(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210026013.0 (22)申请日 2022.01.11 (71)申请人 佛山科学技术学院 地址 528225 广东省佛山市南海区狮山 镇 广云路33号 申请人 云南农业大 学 (72)发明人 苟潇　孔小艳　杨舒黎　朱莉　 展亚楠　唐琳　张晓燕　张光荣　 李昕鹏　 (74)专利代理 机构 北京隆达恒晟知识产权代理 有限公司 1 1899 专利代理师 李宁 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01)C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 与牛血小板生成相关的SNP标记位 点与应用 (57)摘要 本发明涉及与牛血小板生成相关的SNP标记 位点及其应用， 属于基因工程领域。 该SNP标记位 于牛第1号染色体 THPO基因第4内含子1316  bp 处， G1316T位点 （chr1： 83431707） ， 碱基变异信息 为T>G； GG基因型个体 血小板数 （PLT） 极显著高于 GT和TT基因型个体 （ P<0.01） ， 其余指标差异不显 著， 表明GG基因型可增加血小板数； GG基因型个 体的低氧耐受和高原适应能力显著高于GT或TT 基因型个体。 本发明提供的与牛血小板生成和低 氧耐受相关的 THPO基因上的SNP位点可作为牛低 氧耐受和或选育耐高原低氧环 境牛的分子标记， 同时对牛特色基因的保存和利用也具有重要意 义。 权利要求书1页 说明书10页 附图2页 CN 114606325 A 2022.06.10 CN 114606325 A 1.与牛血小板生成相关的SNP标记位点， 其特征在于： 所述的SNP标记位点位于牛第1号 染色体THPO基因第4内含子1316bp处， G1316T位点 （chr1： 83431707） ， 碱基变异信息为T  >  G； 该位点GG基因型个体血小板数 （PLT） 极显著高于GT或TT基因型个体， GG基因型个体的低 氧耐受和高原适应能力显著高于GT或T T基因型个 体。 2.权利要求1所述的SNP标记位点在检测牛高原适应能力或选育耐高原低氧环境的牛 中的应用。 3.权利要求1所述的SNP标记位点在制备检测牛高原低氧环境适应性或选育耐高原低 氧环境牛的试剂盒中的应用。 4.一种检测牛低氧环境适应性的方法， 其特征在于： 以待测牛的全基因组DNA为模板， 检测权利要求 1若该位点为GG基因型， 则待测牛的低氧耐受和高原 适应能力较好， 判定为低 氧耐受优势型； 若 该位点为GT或TT基因型， 则待测牛的低氧耐受和高原 适应能力较弱， 判定 为低氧耐受劣势型。 5.一种选育耐高原低氧环境牛的方法， 其特征在于： 通过检测权利要求1所述的SNP标 记位点， 选择THPO基因G1316T位 点基因型为G G型的个体作为育种亲本 。 6.用于检测权利 要求1中所述的SNP标记位点的PCR引物， 其特征在于： 上游引物THP O‑F 为CCAGGGACAGAAGAGAC； 下游引物THPO ‑R为GGCGAACTCAGAGAT TG。 7.如权利要求6所述的PCR引物， 其特征在于： 引物PCR扩增反应条件如下： 95℃预变性   5min； 95℃变性  45s， 59℃退火  45s， 72℃延伸45s， 3 5个循环； 72℃后延伸8mi n。 8.一种辅助选育耐高原低氧环境牛的试剂盒， 其特征在于： 包含权利要求6或7所述的 PCR引物。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114606325 A 2与牛血小板生成相关的SNP标记位点与应用 技术领域 [0001]本发明属于基因工程领域， 具体的说， 涉及与牛血小板生成相关的SNP标记位点及 其应用。 背景技术 [0002]THPO是调节血小板生成的主要细胞因子。 该因子控制巨核系祖细胞的增殖和分 化， 对于产生和维持正常水平的血小板生 成是必不可少的。 THPO产生的主要来源是肝脏(在 肝细胞中)、 肾脏(在曲管细胞中)、 骨髓(在基质细胞中)和脾脏， 在骨骼肌、 卵巢和睾丸中也 检测到THPO基因的表达。 此外， 可能受到局部限制， 这种细胞因子也在中枢神经系统(CNS) 中产生。 THPO基因位于染色体3q2上， 编码一个由353个氨基酸组成的糖蛋白， 分子量为 30kDa， 从结构上看， 成熟的THPO呈现两个结构域(Fosteret al.1994)。 人THPO功能区 (hTHPO(163))的晶体结构由N端163个氨基酸组成， 有一个氨基末端的四股螺旋束结构域 (残基1‑152)， 它具有受体结合能力、 信号活性和支持细胞增殖的作用； 此外， 还有一个羧基 末端结构域(残基153 ‑335)， 它与任何已知的蛋白质没有同源性， 虽然它的缺 失不会影 响蛋 白质的体外活性， 但它可以促进分子的分泌， 并控制THPO经肠外给药后的生物利用度， 且 THPO表达失调与心血 管疾病和血 液疾病有关。 [0003]牦牛和藏黄牛是分布于青藏高原及其毗邻地区的土著畜种， 是牛属动 物中能适应 高寒、 高海拔气候的珍稀遗传资源。 与低地黄牛相比， 牦牛和藏黄牛能很好的适应青藏高原 极度缺氧等恶劣的自然环境， 并在生理、 生化和形态学上形成了稳定的适应高原低氧的独 特特征和机制， 被认为是研究哺乳动物高原适应性的典型动物。 近几年， 通过对高原土著居 民和高原动物的研究， 已发掘了许多低氧适应相关基因， 但目前国内对THPO基因在动物低 氧适应上的作用未 见相关报道。 发明内容 [0004]基于现有技术背景， 本发明提供了与牛血小板生成相关的SNP标记位点及其及其 特异性引物与应用。 [0005]为实现上述目的， 本发明是通过如下技 术方案实现的： [0006]本发明提供了与牛血小板生成相关的SNP标记位点， 该SNP标记位点位于牛第1号 染色体THPO基因第 4内含子1316bp处， G1316T位点(chr1： 83431707)， 碱基变异信息为T>G； 该位点GG基因型个体血小板数(PLT)极显著高于GT或TT基因型个体， GG基因型个体的低氧 耐受和高原适应能力显著高于GT或T T基因型个 体。 [0007]上述SNP标记位 点在检测牛高原适应能力或选 育耐高原低氧环境的牛中的应用。 [0008]上述SNP标记位点在制备检测牛高原低氧环境适应性或选育耐高原低氧环境牛的 试剂盒中的应用。 [0009]本发明还提供了一种检测牛低氧环境适应性的方法： 以待测牛的全基因组DNA为 模板， 检测上述SNP  标记位点； 若该位点为GG基因型， 则待测牛的低氧耐受和高原 适应能力说　明　书 1/10 页 3 CN 114606325 A 3