(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210028467.1 (22)申请日 2022.01.11 (71)申请人 中国医学 科学院阜外医院 地址 100037 北京市西城区北礼士 路167号 (72)发明人 张伟丽　李荣霞　王淑婷　周海清　 阿达莱提·卡米力　 (74)专利代理 机构 北京慧尚知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 11743 代理人 鲍晓芳 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A61K 31/7088(2006.01) A61K 31/713(2006.01)A61K 49/00(2006.01) A61P 9/10(2006.01) (54)发明名称 一种lncRNA APAT分子在动脉粥样硬化性心 脏病中的应用 (57)摘要 本发明公开了一种 与巨噬细胞炎症反应、 动 脉粥样硬化性心脏病以及动脉粥样硬化斑块稳 定性相关的生物标记物lncRNA  APAT； 本发明公 开了lncRNA  APAT及其抑制剂在制备用于评估动 脉粥样硬化斑块稳定性 以及治疗动脉粥样硬化 性心脏病的产品中的用途； 本发 明公开了一种单 核细胞特异性表 达lncRNA  APAT的mPCSK9动脉粥 样硬化小鼠模型用于制备动脉粥样硬化性心脏 病发病机制的研究模型。 本发明利用所述lncRNA   APAT可以在冠状动脉粥样硬化性心脏病发生的 早期进行评估诊断或对动脉粥样硬化斑块稳定 性和进展进行评估预测， 为基因治疗、 药物治疗 等临床应用提供了治 疗靶点和重要依据。 权利要求书1页 说明书10页 序列表5页 附图5页 CN 114317722 A 2022.04.12 CN 114317722 A 1.一种检测lncRNA  APAT表达水平的试剂在制备诊断动脉粥样硬化性心脏病的产品中 的应用， 所述 lncRNA APAT核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示。 2.如权利要求1所述应用， 其特征在于， 所述lncRNA  APAT在具有冠状动脉粥样硬化混 合易损斑块的冠心病患者的外周血中 高表达。 3.如权利 要求2所述应用， 其特征在于， 所述lncRNA  APAT能促进单核 ‑巨噬细胞炎症和 脂质吞噬作用； 抑制单核 ‑巨噬细胞的胆固醇流出能力； 促进动脉粥样 硬化斑块形成的数量 和面积。 4.一种用于早期诊断动脉粥样硬化性心脏病或预测动脉粥样硬化斑块稳定性和进展 的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包含检测lncRNA  APAT的表达水平的工具， 以及如何使 用所述试剂盒的说明； 所述 lncRNA APAT核苷酸序列为SEQ  ID NO.1所示。 5.如权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述工具包括用于特异性检测lncRNA   APAT表达水平的引物对， 所述引物对序列如SEQ  ID NO.2和SEQ  ID NO.3所示。 6.一种lncRNA  APAT抑制剂， 其特征在于， 所述lncRNA  APAT核苷酸序列如SEQ  ID NO.1 所示； 所述抑制剂包括抑制l ncRNA APAT表达的试剂。 7.如权利要求6所述抑制剂， 其特征在于， 所述抑制lncRNA  APAT表达的试剂包括反义 寡核苷酸和/或小干扰RNA。 8.权利要求6或7所述的抑制剂在制备预防或治疗动脉粥样硬化性心脏病的药物组合 物中的应用。 9.权利要求8所述应用， 其特征在于， 所述抑制剂具有抑制单核 ‑巨噬细胞炎症和脂质 吞噬作用； 促进 单核‑巨噬细胞的胆固醇流出能力； 优选地， 所述单核 ‑巨噬细胞的炎症因子 的相关基因包括M CP1、 TNFα 、 VCAM1、 I L1β 和IL6。 