(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210030335.2 (22)申请日 2022.01.12 (71)申请人 四川省肿瘤医院 地址 610000 四川省成 都市武侯区人民南 路4段55号 (72)发明人 王婷　龙方懿　肖洪涛　张晞倩　 林红　 (74)专利代理 机构 成都环泰专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 51242 专利代理师 李辉　李斌 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A61K 45/00(2006.01) A61K 31/7088(2006.01)A61P 35/00(2006.01) A61P 15/14(2006.01) (54)发明名称 一种乳腺癌的环状RNA生物标志 物及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种乳 腺癌的环状RNA生物标 志物circ ‑GLIS1及其应用， 所述环状RNA  circ‑ GLIS1的结构为SEQ  No.1所示的核苷酸序列经反 向剪接形成的3’端和5’端首尾相连的环状结构， 所述试剂盒包含用于定量检测所述生物标志物 的试剂。 本发明发现乳腺肿瘤细胞中circ ‑GLIS1 的表达水平显著升高， 且其过表达后可显著增加 乳腺肿瘤的增殖和侵袭； 因此， circ ‑GLIS1可作 为诊断乳腺癌的分子标志物， 使乳腺癌诊断更加 准确、 快速， 为circ ‑GLIS1用于乳腺癌的诊断以 及预后分析提供新的理论依据和新的标志 物。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图5页 CN 114438207 A 2022.05.06 CN 114438207 A 1.环状RNA  circ‑GLIS1含量的检测试剂在制 备乳腺癌的诊断试剂盒中的应用， 其中， 所述环状RNA  circ‑GLIS1的结构是由SEQ  No.1所示的核苷酸序列经反向剪接形成的3 ’端 和5’端首尾相连的环状结构； 所述检测试剂包含能够扩增所述环状RNA  circ‑GLIS1的引物 对， 所述引物对的碱基序列选自如SEQ  No.2–5中任意两种所示的序列。 2.一种乳腺癌的诊断试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包含有能扩增所述环状RNA   circ‑GLIS1的引物对， 所述环 状RNA circ‑GLIS1的结构是由SEQ  No.1所示的核苷酸序列经 反向剪接形成的3 ’端和5’端首尾相连的环状结构， 所述引物对的碱基序列选自如SEQ   No.2–5中任意两种所示的序列。 3.根据权利 要求1所述的环状RNA  circ‑GLIS1含量的检测试剂在制备乳腺癌的诊断试 剂盒中的应用或权利要求2所述的一种乳腺癌的诊断试剂盒， 其特征在于， 所述引物对包含 上游引物和下游引物， 所述上游引物的碱基序列选自如SEQ  No.2–3中任意一种所示的序 列， 所述下游引物的碱基序列选自如SEQ  No.4–5中任意一种所示的序列。 4.环状RNA  circ‑GLIS1在制 备抗乳腺癌药物组合物中的用途， 其特征在于， 所述环状 RNA circ‑GLIS1在制备用于抑制乳腺癌细胞增殖和迁移的药物或治疗乳腺癌的药物中的 用途； 所述环状RNA  circ‑GLIS1的结构是由SEQ  No.1所示的核苷 酸序列经反向剪接形成的 3’端和5’端首尾相连的环状结构。 5.根据权利要求4所述的环状RNA  circ‑GLIS1在制 备抗乳腺癌药物组合物中的用途， 其特征在于， 所述药物针对的靶点为环状RNA  circ‑GLIS1， 所述药物 为寡核苷 酸、 寡核苷酸 表达载体或小分子化 合物。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114438207 A 2一种乳腺癌的环状RNA生物标志物及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及 乳腺癌诊断技术领域， 具体涉及一种环状 RNA circ‑GLIS1生物标志物 在制备乳腺癌的诊断试剂中的应用。 背景技术 [0002]乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤， 是全世界女性癌症死亡的主要原因。 目前乳腺 癌发病率逐年上升， 且其综合治疗手段(包括手术、 化疗和放疗)具有较大的个体化差异及 毒副作用， 对患者生存质量产生很大影响。 因此， 寻找新的乳腺癌生物标志物， 进行靶向治 疗和个体化治疗具有极其重要的临床意 义。 [0003]环状RNA(circular  RNA， circRNA)是一类新型非编码RNA， 其结构稳定且具有显著 的组织和疾病特异性， 研 究发现， circRNA参与了多种肿 瘤的发生、 发展、 侵袭和转移， 是理 想的候选肿瘤生物标志物及肿瘤治疗靶点。 在机制上， circRNA 的功能包括作为microRNA (miRNA)的海绵调控基因表达以及与RNA结合蛋白(RBPs)结合或翻译成蛋白。 CircRNA富含 miRNA结合位点， 在细胞中起到miRNA海绵的作用， 进而解除miRNA对其靶基因的抑制作用， 升高靶基因的表达水平， 这 一作用机制被称为 竞争性内源RNA(ceRNA)机制。 [0004]随着生物信息学的发展， circ RNA在胃癌、 肺癌肿瘤发生发展中的作用机制研究也 取得了重大进展， 但circRNA在乳腺癌中的作用机制还有待进一步探索。 目前， 仍然缺少特 异性的circRNA生物标志 物高效地检测乳腺癌。 发明内容 [0005]有鉴于此， 本 发明要解决的技术问题在于提供一种快速、 灵敏、 特异性的乳腺癌的 诊断指标及其相应的诊断试剂盒。 [0006]为实现上述目的， 本专利采取的技 术方案包括以下几个方面： [0007]在第一个方面， 本发明提供了一种环状RNA  circ‑GLIS1(hsa_circ_0002079)， 所 述环状RNA的结构为SEQ  No.1所示的核苷 酸序列经反向剪接形成的3 ’端和5’端首尾相连的 环状结构。 需要说明的是， 本申请的发明人首次发现环状RNA  circ‑GLIS1在基因组定位为 chr1:54059780 ‑54065951， 对应的线性基因是GLIS1(NM_147193.4)； 该环状RNA由基因 GLIS1的第2、 3个外显子环化而来， 长1061个碱基； 目前尚无circ ‑GLIS1在乳腺癌的功能应 用的报道。 [0008]在第二个方面， 本发明提供了一种乳腺癌的分子标志物， 所述分子标志物为环状 RNA circ‑GLIS1。 本申请的发明人经实验发现， circ ‑GLIS1在乳腺癌中表达量显著上调， 且 过表达circ ‑GLIS1可促进乳腺癌的增殖和转移， 表明circ ‑GLIS1可作为乳腺癌诊断的新的 分子标志 物。 [0009]在第三个方面， 本发明提供了环状 RNA circ‑GLIS1含量的检测试剂在制备乳腺癌 的诊断试剂盒 中的应用， 其中， 所述检测试剂为能扩增出circ ‑GLIS1的引物对， 所述引物对 的碱基序列选自如SEQ  No.2–5中任意两种所示的序列。说　明　书 1/5 页 3 CN 114438207 A 3