(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210038771.4 (22)申请日 2022.01.13 (71)申请人 博尔诚 （北京） 科技有限公司 地址 100176 北京市大兴区北京经济技 术 开发区宏达南路18号院3号楼10层 (72)发明人 吴宁宁　韩晓亮　连明　王小奇　 刘栓平　魏闯　杨亚东　 (74)专利代理 机构 北京彩和律师事务所 1 1688 代理人 闫桑田 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于结直肠癌筛查的标志物、 探针组合物及 其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于结直肠癌筛查的标 志物、 探针组合物及其应用， 所述标志物选自28 个标志物的任一种。 本发明使用所述的标志物， 能够灵敏和特异地检测该基因的甲基化的状态， 从而可以用于对外周血游离DNA的检测， 并且， 本 发明所述的组合物以非侵入性的方式用于无症 状人群的筛查， 降低了侵入性检测造成的危害， 所述的组合物具有更高的灵敏度和准确度， 能够 实现实时监测。 权利要求书2页 说明书33页 序列表55页 CN 114395628 A 2022.04.26 CN 114395628 A 1.一种用于检测结直肠癌的标志物， 所述标志物对应基因选自下述中的一种： FBLIM1、 KIAA1522、 A GBL4、 VAV3、 NGF ‑AS1、 FAM72B、 FAM72A、 CD34、 ARHGAP22、 CEP164、 B 4GALNT1、 EVL、 PTPRS、 ZNF566、 ZNF829、 RTN4、 PPP1R16B、 PRRT3 ‑AS1、 FAM184B、 TRAPPC11、 PDE8B、 RSPO3、 CAHM、 QKI、 AEBP1、 NRCAM和GPR85 。 2.根据权利 要求1所述的标志物， 其 中， 所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ  ID NO:1‑ SEQ ID NO:28所示的一种， 优选所述标志 物为甲基化后的标志 物。 3.一种探针组合物， 所述探针组合物包含靶向权利要求1或2所述标志物甲基化的探 针。 4.根据权利要求3所述的探针组合物， 其中， 所述探针组合物包含高甲基化的第 一探针 组合物和 低甲基化的第二探针组合物， 所述第一探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的CG 高甲基化的区域杂交， 所述第二探针组合物用于与经重亚硫酸盐转化的C G低甲基化的区域 杂交； 优选的， 所述第一探针组合物包括n个探针， 所述n个探针与经重亚硫酸盐转化的CG高 甲基化的区域的正 义链或反义链的每 个核苷酸杂交； 优选的， 所述第二探针组合物包括m个探针， 所述m个探针与经重亚硫酸盐转化的CG低 甲基化的区域的正 义链或反义链的每 个核苷酸杂交； 优选的， n和m均是1 ‑10中的任意整数； 优选的， 第n ‑1个探针和第n个探针之间有x1个核苷酸重叠， 优选的， x1为0‑100中的任意 整数； 优选的， 第m ‑1个探针和第m个探针之间有x2个核苷酸重叠， 优选的， x2为0‑100中的任意 整数； 进一步优选的， 所述第一探针组合物包括如SEQ  ID NO:29‑84中的一种或两种， 所述第 二探针组合物包括如SEQ  ID NO:85‑140中的一种或两种。 5.标志物在制备用于检测结直肠癌的试剂 盒中的用途， 所述标志物对应基因选自下述 中的一种： FBLIM1、 KIAA1522、 AGBL4、 VAV3、 NGF ‑AS1、 FAM72B、 FAM72A、 CD34、 ARHGAP22、 CEP164、 B4GALNT1、 EVL、 PTPRS、 ZNF566、 ZNF829、 RTN4、 PPP1R16B、 PRRT3 ‑AS1、 FAM184B、 TRAPPC11、 PDE8B、 RSPO3、 CAHM、 QKI、 AEBP1、 NRCAM和GPR85 。 6.根据权利要求5所述的用途， 其 中， 所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ  ID NO:1‑28 所示的一种， 优选所述标志 物为甲基化后的标志 物； 优选的， 所述探针组合物用于靶向结直肠癌的 甲基化后的标志 物； 优选的， 所述探针组合物为权利要求3或4所述的探针组合物。 7.一种用于结直肠癌检测的组合物， 所述组合物包括用于检测选自下述标志物对应基 因中任一种甲基化的核 酸： FBLIM1、 KIAA1522、 AGBL4、 VAV 3、 NGF‑AS1、 FAM72B、 FAM72A、 CD34、 ARHGAP22、 CEP164、 B4GALNT1、 EVL、 PTPRS、 ZNF566、 ZNF829、 RTN4、 PPP1R16B、 PRRT3 ‑AS1、 FAM184B、 TRAP PC11、 PDE8B、 RSPO3、 CAHM、 QKI、 AEBP1、 NRCAM和GPR85 。 8.根据权利 要求7所述的组合物， 其 中， 所述标志物的核苷酸序列选自如SEQ  ID NO:1‑ SEQ ID NO:28所示的一种。 9.根据权利要求7或8所述的组合物， 其中， 所述核酸包括权利要求3或4所述的探针组 合物；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114395628 A 2优选的， 所述核酸包括： 引物， 所述引物为所述标志物的靶序列中的至少9个核苷酸的片段， 所述片段包含至少 一个CpG二核苷酸序列； 优选的， 所述核酸还 包括： 探针， 所述探针为在中等严紧或严紧条件下与所述标志物的靶序列中的至少15个核苷 酸片段杂交， 所述片段包 含至少一个CpG二核苷酸序列； 优选的， 所述组合物还包括将标志物的靶序列的5位未甲基化胞嘧啶碱基转化为尿嘧 啶的试剂； 优选的， 所述用于检测标志 物的靶序列甲基化的核酸还 包括： 优先与处于非甲基化状态的靶序列结合的阻断剂。 10.一种试剂盒， 其包含权利要求1或2所述的标志物或者权利要求3或4所述的探针组 合物或者权利要求7 ‑9中任一项所述的组合物。 11.一种芯片， 其包含权利要求1或2所述的标志物或者权利要求3或4所述的探针组合 物或者权利要求7或8所述的组合物。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114395628 A 3