10.一种单核细胞特异性表达lncRNA  APAT的mPCSK9动脉粥样硬化小鼠模型在制 备动 脉粥样硬化性心脏病发病机制的研究模型或治疗动脉粥样硬化性心脏病药物的筛选模型 中应用； 所述小鼠模型为单核 ‑巨噬细胞特异性表达lncRNA  APAT的、 并给予mPCSK9诱导形 成动脉粥样硬化的纯合子小鼠(APATfloxed/floxed， Lyz2‑Cre)。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114317722 A 2一种lncRNA  APAT分子在动脉粥样硬化性心脏病中的应用 技术领域 [0001]本发明涉及检验医学、 临床医学、 生物技术领域， 具体涉及一种lncRNA  APAT分子 在动脉粥样硬化 性心脏病中的应用。 背景技术 [0002]心脑血管疾病是危害我国居民生命健康的 “第一杀手 ”， 患病人数达2.9亿， 居总死 亡率的首位。 动脉粥样硬化是心脑血管疾病发生和发展的重要病理基础， 循环血中的单核 细胞迁移并黏附于活化的血管内皮细胞， 浸润至内膜下层形成巨噬细胞是动脉粥样 硬化的 起始环节， 单核 ‑巨噬细胞通过表型转换和分泌炎症因子等机制调控动脉粥样硬化发展的 各个阶段。 巨噬细胞具有表型异质性和可塑性， 主要分为两种类型： 经典活化型巨噬细胞 (Classical  activated  macrophages,M1)、 替代活化型巨噬细胞(Alternatively   activated  macrophages,M2)。 M1型巨噬细胞在斑块中大量存在， 通过分泌炎症因子促进动 脉粥样硬化进展； 反之， M2型巨噬细胞可以通过分泌抗炎因子发挥抑制斑块进展的作用。 斑 块的稳定性决定了动脉粥样 硬化的危险程度。 稳定性斑块纤维帽较厚， 不易破裂。 混合易损 斑块由薄且不稳定的纤维帽覆盖大的脂质核心， 易于破裂， 导致血栓形成， 诱 发急性心肌梗 死、 脑卒中等急性心脑血管事件。 因此， 探究斑块稳定性的机制和分子标志物是早期防治心 脑血管事件的关键 。 遗传、 表 观遗传及环境因素共同参与动脉粥样硬化发生发展过程。 [0003]长链非编码RNAs(long  noncoding RNAs， 简称lncRNAs)是一类长度大于200个碱 基， 没有蛋白质编码潜能的核苷酸序列， 在表观遗传、 转录和转录后水平等多个层面调控基 因达， 在细胞增殖、 分化、 凋亡等生物学过程中发挥着重要作用。 通常， 定位于细胞核的 lncRNAs可通过调控组蛋白修饰参与染色质重塑； 定位于细胞质的lncRNAs多作为竞争性内 源RNA分子调控基因表达 。 LncRNA在动脉粥样硬化中的作用受到广泛关注。 [0004]本发明通过全转录组测序技术首次鉴别出一种lncRNA分子在具有混合易损斑块 的冠心病患者外周血中特异高表达。 该lncRNA分子位于人12号染色体， 在Ensembl数据库中 的ID号为ENS T00000545163.2， 长686bp。 发明人将其命名为lncRNA  APAT。 lncRNA  APAT在动 脉粥样硬化及其相关心脏病中的作用尚无报道。 发明内容 [0005]为了解决上述问题， 本发明目的在于提供一种动脉粥样硬化性心脏病以及动脉粥 样硬化斑块稳定性相关的生物标记 物lncRNA APAT及其在诊断和治疗产品中应用。 [0006]为实现上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0007]发明人通过全转录组测序技术首次鉴别出一种lnc RNA APAT分子在具有 混合易损 斑块的冠心病患者外周血中特异高表达， 进一步通过基因功能实验发现其在调控单核 ‑巨 噬细胞活性、 影响斑块不稳定性中发挥着 重要作用。 本申请中lncRNA  APAT是对冠脉混合易 损斑块组患者进 行全转录组测序鉴定发现的新的lncRNA分子， 目前尚无功能注释和相关研 究报道。说　明　书 1/10 页 3 CN 114317722 A 3