(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210034428.2 (22)申请日 2022.01.13 (71)申请人 四川省农业科 学院园艺研究所 地址 610000 四川省成 都市静居寺路20号 (72)发明人 宋海岩　孙淑霞　江国良　陈栋　 涂美艳　李靖　谢红江　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 代理人 苏士莹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种枇杷果肉颜色的分子标记引物对、 试剂 盒和检测方法及应用 (57)摘要 本发明提供了一种枇杷果肉颜色的分子标 记引物对、 试剂盒和检测方法及应用， 涉及分子 标记辅助育种技术领域。 本发明所述分子标记引 物对， 基于枇杷八氢番茄红素合成酶基因 EjPSY2A在黄肉和白肉枇杷品种间的序列差异设 计得到， 利用所述 分子标记引物对进行PCR扩增， 当PCR扩增产物为小片段纯合带型材料的果实为 白肉， 而大片段纯合带型以及大片段与小片段杂 合带型材料的果实为黄肉， 可以有效地把黄肉和 白肉枇杷种质资源和杂交后代区分开来， 准确率 100％， 可用于枇杷果肉颜色的分子标记辅助育 种。 权利要求书1页 说明书7页 序列表1页 附图3页 CN 114262749 A 2022.04.01 CN 114262749 A 1.一种枇杷果肉颜色的分子标记引物对， 所述分子标记引物对包括PSY2A ‑1F和PSY2A‑ 1R的组合， 或P SY2A‑2F和PSY2A‑2R的组合； 所述PSY2A ‑1F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述PSY2A ‑1R的核苷酸序列如SEQ   ID NO.2所示； 所述PSY2A ‑2F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示， 所述PSY2A ‑2R的核苷酸序列如SEQ   ID NO.4所示。 2.根据权利要求1所述分子标记引物对， 其特 征在于， 所述 果肉颜色包括黄色和白色。 3.一种鉴定枇杷果肉颜色的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒中包括权利要求1或2所 述分子标记引物对和PCR扩增试剂。 4.根据权利要求3所述试剂盒， 其特 征在于， 所述PCR扩增试剂包括PCRMix。 5.一种鉴定枇杷种质的果肉颜色的方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 以枇杷种质的基 因组DNA为模板， 与权利要求1或2所述分子标记引物对或权利要求3或4所述试剂盒中的分 子标记引物对配制PCR反应 体系， 进行PCR扩增， 对PCR扩增产物进行基因分型； 当PCR扩增产物显示为300～400bp长度的一条带时， 为白色果肉； 当PCR扩增产物显示 为＞500bp长度的一条带时， 为黄色果肉； 当PCR扩增产物显示为300～400bp和＞500bp两条 带时， 为黄色果肉。 6.根据权利要求5所述方法， 其特征在于， 所述基因组DNA来源于枇杷种质的嫩叶或茎 尖。 7.根据权利要求5所述方法， 其特征在于， 所述PCR反应体系以25μL计， 包括： 1.0μL模 板， 12.5 μL  2×PCR Mix， 1.0 μL  10 μM的F引物， 1.0 μL10 μM的R引物和余 量的ddH2O。 8.根据权利 要求5所述方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的程序包括： 4℃预变性4min； 95 ℃变性1mi n， 55℃退火45s， 72℃延伸1mi n， 循环35次； 72℃延伸10mi n。 9.根据权利要求5所述方法， 其特征在于， 使用1％的琼脂糖凝胶电泳和/或8％的聚丙 烯酰胺凝胶电泳对所述PCR扩增产物进行基因分型。 10.权利要求1或2所述分子标记引物对或权利要求3或4所述试剂 盒在分子标记辅助培 育目标颜色果肉枇杷种质中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114262749 A 2一种枇杷果 肉颜色的分子标记引物对、 试剂盒和检测方 法及 应用 技术领域 [0001]本发明属于分子标记辅助育种技术领域， 具体涉及一种枇杷果肉颜色的分子标记 引物对、 试剂盒和检测方法及应用。 背景技术 [0002]枇杷(Eriobotrya  japonica  Lindl.)是原产于我国四川大渡河流域的特色水果， 其果实甜酸适口、 柔软多汁， 受到世界各国消费者的喜爱。 枇杷品种丰富多样， 生产上常依 据果肉颜色将枇杷品种划分为黄肉枇杷和白肉枇杷两种类型。 黄肉枇杷果 肉较紧密， 果皮 较厚， 较耐贮运， 抗逆性强， 平均单果重较大， 而白肉枇杷肉质细 嫩、 汁多味甜， 因其风味好、 口感佳而更受消费者的青睐。 [0003]果肉颜色是枇杷果实的重要的农艺性状， 选育不 同果肉颜色的枇杷新品种/系成 为果树育种家共同追求的目标。 但枇杷杂交实生苗童期较长， 基于果 肉颜色性状的枇杷育 种材料筛选需耗费育种者大量的时间和精力。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种枇杷果肉颜色的分子标记引 物对、 试剂盒 和检测方法及应用， 利用所述分子标记可准确的将黄肉和白肉枇杷种质资源区分。 [0005]为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技 术方案： [0006]本发明提供了一种枇杷果肉颜色的分子标记引物对， 所述分子标记引物对包括 PSY2A‑1F和PSY2A‑1R的组合， 或P SY2A‑2F和PSY2A‑2R的组合； [0007]所述PSY2A ‑1F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述PSY2A ‑1R的核苷酸序列如 SEQ ID NO.2所示； [0008]所述PSY2A ‑2F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示， 所述PSY2A ‑2R的核苷酸序列如 SEQ ID NO.4所示。 [0009]优选的， 所述 果肉颜色包括黄色和白色。 [0010]本发明还提供了一种鉴定枇杷果肉颜色的试剂盒， 所述试剂盒中包括上述分子标 记引物对和PCR扩增试剂。 [0011]优选的， 所述PCR扩增试剂包括PCR  Mix。 [0012]本发明还提供了一种鉴定枇杷种质的果肉颜色的方法， 包括以下步骤： 以枇杷种 质的基因组DNA为模板， 与上述分子标记引物对或上述试剂盒 中的分子标记引物对配制P CR 反应体系， 进行PCR扩增， 对PCR扩增产物进行基因分型； [0013]当PCR扩增产物显示为300～400bp 长度的一条带时， 为白色果肉； 当  PCR扩增产物 显示为＞500bp长度的一条带时， 为黄色果肉； 当PCR扩增产物显示为300～400bp和＞500bp 两条带时， 为黄色果肉。 [0014]优选的， 所述基因 组DNA来源于枇杷种质的嫩叶或茎尖。说　明　书 1/7 页 3 CN 114262749 A 3