(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210039504.9 (22)申请日 2022.01.13 (71)申请人 中国科学院武汉植物园 地址 430000 湖北省武汉市东湖高新 技术 开发区九峰一路201号 (72)发明人 张琼　钟彩虹　郑浩　 (74)专利代理 机构 武汉宇晨专利事务所(普通 合伙) 42001 专利代理师 龚莹莹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 猕猴桃品种分子鉴定的MNP核心引物组合及 其应用 (57)摘要 本发明属于分子生物学技术领域， 具体公开 了猕猴桃品种分子鉴定的MNP 核心引物组合及其 应用， 所述的引物组合如 表1所示。 本发 明提供了 347个MNP核心引物构成的引物组合可兼容二代 测序平台， 具备高效、 正确、 高重现性等特点， 满 足猕猴桃标准指纹数据构建的要求； 对猕猴桃待 测样本和对照品种鉴定， 能够准确鉴定所述待测 猕猴桃样本的真实性； 这套MNP位点具备高多态 性和可重复性， 能区分不同猕猴桃类群， 具有广 泛的应用范围。 权利要求书1页 说明书13页 序列表107页 附图2页 CN 114457180 A 2022.05.10 CN 114457180 A 1.猕猴桃品种分子鉴定的MNP核心引物组合， 所述的引物组合为位点编号MHT0001~  MHT0347对应的347对引物， 具体的引物序列如说明书表1所示。 2.权利要求1所述的引物组合在构建猕猴桃DNA指纹数据库中的应用。 3.权利要求1所述的引物组合在检测猕猴桃品种真实性中的应用。 4.权利要求1所述的引物组合在猕猴桃种质资源遗传多样性分析中的应用。 5.权利要求1所述的引物组合在猕猴桃分子 育种中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114457180 A 2猕猴桃品种分子鉴定的MNP核心引物组合及其应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学技术领域， 具体涉及猕猴桃D NA品种分子鉴定的MNP核心引 物组合及其应用。 技术背景 [0002]猕猴桃(Actinidia  chinensis)为猕猴桃属经济作 物， 果实营养丰富， 在 全球各地 广受欢迎 。 中国是猕猴桃属植物的原产地和猕猴桃遗传资源的原 始起源中心。 [0003]随着猕猴桃新品种的日益推出， 新品种的鉴定是亟待解决的一大难题。 仅通过树 势、 叶片形态、 花期、 花形态、 果 实外观等传统手段对猕猴桃品种进 行鉴定， 难免受到环 境和 其他人为因素的影响。 对猕猴桃品种的不确定性， 限制了产业的健康持续 发展， 且苗木品种 不纯甚至错 误将造成果农经济效益 严重受损。 [0004]分子标记技术通过检测生物个体在基 因组上产生的变异， 从而对不同个体进行区 分， 是继形态标记和生化标记之后， 发展的一种较为理想的遗传标记。 DNA指纹鉴定技术由 于不受环境和人为因素影响， 且具有快速和准确的特性， 已成为 目前猕猴桃鉴定的重要手 段。 早期传统的DNA指 纹鉴定技术有RFLP、 RAPD、 ISSR、 SRAP标记法技术， 这些标记具有分型 不稳定、 基因型过多 无法分辨和非共显性等缺陷， 基本上没有被纳 入品种鉴定中。 经过近几 十年的发展， 最 终只有SSR和SNP标记鉴定技术被保留并应用品种鉴定中。 SSR标记法的有主 要优点是多态性高和共显性， 可在普通实验室进行电泳检测。 目前大部分的植物指纹图谱 和品种鉴定标准 都是基于SSR开 发， 但涉及到大规模样本检测时， 无法做到同时检测成百上 千的已知品种， 并且 涉及到近似品种筛选、 品种权认定和实质派生品种判断时， 不具有现实 的可行性， 因此SNP标记法在近年来被逐步应用于植物品种鉴定中。 SNP标记法主要是获得 单个核苷酸酸碱基序列， 因此不需要对照平行实验。 然而SNP也有一些自身固有的缺陷， 如 SNP标记是二态性标记， 单个标记区分能力有限， 所以需要检测大量的SNP位点才能实现精 确分型， 因而设计到高通量芯片技术。 基因芯片技术的生产工艺较为复杂， 生产成本较高， 不太适合普通实验和小作物等中使用， 推广力度有限。 [0005]MNP多态性是指在 基因组水平上有多个核苷酸引起的多态性。 MNP标记法技术主要 是基于高通量测序技术开发的检测特定基因组上一段区域内的由多个核苷酸多肽性的标 记法技术。 与SSR标记和SNP标记法相比， MNP标记法在构建植物指纹图谱和品种鉴定方面具 有以下优势： (1)等位基因丰富， 单个MNP位点上有2n种等位基因， 高于SSR和SNP； (2)MNP获 得的是碱基序列， 不需要平行对照实验； (3)MNP标记的等位基因型丰富， 品种区分能力强， 只需要少量的MNP标记就能实现品种鉴定， 减少了检测错误率； (4)可定量检测， 基于MNP位 点利用二代高通量测序重复抽样可对 特定等位基因进 行定量分析； (5)效率高， 利用二代高 通量测序仪可实现成百上千份样本的数百个MNP位点分型； (6)可进行实质性派生品种检 测。 [0006]鉴于以上优点和 特性， MNP标记法已广泛应用于水稻、 玉米、 番茄、 辣椒等作物中。 目前在猕猴桃中尚未有MNP标记指纹图谱 对品种鉴定的标准。说　明　书 1/13 页 3 CN 114457180 A 3