(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210034897.4 (22)申请日 2022.01.12 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114277126 A (43)申请公布日 2022.04.05 (73)专利权人 安徽中医药大学第一附属医院 （安徽省中 医院） 地址 230031 安徽省合肥市梅 山路117号 (72)发明人 万磊　刘健　黄传兵　王坤　姜辉　 (74)专利代理 机构 合肥辉达知识产权代理事务 所(普通合伙) 3416 5 专利代理师 汪守勇 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12N 15/11(2006.01)A61K 31/7105(2006.01) A61K 31/7088(2006.01) A61P 19/02(2006.01) A61P 29/00(2006.01) (56)对比文件 CN 112779327 A,2021.0 5.11 US 2014141986 A1,2014.0 5.22 CN 110121562 A,2019.08.13 审查员 谢庆宁 (54)发明名称 hsa_miR-486-5p联合ETS-1基因在类风湿关 节炎诊断治 疗试剂中的应用 (57)摘要 本发明涉及hsa_miR ‑486‑5p联合ETS ‑1基因 在类风湿关节炎诊断治疗试剂中的应用。 根据提 取的总RNA序列， 设计并合成特异性PCR引物， 利 用Rt‑qPCR技术， 发现hsa_miR ‑486‑5p在类风湿 关节炎(RA)患者外周血单个核细胞中的表达显 著升高， 而ETS ‑1显著降低。 本发明同时设计并合 成特异性过表 达hsa‑miR‑486‑5p mimics和小干 扰该基因si ‑ETS‑1序列， 能够通过调控炎性细胞 因子， 显著抑制滑膜成纤维细胞(FLS)的增殖及 TNF‑α所诱导的FLS的炎症反应。 本发明所建立 的联合检测机制， 可以应用于类风湿 关节炎辅助 诊断试剂、 分子靶向治疗试剂或者预后评估试剂 等方面。 权利要求书1页 说明书10页 序列表4页 附图7页 CN 114277126 B 2022.09.02 CN 114277126 B 1.hsa_miR ‑486‑5p类似物联合si ‑ETS‑1在制备类风湿关节炎治疗药物中的应用， 其特 征在于， 所述hsa_miR ‑486‑5p类似物的核苷酸序列为SEQ  ID NO.5或SEQ  ID NO.6， 其用于 在滑膜成纤维细胞中过表达hsa_miR ‑486‑5p基因； 所述si ‑ETS‑1的核苷酸序列为SEQ  ID  NO.7或SEQ  ID NO.8， 其用于在滑 膜成纤维细胞中使ETS ‑1基因被干扰。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114277126 B 2hsa_miR‑486‑5p联合ETS ‑1基因在类风湿关节炎诊断治疗试 剂中的应用 技术领域 [0001]本发明属于风湿免疫病分子生物学领域， 具体涉及一种hsa_miR ‑486‑5p联合ETS ‑ 1基因在类风湿关节炎诊断治疗 试剂中的应用。 具体而言， 本发 明涉及微小hsa_miR ‑486‑5p 基因及其靶 标基因mRNA  ETS‑1在制备RA辅助诊断试剂、 分子靶向治疗 试剂或者预后评估 试 剂中的应用。 背景技术 [0002]类风湿关节炎(RA)是一种累及周围关节为主的多系统性、 炎症性的自身免疫性疾 病。 RA疾病发生发展过程中伴 随着机体免疫细胞增殖和凋亡动态的失衡， 氧化应激激活及 包括众多信号通路在内的多种信号传导通路失衡， 导致免疫炎症的发生， 最终促进RA疾病 的发生发展。 RA发病机制目前仍不明确。 风湿性疾病主要表现为自身抗原免疫反应异常引 起的局部或全身炎症症状， 而且大部分疾病病因和发病机制尚不完全清楚， 早期诊断困难， 治疗效果不佳。 因此， 寻找RA早期诊断、 靶向治疗和预后评估的生物标记物， 对RA的治疗及 预后具有重大的意 义。 [0003]随着近年来高通量基因测 序技术的发展， 对于RA基因表达谱的研究越来越受到学 者关注。 微小核糖核酸MicroRNA(miRNA)是一种小的内源性非编码RNA分子， 大约由21 ‑25个 核苷酸组成。 miRNA起转录后负调控的分子， 参与生命过程中一系列重要进程， 包括发育进 程， 造血过程， 器官形成， 凋亡， 细胞增殖和肿 瘤的发生。 这些小的miRNA通常靶向一个或者 多个mRNA， 通过翻译 水平的抑制或断裂靶 标mRNAs而调节基因的表达。 作为一组新的潜在的 疾病诊断和治疗的靶分子， 已成为了生物医学研究 的前沿热点。 生物信息学预测显示， 在哺 乳动物， miRNA虽然占不到2％蛋 白编码基因， 却可以调控1/3的mRNAs。 miRNA可以调控人类 60％的蛋白编码基因， 表明其功能强大。 作为新的特异性基因调节小分子， miRNA不仅有助 于阐明类风湿关节炎的发病机制， 在类风湿关节炎的临床诊断和治疗上也无疑将具有重要 的应用前景。 首先， 由于miRNA在不同类风湿 关节炎中的特异表达模式， 将有 可能以mi RNA作 为类风湿关节炎的新的生物标记或诊断指标； 其次， 由于单个miRNA具有多个mRNA靶点， 而 多个miRNA又可协同调控某一共同的通路， 可以针对疾病的某一特定通路寻找更为有效的 干预方法。 由于miRNA数量众多， 具有广泛的生物学作用， 目前的研 究仅是冰山一角。 miRNA 在类风湿关节炎中还有很多新的作用尚待发现， 明确miRNA的靶基因及其对靶基因的作用 机制可以帮助人们更加深人地了解类风湿关节炎的发病机制， 使其作为新的诊断标志和治 疗靶点应用于临床。 发明内容 [0004]针对目前RA缺乏诊断标志物， 缺乏治疗药物靶向性、 针对性， 本发明提供了一种 hsa_miR‑486‑5p联合ETS ‑1基因在类风湿关节炎诊断治疗试剂中的应用。 [0005]首先， 本发明提供了一对用于检测hsa_miR ‑486‑5p基因的引物对， 该引物对核苷说　明　书 1/10 页 3 CN 114277126 B 3