(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210025079.8 (22)申请日 2022.01.11 (71)申请人 福建省亚热 带植物研究所 地址 361002 福建省厦门市湖里区嘉 禾路 780号 (72)发明人 叶婷　郑国华　郭莺　孟红岩　 (74)专利代理 机构 北京诚呈知识产权代理事务 所(普通合伙) 11883 专利代理师 杨凌波 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) (54)发明名称 一种用于检测西番莲潜 隐病毒的特异性引 物及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测西番莲潜 隐病 毒的特异性引物及其应用。 特异性引物的核苷酸 序列如序列表SEQ  ID NO： 3和SEQ  ID NO： 4所示。 本发明提供了用于西番莲潜隐病毒检测的引物 对， 该引物对具有通用性， 能用于不同品种西番 莲、 不同西番 莲属植物以及外属植物(如柿属)上 的西番莲潜隐病毒的检测具， 同时建立了西番莲 潜隐病毒的分子检测体系， 扩大了西番莲的病毒 病害检测范围， 同时对于防控西番莲病毒病害检 测、 开发病毒分子诊断技 术有重要指导 意义。 权利要求书1页 说明书4页 序列表2页 附图2页 CN 114480734 A 2022.05.13 CN 114480734 A 1.一种用于检测西番莲潜隐病毒的DNA片段， 其特征在于， 所述DNA片段的序列如序列 表SEQ ID NO： 1或SEQ  ID NO： 2所示。 2.一种用于检测西番莲潜隐病毒的特异性引物， 其特征在于， 其核苷酸序列如序列表 SEQ ID NO： 3和SEQ  ID NO： 4所示。 3.包含权利要求2所述检测西番莲潜隐病毒的特异性引物的试剂盒。 4.一种西番莲潜隐病毒的检测方法， 其特征在于， 采用PCR扩增方法， 扩增引物采用如 序列表SEQ  ID NO： 3和SEQ  ID NO： 4所示的引物对； 95℃3min； 30个循环， 95℃3 0s， 57℃3 0s， 68℃1mi n； 68℃延长10mi n； 通过1.5％琼脂糖凝胶电泳对扩增产物进行检测， 并送测序， 若出现扩增产物为837bp 的样品， 即为西番莲潜隐病毒。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114480734 A 2一种用于 检测西番莲潜隐病毒 的特异性引物及其应用 技术领域 [0001]本发明属于植物病原鉴定及病害防控技术领域， 具体涉及一种用于检测西番莲上 西番莲潜隐病毒的特异性引物及其检测体系。 背景技术 [0002]西番莲(Passiflora  edulis)是西番莲科(Passifloraceae)西番莲属 (Passiflora)植物， 又名百香果、 热情果， 是热带亚热带地区重要食药两用水果。 我国南方 地区如福建、 广西、 广东等地均有栽培。 主栽品种有黄果种台农1号、 黄金果及紫果种紫香1 号、 满天星等。 [0003]西番莲潜隐病毒(Passiflora  latent virus,PLV)是香石竹潜隐病毒属 (Carlavirus)成员， 线性、 正单链RNA基因组。 该病毒已报道能够侵染柿属的柿树 (Persimmon)以及观赏型西番莲属植物(Passiflora  tarminiana)， 尚未有其侵染西番莲 (Passiflora  edulis)的报道。 2016 ‑2019年， 在对我国南方地区西番莲上花叶病的病害调 查中发现表现轻微斑驳症状的植株， 经血清学及分子生物学检测， 排除了能够引起花叶症 状的黄瓜花叶病毒属、 马铃薯Y病毒属及 双生病毒属病毒的存在。 [0004]病毒病害的快速检测为病害的防控提供了技术条件， 对于西番莲上病毒病原的检 测鉴定， 目前主要有生物学检测、 电子显微镜、 血清学检测及分子生物学检测等技术。 RT ‑ PCR是重要的分子生物学检测手段， 因其操作简便、 灵敏度高、 特异性强， 应用于很多RNA病 毒的检测鉴定 。 [0005]本发明建立了西番莲潜隐病毒检测的RT ‑PCR体系， 对获得该病毒基因组信息及 检 测鉴定提供技 术支撑， 对于防控西番莲病毒病害防控有一定的指导 意义。 发明内容 [0006]本发明的目的在于提供一种用于检测西番莲潜隐病毒的特异性引物及其应用。 [0007]BLAST比对所有已登录GeneBank上的PLV核苷酸序列， 包括在柿树及观赏型西番莲 属植物上的PLV核苷酸序列， 根据PLV外壳蛋 白基因(coat  protein， cp)序列的保守区段设 计特异性检测引物对(表1)， 该引物对能够用于西番莲(Passiflora  eduis)、 龙珠果 (Passiflora  foetida)、 香蕉西番莲(Passiflora  tarminiana)等西番莲属植物以及柿树 (Persimmon)上西番莲潜隐病毒的检测鉴定 。 [0008]一种用于检测西番莲潜隐病毒的DNA片段， 所述DNA片段的序列如序列表SEQ  ID  NO： 1所示或SEQ  ID NO： 2所示。 [0009]一种用于检测西番莲潜隐病毒的特异性引物， 其核苷酸序列如序列表SEQ  ID NO： 3和SEQ ID NO： 4所示。 [0010]包含所述检测西番莲潜隐病毒的特异性引物的试剂盒。 [0011]一种西番莲潜隐病毒的检测 方法， 采用PCR扩增 方法， 扩增引物采用如序列表SEQ   ID NO： 3和SEQ  ID NO： 4所示的引物对；说　明　书 1/4 页 3 CN 114480734 A 3