾病预防控制中心 （湖北省 预防医学 科学院） (72)发明人 彭海　张险峰　吕静　高利芬　 李论　方斌　杨红梅　李国明　 江永忠　雷亚克　 (74)专利代理 机构 北京欣鼎专利代理事务所 (普通合伙) 11834 专利代理师 王阳虹(51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/01(2006.01) (54)发明名称 一种鉴定三种鲍特菌的引物组、 试剂盒及其 应用 (57)摘要 本发明公开了一种鉴定三种鲍特菌的引物 组、 试剂盒及其应用， 属于生物技术领域。 所述引 物组包括： 第一引物对、 第二引物对、 第三引物 对、 第四引物对、 第五引物对、 第六引物对、 第七 引物对、 第八引物对、 第九引物对和第十引物对 中的至少一对， 每对所述引物对均包括正向引物 和反向引物。 本发明提供的引物组具有较高的特 异性和稳定性， 使用该引物组的试剂盒具有良好 的灵敏度、 重现率和准确率。 所述试剂盒通过引 物组检测10个MNP标记位点， 能够用于非诊断目 的的三种鲍特菌的鉴定、 区分、 菌株间和菌株内 部的遗传变异鉴定、 三种鲍特菌的MNP指纹数据 库的构建。 权利要求书1页 说明书22页 附图1页 CN 114703301 A 2022.07.05 CN 114703301 A 1.一种鉴定三种鲍特菌的引物组， 其特征在于， 所述引物组包括： 第一引物对、 第二引 物对、 第三引物对、 第四引物对、 第五引物对、 第六引物对、 第七引物对、 第八引物对、 第九引 物对和第十引物对中的至少一对， 每对所述引物对均包括 正向引物和反向引物， 所述第一引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 1所示， 所述第一引物对的反向引 物如序列表中SEQ  ID NO： 2所示， 所述第二引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 3所 示， 所述第二引物对的反向引物如序列表中S EQ ID NO： 4所示， 所述第三引物对的正向引物 如序列表中SEQ  ID NO： 5所示， 所述第三引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 6所示， 所述第四引物对的正 向引物如序列表 中SEQ ID NO： 7所示， 所述第四引物对的反向引物如 序列表中SEQ  ID NO： 8所示， 所述第五引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 9所示， 所 述第五引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 10所示， 所述第六引物对的正向引物如序 列表中SEQ  ID NO： 11所示， 所述第六引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 12所示， 所 述第七引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 13所示， 所述第七引物对的反向引物如序 列表中SEQ  ID NO： 14所示， 所述第八引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 15所示， 所 述第八引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 16所示， 所述第九引物对的正向引物如序 列表中SEQ  ID NO： 17所示， 所述第九引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 18所示， 所 述第十引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 19所示， 所述第十引物对的反向引物如序 列表中SEQ  ID NO： 20所示。 2.一种鉴定三种鲍特菌的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒包括如权利要求1所述的引 物组。 3.根据权利要求2所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒还 包括多重PCR预混液。 4.一种如权利要求1所述的引物组的应用， 其特征在于， 所述应用包括： 利用所述引物 组对三种鲍特菌基因组上的10个MNP标记 位点中的至少一个进 行检测， 根据获得的MNP标记 位点的序列进行非诊断目的的三种鲍特菌的鉴定、 区分、 菌株间和菌株内部的遗传变异鉴 定以及三种鲍特菌的MNP指纹数据库的构建， 所述10个MNP标记位点的序列如序列表中SEQ   ID NO： 21至SEQ  ID NO： 30所示， 所述三种鲍特菌为百日咳鲍特菌、 副 百日咳鲍特菌和支气 管败血鲍特菌 。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114703301 A 2一种鉴定三种鲍特菌的引物组、 试剂盒及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 特别涉及一种鉴定三种鲍特菌 的引物组、 试剂盒及其 应用。 背景技术 [0002]鲍特菌属(Bordetella)主要包括： 百日咳鲍特菌(B.pertussis)、 副百日咳鲍特菌 (B.para pertussis)和支气管败血鲍特菌(B.branchiseptica)等。 上述三种鲍特菌是比较 常见的且都和人类呼吸道感染有关的病原菌。 现有的检测方法主要是基于PCR类的技术核 检测样本中的16S序列， 该方法通常同时检测上述三种菌， 但是， 百日咳鲍特菌、 副百日咳鲍 特菌和支气管败血鲍特菌在遗传上高度相似， 这使得基于16S序列的检测难以准确区分这 三种菌。 发明内容 [0003]为了解决现有技术的问题， 本发明实施例提供了一种鉴定三种鲍特菌 的引物组、 试剂盒及其应用。 所述 技术方案如下： [0004]一方面， 本发明提供了一种鉴定三种鲍特菌的引物组， 所述引物组包括： 第一引物 对、 第二引物对、 第三引物对、 第四引物对、 第五引物对、 第六引物对、 第七引物对、 第八引物 对、 第九引物对和第十引物对中的至少一对， 每对所述引物对均包括 正向引物和反向引物， [0005]所述第一引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 1所示， 所述第一引物对的反 向引物如序列表中SEQ  ID NO： 2所示， 所述第二引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 3 所示， 所述第二引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 4所示， 所述第三引物对的正向引 物如序列表中SEQ  ID NO： 5所示， 所述第三引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 6所 示， 所述第四引物对的正向引物如序列表中S EQ ID NO： 7所示， 所述第四引物对的反向引物 如序列表中SEQ  ID NO： 8所示， 所述第五引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 9所示， 所述第五引物对的反向引物如序列表中S EQ ID NO： 10所示， 所述第六引物对的正向引物如 序列表中SEQ  ID NO： 11所示， 所述第 六引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 12所示， 所述第七引物对的正向引物如序列表中S EQ ID NO： 13所示， 所述第七引物对的反向引物如 序列表中SEQ  ID NO： 14所示， 所述第八引物对的正向引物如序列表中SEQ  ID NO： 15所示， 所述第八引物对的反向引物如序列表中S EQ ID NO： 16所示， 所述第九引物对的正向引物如 序列表中SEQ  ID NO： 17所示， 所述第九引物对的反向引物如序列表中SEQ  ID NO： 18所示， 所述第十引物对的正向引物如序列表中S EQ ID NO： 19所示， 所述第十引物对的反向引物如 序列表中SEQ  ID NO： 20所示。 [0006]另一方面， 本发明实施例提供了一种鉴定三种鲍特菌 的试剂盒， 所述试剂盒包括 上述引物组。 [0007]具体地， 所述试剂盒还 包括多重PCR预混液。 [0008]又一方面， 本 发明实施例提供了一种上述引物组的应用， 所述应用包括： 利用所述说　明　书 1/22 页 3 CN 114703301 A 3